视网膜色素变性遗传致病基因peripherin/RDS的突变筛选

目的 了解中国视网膜色素变性患者 (RP)中peripherin/RDS基因的突变谱及突变率。方法 应用聚合酶链-异源双链 -单链构象多态性 (PCR SSCP)及DNA序列分析技术对收集的 15个常染色体显性遗传视网膜色素变性家系和 5 5例散发视网膜色素变性患者peripherin/RDS基因的第一、第二外显子进行检测。结果 15个家系及 5 5例散发患者未检测到peripherin/RDS基因突变。结论 本研究所检测的视网膜色素变性患者与RDS基因无关。显示视网膜色素变性的遗传异质性。

常染色体显性遗传视网膜色素变性致病基因Peripherin/RDS的突变筛选

目的 :了解中国视网膜色素变性患者 (rtinitispigmentosa ,RP)中peripherin/RDS基因的突变谱及突变率。方法 :应用聚合酶链 -异源双链 -单链构象多态性 (polymerasechainreactionheteroduplex -singlestrandconformationpolymorphism ,PCR -SSCP)及DNA序列分析技术对收集的 1 5个常染色体显性遗传视网膜色素变性家系和 5 5例散发视网膜色素变性病人peripherin/RDS基因的第一、二外显子进行检测。结果 :1 5个家系及 5 5例散发病人未检测到peripherin/RDS基因突变。结论 :本研究所检测的视网膜色素变性病人与RDS基因无关。显示视网膜色素变性的遗传异质性。

视网膜色素变性中视紫红质与Peripherin/RDS基因的突变筛查

目的:迄今尚未见在国人中经序列分析确定该基因突变的报道。了解国人遗传性视网膜色素变性人群中视紫红质和peripherin/RDS基因的突变情况。方法:对83例遗传性视网膜色素变性先证者视紫红质基因全部编码区和peripherin/RDS部分编码区进行PCR扩增,用异源双链-SSCP法对扩增产物进行分析,寻找有差异电泳带纹的突变样本,序列分析确定突变。结果:83例中3例有视紫红质基因突变(Va1104Phe、Lys311Glu、Pro347Leu),其中两个新突变分别见于散发病例(Va1104Phe,杂合性)和常染色体隐性遗传视网膜色素变性家系(Lys311Glu,纯合性)。在peripherin/RDS基因中未发现突变。结论:在国人视网膜色素变性患者中视紫红质基因突变为常见致病原因。眼科学报1998;

一种独特的常染色体显性黄斑营养障碍为peripherin／RDS基因中169密码子上的一个天冬酰胺缺失所致

目的：描述1个罕见的患有常染色体显性遗传的、伴有视网膜周边沉着物的黄斑营养障碍疾病家系的临床和基因发现。

Ⅲ型神经中丝蛋白基因与中国高度近视人群相关性的研究

为了检测peripherin基因（PRPH）的突变与高度近视的病因有无相关关系,采用PCR-SSCP检测180例中国人高度近视先证者及60例正常人中PRPH基因所有外显子有无突变;对有突变的外显子区域进行克隆测序。结果表明,分析180例高度近视先证者PRPH基因编码区9个外显子及其邻近内含子,分别发现有下列核苷酸改变:密码子21TTC→TTT（Phe21Phe、4/180）,nt2138C→G（IVS3、1/180）,密码子277GCC→ACC（Ala277Thr、8/180）,密码子237CCA→TCA（Arg237stop、1/180）,密码子292GCG→GCA（Ala292Ala,1/180）,密码子361CUG→CUC（Leu361Leu,12/180）,密码子369AAA→AAG（Lys369Lys,12/180）,nt3331G→C（IVS7、3/180）,其中GCC277ACC为错义突变（Ala277Thr）;CCA237TCA为无义突变（Arg237stop）;密码子361CUG→CUC,密码子369AAA→AAG属于同义突变并且相连锁。Ala277Thr突变尚存在于正常人群中（1/60）,亦存在于患者正常亲属中;Arg237ston仅见于一个常染色体隐性遗传家系的患者中,为杂合性突变。分析180例高度近、视先证者PRPH基因,未发现致病突变,可排除PRPH基因与高度近视病因的相关性。在中国人群中PRPH基因有多种变异。

感光受体外周蛋白结合蛋白对虫荧光素酶体外折叠的促进作用

探讨感光受体外周蛋白结合蛋白 (PBP)在体外是否有促进变性蛋白质复性的作用。虫荧光素酶用盐酸胍变性 ,然后在PBP、HSP70、HSP6 0存在下进行体外复性 ,用虫荧光素酶分析系统检测该酶的复性程度。结果显示PBP对虫荧光素酶的复性能力很低 ,当与HSP70同时作用时 ,酶活力明显高于PBP或HSP70组 ,而PBP与HSP6 0组合对酶的复性能力较HSP6 0组未见有明显差异 ;当PBP ,HSP70 ,HSP6 0三者同时存在时 ,酶活力恢复率最高。去除复性缓冲液中的ATP及其再生系统 ,酶活力的复性率明显下降。结果表明PBP具有协助HSP70 。

