雷公藤红素诱导未折叠蛋白反应信号通路中真核细胞翻译起始因子2α活化抑制多发性骨髓瘤细胞生长

目的研究雷公藤红素抑制多发性骨髓瘤细胞增殖与未折叠蛋白反应(UPR)的关系和分子机制,为多发性骨髓瘤的治疗提供新的药物靶点。方法 4种多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226、U266、SKO、KMS-11,经不同浓度雷公藤红素(增殖实验0.0~10.0μmol/L、凋亡实验0.0~4.0μmol/L、周期阻滞实验0.0~1.5μmol/L)处理不同时间(增殖实验1~3 d、凋亡实验1 d、周期阻滞实验1 d)后,检测细胞增殖、凋亡、周期阻滞情况;用蛋白质印迹法检测肌醇需求酶1(IRE1)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)和活化转录因子6(ATF6)3条UPR信号通路中主要分子的表达,包括葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、ATF6、PERK、真核细胞翻译起始因子2α(eIF2α)、磷酸化eIF2α(p-eIF2α)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、IRE1、磷酸化IRE1(p-IRE1)。用慢病毒包被的含短发夹RNA(shRNA)载体对eIF2α表达进行干扰,观察雷公藤红素对干扰eIF2α表达后的RPMI 8226细胞UPR信号分子表达、凋亡和细胞周期的影响。结果雷公藤红素以剂量和时间依赖方式抑制4种多发性骨髓瘤细胞增殖、诱导凋亡、使细胞周期阻滞在G0/G1期,其中RPMI8226细胞对雷公藤红素最敏感。在RPMI8226细胞,雷公藤红素处理浓度在0.5~2.0μmol/L作用30 min^24 h时均能使UPR的PERK通路中p-eIF2α表达水平升高(P<0.05或P<0.01),其下游CHOP表达也相应增加(P<0.05或P<0.01),而对其他2条通路ATF6和IRE1影响不明显。用慢病毒干扰eIF2α表达后,雷公藤红素上调CHOP表达、诱导凋亡和周期阻滞的作用均减弱或消失。结论雷公藤红素能抑制多种多发性骨髓瘤细胞增殖,活化UPR的PERK信号通路中eIF2α分子可能是其作用机制之一。

长链非编码RNA LINC00641通过微小RNA-181d-5p靶向真核细胞翻译起始因子4A2抑制宫颈癌细胞增殖的研究

目的观察长链非编码RNA(LncRNA)LINC00641(LINC00641)在宫颈癌细胞中的表达特征,探讨LINC00641通过微小RNA-181 d-5p(miR-181 d-5p)/真核细胞翻译起始因子4A2(EIF4A2)对宫颈癌细胞增殖的调节作用。方法选择宫颈癌Hela细胞株,建立空白对照组,构建转染pc-DNA3.1的无关序列组､转染pc-DNA3.1-LINC00641的pc-DNA-LINC00641组､转染pc-DNA3.1-LINC00641-siRNA的si-LINC00641组,转染miR-181 d-5p inhibitor的miR-181 d-5p inhibitor组､转染miR-181 d-5p mimic的miR-181 d-5p mimic组､转染siRNA-EIF4A2的si-EIF4A2组。采用CCK-8实验检测细胞增殖活性,采用双荧光素酶报告基因实验观察LINC00641和miR-181 d-5p､miR-181 d-5p､EIF4A2的靶向关系。选取2019年12月至2021年1月陕西中医药大学第二附属医院诊治的45例宫颈鳞癌且未行术前新辅助放､化疗的女性患者作为研究对象,留取其术后肿瘤组织(宫颈鳞癌组织)。另选取45例因子宫肌瘤行子宫全切术,且经病理确诊为慢性宫颈炎的患者,留取其宫颈组织(慢性宫颈炎组织)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测LINC00641和miR-181 d-5p的表达,采用免疫组化SP法检测EIF4A2和Ki67的表达,采用Pearson检验分析其相关性。结果生物信息分析显示,LINC00641与miR-181 d-5p､miR-181 d-5p､EIF4A2具有可能的结合位点。与空白对照组和无关序列组比较,pc-DNA-LINC00641组､miR-181 d-5p mimic组､si-EIF4A2组细胞增殖活性下降,si-LINC00641组､miR-181 d-5p inhibitor组细胞增殖活性升高。双荧光素酶报告基因实验显示,LINC00641与miR-181 d-5p､miR-181 d-5p､EIF4A2具有靶向关系。挽救实验显示,沉默EIF4A2可部分逆转沉默LINC00641和沉默miR-181 d-5p对细胞增殖的促进作用。与慢性宫颈炎组织比较,宫颈鳞癌组织中LINC00641､miR-181 d-5p低表达,EIF4A2高表达(P<0.05)。Pearson相关分析显示,LINC00641与miR-181 d-5p､EIF4A2､Ki67呈正相关性,miR-181 d-5p与EIF4A2呈负相关性。结论LINC00641通过miR-181 d-5p/EIF4A2抑制宫颈癌细胞的增殖,调控肿瘤的形成和进展。

