TRIM29在卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌顺铂化疗耐药性的关系

目的探讨三结构域蛋白29(TRIM29)在卵巢癌组织中的表达及其与化疗耐药性的关系。方法选取2019年1月至2021年1月儋州市人民医院手术切除的86例卵巢癌组织及对应的癌旁组织作为研究对象,采用免疫组织化学法测定TRIM29表达情况,分析TRIM29的表达与患者顺铂化疗耐药性的关系。结果TRIM29在癌组织中的表达显著高于癌旁组织(79.07%vs.4.65%,χ^(2)=10.216,P=0.001);卵巢癌患者癌组织中TRIM29的表达与国际妇产科联盟(FIGO)分期、病理分级及淋巴结转移有关(P<0.05)。TRIM29阳性表达患者化疗耐药性为48.53%,高于TRIM29阴性表达患者的11.11%(χ^(2)=9.457,P=0.002)。Cox回归分析显示,FIGO分期、淋巴结转移、TRIM29阳性表达是影响卵巢癌患者顺铂化疗耐药性的因素(P<0.05)。随访截至2023年1月30日,TRIM29阳性表达患者总体生存率为72.10%,低于TRIM29阴性表达患者的94.40%(χ^(2)=3.873,P=0.049)。结论TRIM29在卵巢癌组织中呈高表达,TRIM29阳性表达可显著增加卵巢癌顺铂化疗耐药性,且可提示患者预后情况。

结核分枝杆菌PE_PGRS29蛋白结构与功能的生物信息学分析

为了运用生物信息学方法对结核分枝杆菌Rv1468c基因编码蛋白PE_PGRS29的结构和功能进行预测分析,Rv1468c基因相关信息从Genbank数据库中提取;运用ProtParam、Protscale、NetPhos、TMHMM、SOPMA、SWISS-MODEL等在线软件预测分析PE_PGRS29蛋白的理化性质、亲疏水性、磷酸化位点、跨膜螺旋结构和二级结构并对其进行三级结构建模,PE_PGRS29蛋白的B细胞以及T细胞抗原表位使用BLAST、ABCpred和SYFPEITHI软件进行预测,PE_PGRS29蛋白的相互作用蛋白用STRING数据库进行分析,使用MEGA-X软件对PE_PGRS29蛋白构建进化树。结果表明:PE_PGRS29蛋白含有370个氨基酸,分子式为C1375H2111N431O465S3,原子总数4385,消光系数为9970,280 nm处的吸光度为0.309;平均疏水性为0.199,为亲水性蛋白,第331位氨基酸亲水性得分最高为-1.533,第51位氨基酸疏水性得分最高为2.378。该蛋白性质稳定,α-螺旋(Hh)、β-转角(Tt)、β-折叠(Ee)和无规则卷曲(Cc)在该蛋白质二级结构中分别占21.89%、10.54%、21.89%和45.68%。综上所述,生物信息学分析PE_PGRS29蛋白为结核分枝杆菌表面稳定亲水性蛋白,与结核分枝杆菌的泛素化介导异种自噬清除密切相关。该蛋白含有多个T、B细胞抗原表位,可作为结核治疗的潜在分子靶点。

苦参碱抑制大肠癌HT-29细胞环氧化酶-2表达的研究

目的从基因和蛋白水平探讨中药成分苦参碱 (matrine)对大肠癌HT-2 9细胞环氧化酶-2(COX-2 )表达的影响。方法分别采用RT-PCR、Western blot、ELISA等方法检测不同浓度苦参碱处理HT-2 9细胞前后COX-2mRNA、蛋白及其产物前列腺素E2 (PGE2 )水平的改变。结果苦参碱可抑制HT-2 9细胞COX-2mRNA、蛋白表达及PGE2 合成水平 ,但对COX 1无影响。当苦参碱 2 .0mg/ml处理时 ,COX 2mRNA表达在处理后 6h和 9h时抑制率均为 10 0 % ;细胞培养液PGE2 合成水平在 9h时抑制率为6 3.9% ;COX-2蛋白表达在 12h和 2 4h时抑制率分别为 4 8%和 10 0 %。结论苦参碱具有选择抑制HT-2 9细胞COX-2的基因转录、蛋白表达和功能活性等作用 ,在一定浓度和时间范围内 。

