同时产PER-1型和TEM-1型β内酰胺酶铜绿假单胞菌的检出

目的 分析多重耐药铜绿假单胞菌临床株 (编号 0 10 7)对 β内酰胺类抗生素耐药情况及其原因。 方法 用改良三维试验分析 0 10 7株产生的 β内酰胺酶表型 ,以碱裂解法提取质粒 ,用聚合酶链反应 (PCR)方法扩增质粒的酶基因型别 ,并对阳性产物测序。结果 0 10 7号铜绿假单胞菌临床株产生超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs) ,携有blaPER - 1基因 ,同时还有blaTEM - 1型基因。结论 0 10 7号菌株耐 β内酰胺类抗生素耐药的可能原因是产生PER - 1型的ESBLs和TEM - 1型的广谱酶。

一株同时产OXA-23型碳青霉烯水解酶和PER-1型超广谱β-内酰胺酶的鲍曼不动杆菌

目的 分析多重耐药鲍曼不动杆菌对 β 内酰胺耐药的原因及其耐药基因的转移方式。 方法 用等电聚焦电泳试验和三维试验分析多重耐药鲍曼不动杆菌临床菌株所产 β 内酰胺酶 ,并进行初步分类 ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增和产物测序方法确认 β 内酰胺酶基因 ,用PCR扩增整合子全可变区和质粒接合实验来判定其耐药基因的转移方式。结果 该临床菌株产超广谱 β 内酰胺酶 ,经分子生物学方法证实有blaPER 1基因 ,同时还有blaOXA 2 3 基因和aacA4基因。结论 发现一株产OXA 2 3型碳青霉烯酶和可转移的PER 1型超广谱 β 内酰胺酶的鲍曼不动杆菌 ,blaPER

PER-1型超广谱β-内酰胺酶在铜绿假单胞菌中的流行分析

目的调查超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)以及具碳青霉烯酶活性的OXA酶在铜绿假单胞菌中的流行状况。方法针对1997～2003年间本院收集的具临床意义的铜绿假单胞菌,采用8对通用Class A和Class D类超广谱β-内酰胺酶基因引物对其进行聚合酶链反应(PCR),根据结果再进行长片段引物扩增和序列测定;对PCR扩增阳性株与受体菌利福平耐药铜绿假单胞菌PU21行转移接合试验;采用琼脂平皿稀释法测定所有受试菌的MIC;运用脉冲场凝胶电泳(PF-GE)方法确定菌株间的遗传相关性。结果47株临床分离铜绿假单胞菌中共检出28株PER阳性菌株,经部分长片段产物序列测定证实为PER-1型超广谱β-内酰胺酶;该产酶菌株经转移接合试验无法将耐药性传递给受体菌;药敏结果显示耐药表型与基因型间有很好相关性,对哌拉西林和头孢他啶高度耐药,同时产酶株对亚胺培南呈现100%的耐药性,对哌拉西林-三唑巴坦亦有一定程度的耐药;PFGE结果显示各菌株间存在垂直传播或有较近遗传相关性。结论本院存在产PER-1型ESBLs铜绿假单胞菌的流行。

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌医院内感染流行的分子机制研究

目的 研究耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的耐药谱特征及其医院内感染流行和耐药性产生的分子机制 ,为临床防治提供依据。方法 4株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌分离自 2 0 0 2年 10月至 2 0 0 3年 1月外科重症监护病房的感染患者 ,采用纸片扩散法及E test进行药物敏感性检测及MIC值测定 ,肠杆菌科基因组内重复一致序列聚集合酶链反应 (ERIC PCR)进行克隆株的DNA分型 ,耐药质粒转移及消除试验、等电聚焦电泳、PCR扩增 β 内酰胺酶基因及其克隆测序以识别其耐药基因和进行质粒定位。结果 4株菌除对头孢哌酮 /舒巴坦复合制剂的MIC值较低外 ,对头孢菌素类、氨基糖甙类和氟喹喏酮类等抗生素均显示出了较高水平的多重耐药性 ;DNA分型证实为同一克隆株 ;产OXA 2 3型碳青霉烯酶和PER 1型超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs) ;OXA 2 3定位在质粒上 ,PER 1定位在染色体上。结论 本组耐亚胺培南鲍曼不动杆菌为多重耐药株 ,同一克隆株在不同感染个体间的相互传播导致了本次医院内感染的流行 ,产OXA 2 3和PER 1型 β 内酰胺酶是其耐药性产生的重要原因。

北京和广州地区四家医院不动杆菌碳青霉烯酶基因型研究

目的调查北京、广州地区不动杆菌属对碳青霉烯类的耐药性,确定其耐药株产生的碳青霉烯酶的基因型。方法用WHONET5软件分析1999—2002年北京、广州两地不动杆菌的耐药性;从北京、广州4家医院收集对亚胺培南耐药且具有多重耐药性的不动杆菌39株;等电聚焦电泳测定酶的等电点;碱裂解法提取质粒;脉冲场凝胶电泳(PFGE)确定耐药株的亲缘关系;对TEM、SHV型基因及碳青霉烯酶基因OXA、IMP、VIM进行聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)及序列分析。结果近4年北京协和医院分离的鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药性在1.8%～8.5%之间。多重耐药(即3种以上的抗生素耐药)的菌株从1995年的5%升至2002年的67%,最常见的多重耐药模式为同时对头孢他啶、庆大霉素、哌拉西林/三唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦及环丙沙星耐药的菌株(占44%)。广州中山医科大学附属第一医院多重耐药株从1998年的20%升至2002年的57%,同时对上述4～5个药耐药的达35%。39株亚胺培南耐药株均不含质粒,接合试验证实亚胺培南的耐药基因不能转移。所有测定菌产多种β内酰胺酶:TEM1酶、高产AmpC酶、SHV型酶及pI为6.7,6.0的2个酶。PCR及序列分析证实35株菌产生OXA23型碳青霉烯酶(pI为6.7),有3株携带PER1型酶。PFGE发现在4家医院均有耐药株的克隆传播,并且常见于医院呼吸机相关肺炎及外科术后感染。结论北京、广州两地对亚胺培南耐药的不动杆菌,绝大多数产生OXA23型碳青霉烯酶,亚胺培南耐药株的增加主要由耐药克隆株播散所致。