内质网应激蛋白激酶RNA样ER激酶(PERK)通路对肝星状细胞激活及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的探讨内质网应激蛋白激酶RNA样ER激酶(PERK)/真核生物翻译起始因子2α(eIF2α)信号通路对肝星状细胞(HSC)活化的影响。方法收集11例肝穿刺病理提示S1~S4肝纤维化患者和9例肝血管瘤、肝腺瘤患者术后周围正常肝组织病理切片,进一步行组织免疫组化检测PERK、eIF2α、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)表达情况;使用不同浓度的内质网应激诱导剂毒胡萝卜素(0、125、250、500、1000 nmol/L)作用于人HSC-LX2,使用qRT-PCR检测PERK mRNA及Western Blot检测PERK、肌醇需要酶1(IRE1)、激活转录因子6(ATF6)、CHOP及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平。使用慢病毒转染构建PERK稳定过表达LX-2组及对照组,并通过qRT-PCR检测PERK、eIF2α、α-SMA mRNA,Western Blot检测PERK、p-eIF2α、α-SMA蛋白表达,免疫荧光检测胶Ⅰ型原蛋白(COL1A1)表达。符合正态分布的计量资料两组间比较采用成组t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验;不符合正态分布的计数资料,两组间比较采用Mann-Whitney U秩和检验。结果与正常肝组织相比,肝纤维化患者肝组织中PERK、eIF2α及CHOP表达升高,差异均有统计学意义(Z=−3.56、t=−5.75、Z=−3.52,P值均<0.001)。不同浓度毒胡萝卜素作用后,与溶媒组相比,内质网相关蛋白PERK、CHOP、IRE1、ATF6及α-SMA蛋白表达显著升高(P值均<0.05)。与对照空载慢病毒组相比,PERK稳定过表达组PERK mRNA、eIF2αmRNA、α-SMA mRNA表达及PERK、p-eIF2α、α-SMA蛋白表达明显升高(P值均<0.05)。细胞免疫荧光结果提示,PERK过表达组COL1A1表达升高(P<0.05)。结论PERK过表达可诱导LX-2细胞α-SMA、胶原蛋白COL1A1表达,提示PERK信号通路可能是HSC活化的重要机制之一。