熊果酸诱导结肠癌HT-29细胞株凋亡的实验研究

目的探讨熊果酸诱导结肠癌HT-29细胞株凋亡的作用机制。方法用不同浓度的熊果酸处理HT-29细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色检测熊果酸对HT-29细胞的增殖抑制效应,采用形态学、TUNEL法、流式细胞术检测细胞凋亡的发生,应用免疫组织化学SP法检测凋亡相关基因caspase-9．bax表达的变化。结果熊果酸在体外对HT-29细胞有中度增殖抑制效应,在熊果酸作用下,HT-29细胞出现显著的细胞凋亡征象,TUNEL显示细胞固缩,核染色质聚集或断裂,形成凋亡小体。流式细胞术检测在G_1期之前出现sub-G_1峰,凋亡率最高为11．63％,熊果酸的作用具有浓度和时间依赖性。在HT-29细胞凋亡过程中,凋亡相关基因easpase-9和bax的表达依次增强。结论熊果酸在体外对HT-29细胞有诱导凋亡的作用。其作用机制可能是通过促进caspase-9的活化和bax的表达上调来实现。

重组人IL-29的原核表达、纯化及活性分析

目的:在大肠杆菌中表达具有活性的重组人白细胞介素-29(IL-29).方法:用PCR技术扩增人IL-29成熟蛋白的编码序列,克隆入原核表达载体pET-44Ek/LIC中,构建融合表达载体pET-44Ek/LIC-IL-29,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达IL-29融合蛋白,经镍柱亲和层析纯化,然后用肠激酶消化除去N端融合标签得到完全天然状态的重组人IL-29,经N-端氨基酸测序鉴定纯化的IL-29,用细胞病变抑制法测定其活性.结果:成功构建了表达载体pET-44Ek/LIC-IL-29,DNA序列测定结果与预期结果一致.在30℃培养条件下,IPTG诱导表达的IL-29融合蛋白占菌体蛋白总量43%左右,并且大部分以可溶形式存在.纯化后的融合蛋白经肠激酶切割和回收后,所得目的蛋白(IL-29)纯度大于96%,该蛋白N-端序列与理论值一致,其抗病毒活性与IFN-α2b相当.结论:获得了具有生物学活性的重组人IL-29.

健脾解毒汤对人大肠癌细胞HT-29基质裂解蛋白-9基因表达及蛋白分泌影响的实验研究

目的探讨健脾解毒汤抗人大肠癌HT-29细胞转移的分子机制。方法健脾解毒汤加减后按功效分为基本方、清热解毒、活血化瘀、补脾益气、补血益气及扶助正气方,将各方剂水提物与人大肠癌HT-29细胞进行体外培养,四甲基氮唑蓝比色法(MTT法)检测各组细胞活力,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组肿瘤细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA基因表达和蛋白分泌的变化。结果各组中药对HT-29细胞均有不同程度的抑制作用,相同方剂组高浓度抑制作用强于低浓度,滋阴组在1 000μg/ml浓度时抑制率达到峰值(46.1%),且较基本方及清利组有显著性差异(P<0.05)。与空白对照组比较,各中药组肿瘤细胞MMP-9 mRNA基因表达水平被下调,MMP-9蛋白分泌不同程度受到抑制。其中,滋阴组抑制效果最为显著(P<0.01),较基本方及清利组亦有显著性差异(P<0.05)。结论健脾解毒汤及其加减方对大肠癌细胞的增殖、侵袭及转移具有抑制作用,通过下调肿瘤细胞MMP-9 mRNA基因表达从而抑制蛋白分泌是可能的机制之一。