感光受体外周蛋白结合蛋白对虫荧光素酶体外折叠的促进作用

目的 探讨感光受体外周蛋白结合蛋白 (PBP)在体外是否有促进变性蛋白质复性的作用。虫荧光素酶用盐酸胍变性 ,然后在 PBP、HSP70、HSP6 0存在下进行体外复性 ,用虫荧光素酶分析系统检测该酶的复性程度。结果显示 PBP对虫荧光素酶的复性能力很低 ,当与 HSP70同时作用时 ,酶活力明显高于 PBP或 HSP70组 ,而 PBP与 HSP6 0组合对酶的复性能力较HSP6 0组未见有明显差异 ;当 PBP,HSP70 ,HSP6 0三者同时存在时 ,酶活力恢复率最高。去除复性缓冲液中的 ATP及其再生系统 ,酶活力的复性率明显下降。结果表明 PBP具有协助 HSP70 ,在 ATP依赖的情况下促进变性虫荧光素酶体外复性的分子伴侣功能。

肛门直肠畸形直肠末端肠壁组织蛋白酶D及外周蛋白的表达

目的:研究肛门直肠畸形患儿直肠末端肠壁内神经节细胞的发育情况,探讨术后排便障碍的病理机制。方法:肛门直肠畸形患儿直肠末端标本72例,其中高位无肛12例,中间位无肛36例,低位无肛24例,分别对应为高位组、中间位组和低位组;选择非肠神经相关疾病行结肠手术的患儿10例,取其结肠壁作为对照标本。采用免疫组织化学法检测直肠末端组织蛋白酶D(cathepsin D,CD)和外周蛋白在肠壁中的表达情况。结果:高位组CD的表达(0.0040±0.00082)明显低于对照组(0.049±0.0045,P<0.01);中间位组、低位组与对照组比较,CD表达亦有减少,但差异无统计学意义;高位组CD的表达较低位组(0.043±0.0094)显著减少(P<0.05);高位组与中间位组及中间位组与低位组分别比较,差异无统计学意义。高位组、中间位组及低位组外周蛋白的表达均显著低于对照组,尤以高位组最著;高位组外周蛋白的表达(0.0047±0.00055)较中间位组(0.020±0.0029)、低位组(0.030±0.0032)显著减少(P<0.01);中间位组与低位组比较,外周蛋白的表达差异无统计学意义。结论:肛门直肠畸形患儿直肠末端肠壁内神经节细胞的发育程度与直肠盲端位置高低密切相关,直肠盲端位置越高,肠壁神经节细胞发育越差,这可能是中、高位无肛畸形术后排便障碍的发生机制之一。

视网膜视杆细胞盘膜边缘蛋白在视网膜色素变性发病机制中作用的研究

目的研究peripherin基因的突变与RP发病的关系。方法收集6例汉族视网膜色素变性患者和4例正常健康对照者12 mL外周血样本,进行全外显子测序分析。在大量原始数据的基础上,进行深度分析及基因热图分析。进一步进行peripherin基因GO分析,解读peripherin基因的功能。收集235例汉族视网膜色素变性患者和248例正常健康对照者12 mL外周血样本,质谱分析peripherin基因rs62645931,rs61755792,rs7764439,rs425876与RP发病的关系。Swissmodel软件建立SNP位点改变前后peripherin基因编码蛋白3D模型,了解SNP位点突变对蛋白的影响,定点到蛋白的功能。结果在全外显子测序分析6例汉族视网膜色素变性患者基因组得到大量原始数据后,进一步进行深度基因分析及基因热图分析,发现peripherin基因在病例样本中高表达。peripherin基因GO分析表明peripherin基因与细胞黏附有关;与细胞表面受体信号通路有关;与视觉感知及视网膜发育有关。质谱分析发现在235例RP患者中,rs61755792是与正常对照人群相比,有统计学意义的突变位点。SWISS-Model软件对peripherin基因在编码区发生了Arg-172-Trp(CGG→GGG)的错义突变所引起的蛋白三维结构的改变进行分析,发现peripherin基因编码区原Arg氨基酸所在的区域有碳原子构成的共价键有类似受体的结构。当CGG→GGG发生后,原Arg成为了Trp,可以看到Arg氨基酸所在的区域碳原子的数量增多,并且与原来相比,长链的共价键变成了闭合环状的共价键。结论在中国东北汉族人群中,peripherin基因单核苷酸多态性rs61755792位点与RP的发病有关。

外周蛋白和组织蛋白酶D在先天性巨结肠症中的表达

目的 观察外周蛋白 (peripherin ,PR)和组织蛋白酶D(cathepsinD ,CD)在Hirschsprung症(HD)肠壁中的表达并探讨其诊断价值。方法 应用免疫组织化学染色观察 9例HD及 5例对照组患儿结肠。结果 在正常结肠肠壁内有CD或PR阳性神经节细胞 ,肠壁各层均有PR阳性神经纤维 ,但无CD阳性神经纤维染色。在无神经节细胞肠段的肠壁内缺乏CD或PR阳性神经元 ,亦无CD阳性神经纤维染色 ,肌层和黏膜下层内PR阳性神经纤维明显减少或缺如。结论 CD和PR是肠神经节细胞特异性较高的标志物 ,二者的免疫组织化学染色将有助于HD及其同源病的诊断。

外周蛋白在中枢神经系统损伤中的研究进展

外周蛋白(peripherin, PRPH)广泛分布于外周神经系统(PNS),也可较小程度表达于中枢神经系统(CNS)内少数直接向外周有投射纤维的神经元群。研究发现,CNS损伤后,PRPH表达可出现上调,且可表达于正常状态下不表达的部位。此外,PRPH有多种不同亚型,各亚型在CNS中发挥着不同的作用,某些亚型系在某些病理条件下产生或出现上调。然而,PRPH及其各亚型在CNS损伤中的确切生物学功能尚不明确。本文综述了PRPH在中枢神经系统损伤中的研究进展,提示了其在法医学领域中的应用及研究前景。