Mnk2和eIF4E在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨MAPK相互作用激酶-2(MAPK-interacting kinase-2,Mnk2)和真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)在食管鳞状细胞癌中的表达及其与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系。方法:收集临床食管鳞癌石蜡标本98例及正常食管黏膜上皮组织20例,应用免疫组化SP法检测癌组织及正常食管黏膜组织中Mnk2和eIF4E的表达,并分析其与食管鳞癌临床病理特征的关系。结果:Mnk2在食管癌组织中的阳性率68.4%(67/98),eIF4E的阳性率为61.2%(60/98),Mnk2与eIF4E表达呈正相关(P<0.05),且Mnk2蛋白过表达与食管鳞癌的浸润深度、病理分期密切相关(P<0.05)。结论:Mnk2在食管癌组织中的过表达与浸润深度、TNM分期有关,同时与eIF4E在食管癌的表达相关,两者在食管癌的发展中有协同作用。

siRNA沉默eIF4E诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡及其机制

目的:观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因的靶向小干扰RNA(siRNA)对喉癌Hep-2细胞中eIF4E基因表达的影响,探讨其诱导喉癌细胞凋亡的作用机制。方法:采用脂质体LipofectamineTM2000将siRNA-eIF4E转染入人喉癌Hep-2细胞(siRNA-eIF4E组),同时设空白对照组和空质粒组。MTT法检测siRNA对Hep-2细胞增殖的抑制作用,罗丹明染色检测转染后细胞内线粒体膜电位的变化,TUNEL染色法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blotting法检测凋亡相关基因转录和蛋白表达水平的变化。结果:与空白对照组及空质粒组比较,siRNA-eIF4E组Hep-2细胞中eIF4E基因转录和表达水平明显下调(P<0.01),Hep-2细胞生存率下降(P<0.05),细胞线粒体膜电位降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),凋亡相关基因Bim、Bid及Caspase-3表达上调(P<0.05)。结论:siRNA-eIF4E在体外可抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其机制可能是通过激活线粒体凋亡途径诱导Hep-2细胞凋亡。

微小RNA-215-5p靶向eIF2a负向调控结肠癌细胞增殖

目的:探讨微小RNA-215-5p(miR-215-5p)与真核细胞翻译起始因子2a(eIF2a)的靶向关系,分析其通路对结肠癌细胞增殖的调节作用。方法:选择结肠癌患者手术切除标本55例,以肿瘤组织作为观察组,以癌旁正常结肠黏膜组织作为对照组。应用实时荧光定量PCR法(qPCR)检测miR-215-5p的表达,应用免疫组化法检测结肠癌中eIF2a和Ki67的表达。选择结肠癌SW480细胞系,构建空白对照组、空载体转染组、miR-215-5p转染组、miR-215-5p和eIF2a共转染组,应用蛋白印迹法检测各组中eIF2a和Ki67的表达。应用双荧光素酶报告基因实验观察miR-215-5p与eIF2a的结合情况。结果:观察组miR-215-5p的表达明显低于对照组,miR-215-5p表达与肿瘤最大径大小及浸润深度相关;生存分析显示miR-215-5p与预后有关,MiR-215-5p均与eIF2a、Ki67呈负相关性,双荧光素酶报告基因实验显示miR-215-5p与eIF2a具有靶向关系。与空白对照组和空载体转染组比较,miR-215-5p转染组中eIF2a和Ki67的表达下降,共转染组能逆转上述改变。结论:miR-215-5p靶向eIF2a负向调控结肠癌细胞的增殖,miR-215-5p低表达与肿瘤形成及进展密切相关,检测miR-215-5p表达可能对结肠癌预后有提示意义。