嗜酸乳杆菌胞外蛋白调控MAPK和PI3K-AKT信号途径关键蛋白活化水平

探讨并揭示嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CICC6005分泌的相关蛋白质促进肠道健康及分子机制具有重要研究价值。本实验在确定了L.acidophilus CICC6005分泌的胞外蛋白抑制HT-29结肠癌细胞增殖的基础上,进一步探讨67 ku和37 ku的胞外蛋白通过何种途径发挥抑制结肠癌细胞增殖。研究以HT-29细胞作为靶细胞,用丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)和磷脂酰肌醇-3激酶-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3-kinase-protein kinase B,PI3K-AKT)信号通路为考察对象,以Western Blotting为手段,分析两个通路中关键的靶点蛋白p38、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、磷酸化p38(phosphorylated p38,p-p38)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)、磷酸化的细胞外信号调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated AKT,p-AKT)、PI3K的表达水平,以探讨并阐述源于L.acidophilus CICC6005胞外蛋白调控结肠癌细胞增殖状况的分子机制。结果表明,不同质量浓度的67 ku和37 ku胞外蛋白分别作用HT-29细胞一定时间后,两种胞外蛋白均具有下调两个信号通路途径中p-ERK1/2、p-p38、p-AKT、PI3K蛋白的表达,且存在浓度依赖关系;但对p-JNK、ERK1/2、p38、JNK蛋白的表达没有影响。因此,源于L.acidophilus CICC6005分泌的37 ku和67 ku胞外蛋白表现出显著的抑制HT-29细胞增殖的功能,其机制可能与调控MAPK和PI3K-AKT两个信号通路中几个关键的靶点蛋白的活化水平相关。该研究结果提示,食用嗜酸乳杆菌其分泌的胞外蛋白质将达到维护肠道健康的目标。

PKC激活剂佛波酯PMA和抑制剂Staurosporine对大肠癌HT-29细胞黏附作用的影响

目的 探讨蛋白激酶C(PKC )激活剂佛波酯PMA和PKC抑制剂Staurosporine(SP)对大肠癌HT -2 9细胞黏附作用的影响。方法 采用体外细胞培养观察、细胞黏附人脐带静脉内皮细胞(HUVECs)测定、Westernblot分析黏附分子E Cadherin(E Cad)、LamininReceptor(LnR)、αCatenin和αCatenin表达等方法,研究PMA和SP对HT- 2 9细胞黏附作用的影响。结果 从体外细胞培养观察和黏附HUVECs实验结果发现,10 0nmol/LPMA处理后,和培养液对照组相比可见HT- 2 9细胞由圆形变成成纤维细胞样生长,细胞发生游走、扩散,HT -2 9细胞间黏附减弱,而对HUVECs的黏附增强(P <0 .0 5 )。而10 0nmol/LPMA和10 0nmol/LSP联合处理HT 2 9细胞,可见细胞成片生长,HT- 2 9细胞间黏附增强,而对HUVECs的黏附则降低(P <0 .0 5 )。Westernblot分析结果提示,培养液对照组细胞可较高水平表达E Cad、LnR ,而低水平表达αCatenin、αCatenin。10 0nmol/LPMA作用细胞可诱导HT- 2 9细胞LnR表达水平增强,而E Cad表达水平轻度减弱,对αCatenin、α- Catenin表达水平无作用。而SP可拮抗PMA的作用,使LnR表达水平降低,E Cad表达水平增强,而对α- Catenin和α- Catenin的表达亦无影响。结论 PKC激活剂佛波酯PMA可促使肿瘤细胞间的同质性黏附能力减弱,与HUVECs间?

蛋白激酶C对大肠癌HT-29细胞骨架影响的形态学研究

目的:从形态学角度探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)对大肠癌细胞骨架的调节作用。方法:采用考马斯亮蓝法和间接免疫荧光法显示PKC激活剂PMA和抑制剂Staurosporine(SP)对大肠癌HT-29细胞骨架微丝纤维、微管蛋白(tubulin)、黏着斑纽蛋白(vinculin)表达的影响,研究PKC对HT-29细胞骨架调节作用。结果:HT-29细胞骨架微丝、微管纤维和黏着斑数量丰富,但纤维短,排列紊乱,无分极现象;而PMA处理可使细胞骨架出现分极现象,骨架微丝、微管纤维和黏着斑数量减少,向两极放射排列,纤维稀疏,并可见向外伸展的板层(lamellae)结构和板状伪足(lamellipodia);而SP可抑制PMA的作用,使细胞骨架微丝、微管纤维和黏着斑数量增多、增粗,排列规则,边界完整,形成完整的骨架网络结构。结论:PMA通过激活PKC表达,促进骨架蛋白微丝、微管的解聚和黏着斑的解体,有利于细胞骨架的重组,促进细胞改变形态利于扩散、运动;SP可拮抗PMA作用,通过抑制PKC表达,导致骨架蛋白不能解聚或解体,不利于细胞骨架的重组,影响细胞的移动。推测PKC对细胞侵袭、转移的调节可能部分涉及了其调节细胞骨架的机制。

