PES1蛋白与雄激素受体的相互作用及定位

目的：研究PES1蛋白与雄激素受体（An）之间的相互作用。方法：利用免疫共沉淀实验检测PES1蛋白与AR之间的相互作用，并进行相互作用定位；利用Western印迹研究PESl对乳腺癌细胞内AR表达水平的影响。结果：免疫共沉淀实验显示PES1蛋白与AR存在相互作用；PES1蛋白的1—110、111-220、221-320和311-588氨基酸残基（aa）区域均能与AR结合，415～588aa不能结合AR；AR的651-918aa区域与PESl结合。PESl不能调节乳腺癌细胞AR的表达水平。结论：PES1多个区域均能与AR相互作用，并且主要结合在AR的转录激活结构域2，为进一步探讨PES1对AR功能的调节奠定了基础。

沉默PES1基因表达对结肠癌细胞恶性表型的抑制作用

目的 :探讨核仁蛋白PES1(pescadillo homolog 1)对结肠癌细胞恶性表型的影响。方法 :构建针对PES1基因的sh RNA干扰质粒,将其转染结肠癌HCT116细胞,经G418筛选耐药细胞克隆,蛋白质印迹法验证靶基因的沉默效果。采用MTT法、平板克隆形成实验、裸鼠成瘤实验、Transwell迁移及侵袭实验和FCM法分别检测沉默PES1表达对HCT116细胞增殖、克隆形成、体内成瘤、体外迁移和侵袭以及凋亡的影响,并采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测细胞增殖和凋亡相关蛋白的表达水平。结果 :成功获得PES1稳定低表达的结肠癌HCT116细胞。沉默PES1表达后,HCT116细胞的增殖、克隆形成和裸鼠体内成瘤能力均明显降低(P值均<0.01),细胞迁移和侵袭能力明显减弱(P值均<0.01),细胞凋亡水平明显提高(P<0.05)。PES1表达被抑制后,HCT116细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P值均<0.01),而Bcl-2相互作用杀伤蛋白(Bcl-2 interacting killer,BIK)、prune同源蛋白2(prune homolog 2,PRUNE2)和基质金属蛋白酶组织抑制因子3(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase 3,TIMP3)的m RNA表达水平明显升高(P值均<0.01)。结论 :PES1可能对结肠癌细胞的多种恶性表型起促进作用。