甘草酸苷调节内质网应激PERK-elF2α-NF-κB信号通路治疗溃疡性结肠炎的机制研究

目的从PERK-elF2α-NF-κB信号通路角度研究甘草酸苷(GL)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠炎症的治疗作用和可能机制。方法BALB/c小鼠90只,随机分为6组:正常对照组、模型对照组、阳性对照组和GL低、中、高剂量组。通过右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)法制备UC模型,GL低、中、高剂量组造模同时予GL灌胃10d。观察小鼠的一般状态、结肠大体形态和组织病理特点;运用ELISA酶联法检测结肠中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17和IL-10的水平;分别运用免疫组织化学SP法和荧光定量PCR法检测结肠中GRP78、PERK、elF2α和NF-κB蛋白和mRNA的表达水平。结果与模型小鼠相比,GL各剂量组小鼠的临床症状、结肠大体损伤和组织病理损伤均减轻,GL高剂量组的DAI、CMDI和TDI均显著降低(P<0.01),GL中、高剂量组的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17水平均明显降低(P<0.01),IL-10的含量明显升高(P<0.01),上述通路蛋白的表达及其mRNA水平均降低(P<0.05)。结论GL能有效治疗UC小鼠的结肠炎症,其作用机制可能与抑制PERK-eIF2α-NF-κB信号通路活化、减轻IECs炎症损伤有关。

CML细胞eIF4E和Trib2基因mRNA表达分析

目的:为了探索慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)急变机理,寻求新的治疗靶标,我们对获得的9例CML病人骨髓标本以及CML急性红系变细胞株中K562细胞株中eIF4E基因和Trib2基因的表达水平进行初步检测,为进一步的研究奠定基础。方法:分离骨髓单个核细胞,用Trizol裂解提取RNA,RT-PCR检测eIF4E基因和trib2基因mRNA的表达水平。结果:初步分析显示部分CML病人eIF4E基因mRNA表达水平很高,为CML疾病进展机制进一步研究奠定了基础。结论:部分CML病人骨髓标本中eIF4E和TRIB2基因mRNA表达水平较高,eIF4E和trib2有可能成为CML病人新的治疗靶点。

抑制内质网应激关键信号通路蛋白eIF2α去磷酸化与肝细胞增殖及c-Met表达的关系

目的探讨抑制内质网应激(ERS)关键信号通路蛋白真核细胞起始因子2α(eIF2α)去磷酸化与肝细胞增殖及促肝细胞生长因子受体(c-Met)表达的关系。方法将人肝细胞株L02分为对照组和胡萝卜素(TG)组,TG组加入含内质网钙平衡抑制剂毒胡萝卜素(TG)的RPMI1640培养基,诱导构建细胞ERS模型;对照组仅加入RPMI1640培养基,培养48 h。采用CCK-8检测细胞活力,Western blotting法检测细胞ESR相关蛋白p-eIF2α、ERAD通路相关蛋白HRD1、XBP1以及c-Met蛋白表达。另取L02细胞,分为TG组和Salubrinal+TG组,Salubrinal+TG组给予eIF2α去磷酸化抑制剂Salubrinal预处理2 h,然后加入1μmol/L TG培养48 h;TG组加入1μmol/L TG培养48 h。采用CCK-8检测细胞活力,Western blotting法检测细胞eIF2α、p-eIF2α、HRD1、XBP1、c-Met蛋白表达。结果与对照组相比,TG组p-eIF2α、HRD1表达水平升高,TG组ERS相关蛋白p-eIF2α表达上调,ERAD通路激活,表明ERS细胞模型构建成功。TG组细胞增殖活力和c-Met蛋白表达水平均低于对照组(P均<0.05)。与TG组相比,Salubrinal+TG组细胞XBP1、HRD1蛋白表达降低,细胞增殖活力和c-Met蛋白表达升高(P均<0.05)。结论在肝细胞ERS中,抑制eIF2α去磷酸化能够部分恢复肝细胞细胞增殖活力及c-Met表达,促进细胞存活。