PSI诱导PC12细胞帕金森病模型中ERp29蛋白表达

目的:探讨泛素-蛋白酶体系统(UPS)功能障碍诱发帕金森病(PD)细胞模型的作用机制,为深入研究PD的发病机制提供理论依据。方法:建立PSI诱导的PC12细胞模型,实验组、对照组分别加入PSI和DMSO(终浓度为10μmol.L-1)孵育36 h后提取蛋白,应用荧光差异凝胶电泳(DIGE)系统获得差异蛋白点,运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF Pro MS)鉴定出差异蛋白。结果:实验组与对照组比较,在36 h可见细胞内嗜酸性类Lewy小体形成及细胞凋亡(细胞核呈固缩状或碎裂状),凋亡百分率为25.53%。实验组内质网蛋白ERp29与对照组比较表达量显著降低,差异有显著性(P<0.01)。结论:内质网应激(ERS)在UPS功能障碍引起PD的病理变化过程中起重要作用。

蛋白激酶C调控大肠癌HT-29细胞粘附、侵袭能力的研究

目的探讨蛋白激酶C(ProteinKinaseC,PKC)对大肠癌HT-29细胞体外粘附、侵袭能力的调控作用。方法采用体外细胞培养的方法,通过PKC激动剂佛波酯PMA和抑制剂Staurosporine(SP)对大肠癌HT-29细胞粘附人脐带静脉内皮细胞(HUVECs)能力、侵袭血管小块的形态学和侵袭人羊膜能力影响的研究,探讨PKC对HT-29细胞体外粘附、侵袭能力的调控作用。结果采用3H-TdR标记的同位素液闪测定发现,PMA不同浓度处理HT-29细胞可使其粘附HUVECs的能力增强,在一定浓度范围内,随着PMA浓度的增加,粘附作用也逐渐增强,SP可拮抗HT-29细胞粘附HUVECs的作用。侵袭血管小块的扫描电镜观察发现,PMA处理细胞后,细胞侵袭血管的能力增强,细胞伸出伪足,向血管内侵袭,而SP可拮抗PMA作用,细胞侵袭性下降。PMA可显著增强HT-29细胞侵袭人羊膜的能力,100nmol/LPMA诱导4h,可使HT-29细胞在体外获得最大的侵袭羊膜的能力,而SP则可拮抗PMA的这种诱导作用。结论PKC对HT-29细胞体外粘附、侵袭能力存在调控作用,PKC的激活使HT-29细胞粘附性、侵袭性增强,而PKC的抑制使HT-29细胞粘附性、侵袭性下降。

内质网蛋白29过表达慢病毒载体的构建及其对胃癌细胞生物学行为的影响

目的:构建内质网蛋白29 (ERp29)慢病毒过表达载体,探讨ERp29过表达对胃癌MGC803和SGC7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:构建带有红色荧光蛋白标签的ERp29基因表达质粒的慢病毒(pCDH-ERp29)和对照质粒(pCDH-Vector),分别感染MGC803和SGC7901细胞;荧光显微镜观察细胞感染情况;CCK-8和平板克隆实验检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞的增殖能力;Transwell小室实验分别检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭能力;应用Real-time PCR和Western blotting技术分别检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞中ERp29mRNA和蛋白表达水平。结果:酶切鉴定显示成功构建pCDH-ERp29过表达载体,荧光显微镜下观察到成功感染胃癌细胞。CCK-8实验和平板克隆实验检测,与pCDH-Vector组比较,pCDH-ERp29组MGC803和SGC7901细胞增殖能力无明显变化(P>0.05);Transwell小室实验,与pCDH-Vector组比较,pCDH-ERp29组MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭细胞数明显减少(P<0.05)。pCDH-ERp29组细胞中ERp29mRNA和蛋白表达水平明显高于pCDH-Vector组(P<0.05)。结论:成功构建过表达ERp29基因的慢病毒载体,过表达ERp29基因可明显抑制胃癌MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭。