持续氟铝联合暴露对子代大鼠骨组织蛋白激酶R样内质网激酶-酸化真核细胞起始因子2α-激活转录因子4信号通路的影响

目的了解妊娠期、哺乳期及成年前持续氟铝联合染毒对子代大鼠骨组织内蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-酸化真核细胞起始因子2α(e IF2α)-激活转录因子4(ATF4)信号通路的影响。方法将36只健康成年清洁级SD孕鼠随机分为9组,分别为对照(自来水)组和氟化钠(60、240 mg/L)组、氯化铝(600、1 000 mg/L)单独染毒组及氟化钠+氯化铝联合染毒组,每组4只。采用自由饮水方式染毒,母鼠从妊娠第0天至子代大鼠出生第21天(postnatal day 21,PND21)染毒;每组随机选取8只子代大鼠继续以同组剂量染毒至PND90。染毒结束后,收集大鼠骨组织,以qRT-PCR法检测骨组织中ATF4和e IF2α的mRNA表达水平,ELISA测定骨组织中p-PERK、ATF4蛋白含量。结果与对照组比较,除低铝、高氟+低铝联合染毒组外,其余各染毒组子代大鼠骨组织中p-PERK蛋白含量明显升高(P<0.05);低氟组和低氟+高铝联合染毒组的ATF4蛋白含量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。氟铝联合染毒对p-PERK蛋白含量的影响表现为拮抗型交互作用(P<0.05);ATF4蛋白含量除高氟+低铝联合染毒组表现为协同型交互作用外,其他联合染毒组均表现为拮抗型交互作用(P<0.05)。除低氟组大鼠骨组织中e IF2αmRNA的表达明显升高外,其余染毒组明显降低(P<0.05)。除高氟+低铝联合染毒组大鼠骨组织中ATF4的mRNA表达明显升高外,其余各染毒组明显降低(P<0.05)。单独高氟或高铝染毒组比单独的低氟或低铝染毒组ATF4 mRNA表达量高,差异有统计学意义(P<0.05)。氟铝联合染毒对e IF2α及ATF4 mRNA表达水平的影响存在拮抗型交互作用(P<0.05)。结论氟铝联合可通过亲代胎盘屏障、乳汁及子代大鼠自身摄入等途径进入子代大鼠体内,诱发骨细胞内质网应激,PERK-e IF2α-ATF4信号通路参与了氟铝联合持续暴露的子代大鼠骨损伤机制。

EIF4A3 shRNA慢病毒载体的构建及其稳定转染细胞系的建立

目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和AgeⅠ酶切的慢病毒GV493载体,构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒质粒,PCR筛选阳性克隆并测序鉴定。将GV493空载质粒和GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,分别为GV493对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒,转染48 h后收集慢病毒进行包装并测定病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为空白组、GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组,空白组不作处理,GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组分别采用相应慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,使用10 mg·L-1嘌呤霉素筛选成功感染慢病毒的Neuro-2a细胞,荧光显微镜观察各组Neuro-2a细胞的生长状态和绿色荧光表达情况;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组Neuro-2a细胞中EIF4A3 mRNA及蛋白表达水平。结果:PCR测序结果显示GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒基因序列与设计合成的EIF4A3-shRNA序列一致,成功构建GV493-EIF4A3慢病毒载体。荧光显微镜观察可见HEK293T细胞荧光表达强烈,生长状态良好,慢病毒包装成功。GV493-对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒的滴度均为2×10~8 TU·mL^(-1),GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞生长状态良好且表达绿色荧光,表明慢病毒感染稳定细胞系构建成功。RT-qPCR法,与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3shRNA组Neuro-2a细胞EIF4A3mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。Western blotting法,各组在相对分子质量49000处出现特异性条带,提示Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达成功;与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:成功构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒载体,建立了Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系,为EIF4A3在颅内动脉粥样硬化的作用机制研究提供了参考。

针刺对创伤后应激障碍大鼠海马蛋白激酶R样内质网激酶/真核细胞起始因子2α信号通路相关蛋白的影响

目的:观察针刺对创伤后应激障碍(PTSD)大鼠海马蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/真核细胞起始因子2α(eIF2α)信号通路的影响,探讨针刺治疗PTSD的可能机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、针刺组、舍曲林组,每组7只。采用单次延长应激法制备PTSD大鼠模型。针刺组针刺“百会”“大椎”,每次10min,每日1次,连续7d;舍曲林组给予盐酸舍曲林溶液(10mg/kg)灌胃,连续7d。采用高架十字迷宫实验、新物体识别实验检测大鼠行为学变化;Westernblot法检测大鼠海马PERK、磷酸化(p)-PERK、eIF2α、p-eIF2α、转录激活因子4(ATF4)蛋白表达;透射电镜观察大鼠海马神经元超微结构。结果:与正常组比较,模型组大鼠高架十字迷宫实验开臂次数百分比和开臂时间百分比、新物体识别指数显著降低(P<0.01);海马p-PERK、p-eIF2α、ATF4蛋白表达显著升高(P<0.05)。与模型组比较,针刺组、舍曲林组大鼠高架十字迷宫实验开臂次数百分比和开臂时间百分比、新物体识别指数显著升高(P<0.05,P<0.01),海马p-PERK、p-eIF2α、ATF4蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),舍曲林组eIF2α蛋白表达显著降低(P<0.05)。与正常组比较,模型组海马神经元损伤,粗面内质网重度扩张,线粒体多呈嵴减少或少量空泡化;与模型组比较,针刺组、舍曲林组海马神经元结构损伤减轻,粗面内质网未见明显扩张,部分线粒体呈嵴减少。结论:针刺可以缓解PTSD大鼠焦虑行为和提高识别记忆能力,其机制可能与抑制海马PERK/eIF2α信号通路,改善内质网应激造成的海马神经元损伤有关。

真核细胞翻译起始因子4E2生物学功能及其在肿瘤中作用

真核细胞翻译起始因子4E2(eIF4E2)是真核细胞翻译起始因子(eIF4E)的同源物,是真核细胞特别是肿瘤细胞缺氧状态下,蛋白翻译的关键因子。eIF4E2对缺氧条件下,肿瘤细胞非典型的帽式翻译的调控,肿瘤细胞应对生存压力和微环境改变均具有重要的作用,eIF4E2在多种肿瘤细胞中异常表达,特别在肿瘤晚期的作用使eIF4E2成为研究热点。该文介绍了eIF4E2的结构、生理功能及缺氧期对肿瘤细胞蛋白翻译的调控,浅析了eIF4E2在肿瘤细胞进展中的潜在作用,为评估肿瘤转归,探寻肿瘤细胞与肿瘤微环境间的相互作用,发掘潜在的临床肿瘤治疗靶点提供理论依据。

MxA启动子和elF-2a调节区2基因多态性对HBV感染自然转归的影响

目的探讨干扰素诱导的黏病毒抗性蛋白A(MxA)和真核细胞起始因子2a调节区2(elF-2a-reg2)基因的单核苷酸多态性(SNP)对乙型肝炎病毒(HBV)感染自然转归的影响。方法收集湖北地区160例HBV自限感染者和243例慢性HBV感染者的外周血标本,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法,检测MxA启动子-88、-123位点及elF-2a-reg2基因型。结果 MxA启动子-88G/T位点基因型和等位基因在慢性HBV感染者和自限性感染者中的分布差异有统计学意义(P<0.05)。HBV自限性感染者MxA启动子-88位点GG基因型和G等位基因频率分别为41.3%、62.8%,均较慢性感染者频率52.7%、74.9%低(P=0.025和P=0.001),而TT基因型和T等位基因频率分别为15.6%、37.2%,均较慢性感染者频率2.9%、25.1%高(P=0.000和P=0.001),比值比为6.24,95%可信限2.63～14.81。然而,MxA启动子-123位点、elF-2a-reg2基因的不同基因型和等位基因在HBV自限性感染组和慢性感染组间的分布频率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 MxA启动子-88G/T位点多态性与HBV感染后的结局有关,其中TT基因型或T等位基因的存在可能有利于HBV感染后的清除。