蛋白激酶C对大肠癌细胞间隙通讯和粘附分子表达的调节

目的:探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)对大肠癌HT-29细胞间隙通讯和粘附分子表达的调节作用。方法:采用激光共聚焦对细胞间隙通讯(GJIC)功能测定,用Western blot分析E-cadherin(E-cad)、laminin receptor(LnR)、α-catenin和β-catenin粘附分子表达,研究PKC激活剂佛波酯PMA和抑制剂staurosporine(SP)对HT-29细胞间隙通讯和粘附分子表达的调节作用。结果:GJIC功能测定提示,PMA可延滞GJIC功能恢复(P<0.05)。但SP和PMA共同作用细胞后,可使GJIC功能恢复明显增快,与PMA处理组比较,差异显著(P<0.05)。Western blot分析提示,HT-29细胞可高表达E-cad、LnR,而低表达α-catenin、β-catenin。100 nmol/L PMA可诱导细胞表达LnR增强,使E-cad表达下调,但对α-catenin、β-catenin表达无影响。而SP可拮抗PMA的作用,使LnR表达下降,E-cad表达增强,对α-catenin和β-catenin的表达作用亦无影响。结论:PMA和SP对细胞表达E-cad、LnR的作用可能受到PKC调控,PMA和SP调节HT-29细胞粘附的机制可能还涉及其影响了细胞的GJIC功能,可能与PMA和SP调控细胞E-cad表达机制有关。

PSA启动子介导的TAT-p21^(WAF1/CIP1)融合蛋白在前列腺癌细胞中的特异表达及活性初探

目的:设计并构建含有前列腺组织特异性抗原(PSA)启动子的TAT-p21WAF1/CIP1融合蛋白真核表达载体(pPSA-TAT-p21),使由TAT蛋白转导结构域(TAT)介导的抑癌基因蛋白p21WAF1/CIP1(p21)能够在前列腺癌细胞中实现特异性的跨膜转运,增强p21对前列腺癌的抑制作用。方法:利用PCR技术构建含有PSA启动子、TAT蛋白转导序列和p21读码框架的真核表达载体pPSA-TAT-p21,并进行酶切、测序鉴定。脂质体法在前列腺癌LNCaP细胞和大肠癌HT-29细胞中转染上述表达载体及对照质粒后进行反转录PCR(RT-PCR),检测p21的mRNA以及蛋白在不同细胞中的表达情况。MTT法检测转染pPSA-TAT-p21后LNCaP细胞的增殖情况。结果:成功构建pPSA-TAT-p21真核表达载体。RT-PCR和Western blotting结果显示PSA-TAT-p21在前列腺癌细胞中有明显表达,在大肠癌细胞中基本不表达,呈现特异性的表达,而由CMV启动子介导的p21(pCMV-21)对照组在两个细胞株中均有表达。细胞增殖实验结果显示,含有TAT蛋白转导结构域的PSA-TAT-p21的融合蛋白对前列腺癌细胞增殖的抑制作用明显高于不含TAT的PSA-p21蛋白。结论:pPSA-TAT-p21能够在前列腺癌细胞中特异性地高效表达,为前列腺癌基因的靶向治疗提供了实验依据。