宫颈病变组织中PKR、p-PKR、p-EIF2α表达及意义

目的:探讨蛋白激酶R(PKR)→真核细胞翻译起始因子2α(EIF2α)信号传导通路中PKR、磷酸化型PKR、EIF2α(p-PKR、p-EIF2α)表达与宫颈病变的相关性、在宫颈肿瘤形成演进过程中的作用及对宫颈癌患者预后的影响。方法:采用免疫组化法检测PKR、p-PKR、p-EIF2α在63例宫颈癌、114例宫颈上皮内瘤样病变(CINⅠ～Ⅲ)、15例正常宫颈组织中的表达。结果:PKR在各组的阳性表达率随宫颈病变级别升高而升高,并与宫颈病变级别呈正相关(P<0.05);p-PKR、p-EIF2α在各组的阳性表达率随宫颈病变级别升高而先升高、后下降;在宫颈癌组,PKR的阳性表达率明显高于p-PKR(P<0.01);宫颈癌患者临床分期晚者病情进展快(P<0.01),p-PKR、p-EIF2α阴性表达者病情进展快(P<0.05)。结论:PKR的表达与宫颈病变级别相关;在宫颈高级别病变中存在PKR、EIF2α磷酸化障碍或p-PKR、p-EIF2α去磷酸化机制,使宫颈病变进展,可能导致宫颈癌患者预后不良。

人EIF2B4基因一个新的可变剪接产物及其鉴定

目的对人EIF2B4基因新的可变剪接产物进行鉴定。方法应用长链RT-PCR技术扩增人外周血EIF2B4基因编码区全长序列并进行T克隆及序列测定,用常规RT-PCR对新型可变剪接产物进行验证。结果在EIF2B4基因转录产物中检测出正常变异体2和3(两者只相差3个碱基),同时发现一个外显子7缺失26bp的转录产物。结论利用长链RT-PCR结合T克隆-测序的方法,发现人EIF2B4基因的一个新型可变剪接产物。

2-氨基嘌呤对小鼠的毒理学研究

目的:2-氨基嘌呤(2-Aminopurine,2-AP)是一种真核生物翻译启动因子2α(eukaryotic translation initiation factor-2α,eIF-2α)激酶的抑制剂。细胞水平的研究发现2-AP能够抑制病毒的复制及泡沫细胞的形成,因此有可能作为药物用于治疗或预防病毒感染和动脉粥样硬化相关的心血管疾病,如缺血性心脏病和中风。研究了2-AP对小鼠的毒性作用。方法:C57BL野生型小鼠在30天内每两天2-AP灌胃一次,剂量为200、300或400mg/kg体重。结果:所有给药400mg/kg体重的小鼠在14天内全数死亡。解剖后发现在小鼠胃内积累了大量未消化的食物,但其他器官,如心,肾,肝,肺及消化道则没有表现出明显的病理变化。给药剂量为300mg/kg体重的小鼠没有死亡,但与对照组相比,小鼠的生长速度迟缓。给药200mg/kg体重的小鼠,食物摄入量、血糖水平以及体重并没有减少,死亡率与对照组相比也没有增加。结论:小鼠隔日一次灌胃给药2-AP的剂量应该小于等于200mg/kg。