大肠癌细胞侵袭转移的PKC调节机制研究

目的 探讨蛋白激酶C(PKC)对大肠癌细胞侵袭转移的调节机制。方法 采用羊膜侵袭培养系统和明胶酶谱分析的方法 ,研究PKC激活剂佛波酯PMA ,对人大肠癌细胞株HT 2 9体外侵袭作用的影响及PKC抑制剂staurosporine(SP)对PMA的拮抗作用 ,研究这种体外的侵袭作用与细胞分泌 72kD的基质金属蛋白酶MMP 2和 92kD的基质金属蛋白酶MMP 9的关系。结果 PMA可显著增强HT 2 9细胞的侵袭性 ,与对照组相比 ,有显著性差异 (P <0 .0 1) ,而SP则可拮抗PMA的这种诱导作用。PMA还可增加HT 2 9细胞分泌MMP 2和MMP 9,而SP则可拮抗PMA的这种诱导作用 ,抑制MMP 2和MMP 9的分泌。结论 PKC可调节大肠癌细胞侵袭转移 ,PKC的激活可诱导大肠癌细胞侵袭性增强和增加MMP 2和MMP 9的分泌 ,PKC的抑制可促进大肠癌细胞侵袭性降低和减少MMP 2和MMP 9的分泌。MMP 2和MMP 9的分泌与肿瘤细胞侵袭性有密切关系 ,PKC可能通过调节MMP 2、MMP

乳源酪蛋白糖巨肽对NF-κB信号通路中关键蛋白的调控作用

以结肠癌细胞HT-29为细胞系,在确定乳源性酪蛋白糖巨肽(casein glycomacropeptide,CGMP)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的HT-29细胞核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)亚单位p65蛋白影响的基础上,在最适作用时间条件下,利用Western blotting技术进一步检测乳源CGMP对NF-κB信号通路上关键蛋白IκBα、p-IκBα、E3RSIκB、UBC5表达水平的影响,以阐述乳源CGMP调控NF-κB信号通路中关键蛋白的作用机制。结果表明:乳源CGMP组的3种质量浓度(0.001、0.010、0.100?μg/m L)均可在一定程度上抑制LPS诱导的HT-29细胞NF-κB信号通路上IκBα蛋白的降解,0.100?μg/m L作用较为明显,与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01)。研究明确地证实了乳源CGMP可通过抑制p-IκBα、E3RSIκB、UBC5蛋白的表达来抑制IκBα蛋白的降解,进而抑制NF-κB信号通路的激活。结论:乳源CGMP可显著降低NF-κB信号通路关键蛋白IκBα的降解,其机制是抑制了IκBα的磷酸化和泛素化,使p-IκBα和泛素化关键蛋白E3RSIκB和UBC5的表达均有所下降,进而减少了IκBα的降解,增加了IκBα-p65-p50蛋白三聚体的数量,使p65蛋白核移位效应降低,进而减少下游基因的表达。因此,研究结果科学地阐释了乳源CGMP是通过调控NF-κB信号通路发挥抗炎的作用。

蛋白激酶C对大肠癌细胞转移特性调控的实验研究

目的:探讨蛋白激酶C(protein kinase C.PKC)对大肠癌细胞转移特性的调控作用。方法:采用羊膜侵袭培养系统和明胶酶谱分析的方法,研究了PKC激活剂PMA对人结肠癌细胞株HT-29体外侵袭作用的影响及PKC抑制剂Staurosporine(sP)对PMA的拮抗作用,以及研究了这种体外的侵袭作用与细胞分泌Ⅳ型胶原酶,包括72kDⅣ型胶原酶(MMP-2)和92kDⅣ型胶原酶(MMP-9)的关系。结果:PMA可显著增强HT-29细胞的侵袭性,与对照组相比,具有显著性差异(P<0.01).而SP则可拮抗PMA的这种诱导作用。PMA还可增加HT-29细胞分泌MMP-2和MMP-9,而SP则可拮抗PMA的这种诱导作用,抑制MMP-2和MMP-9的分泌。结论:蛋白激酶C可能是调控肿瘤细胞侵袭、转移的重要因素。PKC的激活可诱导肿瘤细胞侵袭性增强和分泌MMP-2和MMP-9增加,SP可能通过抑制PMA对PKC的激活,进而抑制了肿瘤细胞的侵袭和分泌MMP-2和MMP-9。MMP-2和MMP-9的分沁与肿瘤细胞侵袭性有密切关系。

促炎性细胞因子对大鼠胰岛β细胞miR-29家族及抗凋亡蛋白表达水平的影响

目的 :探讨促炎性细胞因子对胰岛β细胞mi R-29家族及抗凋亡蛋白水平的影响。方法 :将大鼠胰岛细胞系INS-1细胞在加或不加促炎性细胞因子混合物(IL-1β10 ng/m L、TNF-α50 ng/m L、IFN-γ50 ng/m L)的培养液中培养24 h,设立对照组、促炎性细胞因子干预组。流式细胞仪测细胞凋亡,实时荧光定量PCR检测INS-1细胞mi R-29a/b/c表达以及抗凋亡基因骨髓细胞白血病蛋白1(myeloid cell leukemia 1,Mcl-1)m RNA、B细胞淋巴瘤蛋白2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)m RNA的表达水平,Western blot技术检测Mcl-1、Bcl-2蛋白的表达情况。结果:1促炎性细胞因子干预的INS-1细胞mi R-29a/b表达水平较正常对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05),mi R-29c表达水平较正常对照组有上升趋势,但无统计学差异(P>0.05);2促炎性细胞因子干预组INS-1细胞Mcl-1 m RNA、Bcl-2 m RNA表达水平较对照组减少,但差异无统计学意义(P>0.05);3促炎性细胞因子干预组INS-1细胞抗凋亡蛋白Mcl-1、Bcl-2表达水平较正常对照组明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);4促炎性细胞因子干预组细胞凋亡率增高,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:促炎性细胞因子刺激处理的INS-1细胞mi R-29a/b表达均上调,抗凋亡蛋白Mcl-1、Bcl-2下调,凋亡率上升,推测促炎性细胞因子可能通过调节mi R-29家族及抗凋亡蛋白的表达水平诱导胰岛β细胞凋亡,从而促进1型糖尿病的发生。

杂交水稻寻杂29种子蛋白质组分的研究

本研究用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析寻杂29单粒种子中清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白的亚基组成.SDS-PAGE表明,没有巯基乙醇(ME)时,谷蛋白以二硫键连接亚基呈高分子量形式存在.寻杂29和常规品种云-1比较,谷蛋白在溶解性,结构方面存在差异.寻杂29与其三系亲本,以及云-1比较,它们的种子盐溶蛋白在多肽组成和含量上存在明显差异.水稻种子盐溶蛋白的差异可考虑作为种子纯度判断的指标.

5-氨基水杨酸对人结肠癌细胞株HT-29增殖、凋亡以及细胞周期的影响

背景:溃疡性结肠炎相关结直肠癌(Uc CRC)是溃疡性结肠炎(UC)最严重的并发症,5-氨基水杨酸(5-ASA)能降低Uc CRC的发生风险。目的:探讨5-ASA对人结肠癌细胞株HT-29增殖、凋亡以及细胞周期的影响,明确5-ASA对Uc CRC的抑制作用。方法:以不同浓度(0、10、20、30、40 mmol/L)5-ASA作用于HT-29细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖情况;采用TUNEL法检测细胞凋亡情况;采用流式细胞术检测细胞周期;采用免疫组化法检测细胞有丝分裂调节因子Aurora B、BubR1蛋白表达。结果:5-ASA 10、20、30、40 mmol/L组HT-29细胞增殖抑制率、凋亡率随5-ASA浓度升高而升高(P<0.05)。5-ASA 30、40 mmol/L组G0/G1期细胞比例显著低于0、10、20 mmol/L组(P<0.05);5-ASA 0、10、20、30 mmol/L组S期细胞比例均显著低于40 mmol/L组(P<0.05);5-ASA 30、40 mmol/L组G2/M期细胞比例显著高于0、10、20 mmol/L组(P<0.05)。Aurora B、BubR1平均光密度(MOD)值随5-ASA浓度升高而降低(P<0.05)。5-ASA浓度与细胞增殖抑制率、凋亡率呈正相关(P<0.05),与Aurora B、BubR1 MOD值呈负相关(P<0.05)。Aurora B、BubR1 MOD值与细胞增殖抑制率、凋亡率、G2/M期细胞比例呈负相关(P<0.05),与G0/G1期细胞比例呈正相关(P<0.05)。Aurora B与BubR1 MOD值呈正相关(P<0.05)。结论:5-ASA可抑制HT-29细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能与5-ASA抑制Aurora B、BubR1表达,继而影响细胞周期有关。