BMSCs介导STAT3对脑出血大鼠海马组织eIF2α、Glu表达水平的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脑出血(ICH)大鼠海马组织真核细胞翻译起始因子2α亚基(eIF2α)、谷氨酸(Glu)表达水平的影响及其机制。方法100只SD大鼠,随机选取10只分离BMSCs,剩余90只采用Ⅳ型胶原酶构建ICH模型。90只大鼠随机分为假手术组、ICH组和BMSCs移植组,每组30只。造模成功后24h,BMSCs移植组大鼠经尾静脉注入BMSCs,其余2组注入等体积0.9%氯化钠溶液。观察大鼠一般情况,评估神经功能,测定脑组织含水量。蛋白印迹测定海马组织内质网应激相关因子、eIF2α及JAK/STAT3通路蛋白水平,高效液相色谱法测定Glu浓度,TUNEL法分析细胞凋亡情况。结果ICH组大鼠神经功能缺损评分(NSS)和脑组织含水量显著大于假手术组,海马组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)蛋白相对表达量显著低于假手术组,CAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和Caspase-12蛋白相对表达量显著高于假手术组,海马组织eIF2α蛋白相对表达量和Glu水平显著高于假手术组,海马神经细胞凋亡率显著高于假手术组,海马组织JAK、p-JAK、STAT3和p-STAT3蛋白相对表达量显著低于假手术组(P<0.05);与ICH组比较,BMSCs移植组大鼠NSS评分和脑组织含水量显著降低,海马组织GRP78蛋白相对表达量显著增加,CHOP和Caspase-12蛋白相对表达量显著降低,eIF2α蛋白相对表达量和Glu水平显著降低,海马神经细胞凋亡率显著降低,海马组织JAK、p-JAK、STAT3和p-STAT3蛋白相对表达量显著增加(P<0.05)。结论BMSCs移植可通过JAK/STAT3通路降低ICH大鼠海马组织eIF2α和Glu表达,抑制神经细胞凋亡,减轻内质网应激,从而达到减轻脑损伤,改善神经功能作用。

Salubrinal通过eIF2α信号通路治疗非酒精性脂肪肝

目的探讨Salubrinal对肥胖诱导的非酒精性脂肪肝的疗效。方法选用30只雌性C57BL/6小鼠,随机分为对照(SCD)组、高脂饮食(HF)组和高脂饮食治疗(HF+S)组。HF组和HF+S组小鼠给予含脂量为60%的高脂饮食,4周肥胖诱导后,HF+S组接受Salubrinal皮下注射4周。实验过程中每周测量动物体成分变化,采取静脉血检测血脂指标,收集皮下、内脏脂肪和肝脏进行湿质量测定。为探索Salubrinal对肝脏的影响及作用机制,通过HE、油红O染色观察肝脏病理改变,Western blot检测肝组织e IF2α信号通路相关蛋白Bip、p-eIF2α、eIF2α、ATF4和CHOP的表达。结果与SCD组比较,HF组小鼠的血脂水平和脂肪堆积明显增加,Salubrinal治疗后,脂质紊乱情况减轻。同时,肝脏组织学检查显示,Salubrinal可以明显缓解肝脂肪变性严重程度并抑制异常脂质沉积。此外,Western blot分析表明,Salubrinal通过增加Bip、p-eIF2α/eIF2α和ATF4的表达量,降低CHOP的表达水平抑制内质网应激。结论Salubrinal能够有效缓解肥胖和肝脂肪变性,并通过eIF2α信号通路调控内质网应激而影响脂质代谢。

乳腺癌组织中eIF4E、eIF5A2、KLF4、YAP1的表达水平及临床意义

目的:探讨乳腺癌组织中真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)和5A2(eIF5A2)、Krüppel样因子4(KLF4)、Yes相关蛋白1(YAP1)的表达水平及临床意义。方法 :将接受手术治疗的乳腺癌组织50例作为观察组,同时选取50例癌旁正常组织作为对照组,检测两组eIF4E、eIF5A2、KLF4、YAP1的表达水平,分析其与乳腺癌病理特征的临床意义。结果 :观察组eIF4E、eIF5A2、YAP1阳性表达率均高于对照组(P <0.05),KLF4低于对照组(P <0.05);在临床分期Ⅰ~Ⅱ期及发生淋巴结转移的患者中,eIF4E、eIF5A2、YAP1高表达患者占比高于低表达(P <0.05),KLF4高表达患者占比低于低表达(P <0.05)。结论 :乳腺癌组织中,eIF4E、eIF5A2、YAP1水平呈高表达,KLF4水平呈低表达,是评估疾病进展的重要指标。