FAK抑制剂PF-562271减轻老化血小板诱导的人脐静脉内皮细胞损伤

目的探究FAK抑制剂对老化血小板诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。方法实验分为空白对照组、脂多糖(LPS)组、造模组(LPS+Plt)和FAK抑制剂PF-562271组(LPS+Plt+PF-562271)。通过Western blot和免疫荧光检测FAK、pFAK和PECAM-1的蛋白表达。流式细胞术检测HUVEC活性氧(ROS)含量。细胞通透性和跨内皮细胞电阻实验,检测HUVEC屏障功能的变化。RT-qPCR检测炎性因子mRNA表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液中,炎性因子的分泌情况。免疫荧光检测加入ROS抑制剂维生素C(Vit.C)后,PECAM-1的表达。结果脂多糖和老化血小板处理后,FAK、pFAK和PECAM-1的蛋白表达增高,加入PF-562271后,FAK、pFAK和PECAM-1的蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。流式细胞术结果显示,脂多糖和老化血小板可促进ROS的释放,而加入PF-562271后,ROS释放减少(P<0.001)。脂多糖和老化血小板导致内皮细胞屏障受损,PF-562271可缓解内皮细胞屏障功能的损伤(P<0.01)。脂多糖和老化血小板促进内皮细胞炎症因子TNF-α、IL-6、IL-8的表达,PF-562271可降低炎症因子的表达(P<0.05)。加入维生素C后,PECAM-1蛋白表达降低(P<0.01)。结论FAK抑制剂PF-562271可通过改善氧化应激水平和降低炎症反应,缓解脂多糖和老化血小板诱导的内皮细胞损伤。

PF-127水凝胶联合骨髓间充质干细胞外泌体来源miR-132诱导成骨分化修复牙槽骨缺损

目的:探究PF-127水凝胶联合骨髓间充质干细胞外泌体来源miR-132诱导成骨分化对牙槽骨缺损的修复作用。方法:培养骨髓间充质干细胞,(bone mesenchymal stem cells,BMSCs),并转染anti-miR-132、anti-miR-NC质粒。制备BMSCs来源外泌体(bone mesenchymal stem cells-exosomes,BMSCs-exo),蛋白质印迹法鉴定表达标志物。制备PF-127水凝胶和BMSCs-Exo复合物,PKH67标记法检测BMSCs的摄取;茜素红染色检测BMSCs的成骨能力;逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测细胞中miR-132表达和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)mRNA表达。建立牙槽骨缺损大鼠模型,将大鼠随机分为PF-127水凝胶组、PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-NC组和PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-132组。微型计算机断层扫描(Micro-computed tomography,micro-CT)评估牙槽骨缺损情况;蛋白质印迹法检测牙槽骨组织中ALP、OCN、Runx2蛋白表达。结果:anti-miR-132组BMSCs中miR-132表达明显低于anti-miR-NC组(P<0.05),提示anti-miR-132成功转染至BMSCs中。BMSCs-exo-anti-miR-NC组和BMSCs-exo-anti-miR-132组中外泌体标志物CD9和CD63显著表达。和BMSCs-exo-anti-miR-NC组相比,BMSCs-exo-anti-miR-132组中miR-132表达明显降低(P<0.05)。和PF127水凝胶组相比,BMSC-exo-anti-miR-NC组、PF127水凝胶+BMSC-exo-anti-miR-NC组、PF127水凝胶+BMSC-exo-anti-miR-132组中miR-132表达均明显降低,茜素红染色相对活性、细胞中Runx2、ALP和OCN mRNA表达均明显增加,且PF127水凝胶+BMSC-exo-anti-miR-132组变化最显著(P<0.05)。和Control组相比,PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-NC组和PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-132组BV/TV比值、BMD、Tb.N和Tb.Th及细胞中Runx2、ALP、OCN蛋白表达均明显升高,Tb.Sp明显降低(P<0.05),且PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-132组变化最显著。结论:PF-127水凝胶联合骨髓间充质干细胞来源外泌体来源干扰miR-132表达可促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,从而促进牙槽骨缺损大鼠的修复。

Janus激酶1抑制剂PF-04965842

Janus激酶(JAKs)是一类细胞内非受体酪氨酸激酶,介导多种细胞因子和生长因子的信号传导,参与免疫、炎症和造血细胞的发育、分化成熟、凋亡和功能表达等过程。JAK1在JAK家族成员中具有最广泛的细胞因子信号转导途径,JAK1选择性抑制剂可以抑制参与炎症和免疫功能的许多细胞因子,同时避免因抑制其他JAKs所引起的不良反应。PF-04965842是辉瑞公司正在开发的JAK1抑制剂,用于炎症性疾病的治疗。目前PF-04965842在中重度特异性皮炎治疗中的作用及与其他药物相互作用的影响研究正处于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期临床研究中,其有效性和安全性已经得到验证。

PI3K/mTOR双重抑制剂PF-04691502诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的:检测PI3K/mTOR双重抑制剂PF-04691502对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响及可能的分子机制。方法:MTT法检测细胞活力;流式细胞术分析细胞周期变化;Annexin V-FITC/PI双标法测定细胞凋亡;免疫印迹分析细胞内蛋白表达的变化。结果:PF-04691502处理SGC-7901细胞后,降低细胞的活力并促进细胞阻滞于G1期,同时抑制cyclin D1的表达并上调p21的蛋白水平。PF-04691502可明显诱导SGC-7901细胞凋亡,其机制与其促进caspase家族成员的活化并切割聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]底物密切相关。结论:PI3K/mTOR双重抑制剂PF-04691502能够通过阻滞细胞周期来抑制SGC-7901细胞的增殖,同时能够激活细胞内caspase,使PARP发生剪切而诱导细胞凋亡。

一种新型的口服c-Met抑制剂PF-2341066可通过抗增殖和抗血管生成两种机制发挥抗肿瘤作用

1文献来源 Zou HY, Li Q, Lee JH, et al. An orally available small-molecule inhibitor of c-Met, PF-2341066, exhibits cytoreductive antitumor efficacy through antiproliferative and antiangiogenic mechanisms [J]. Cancer Res, 2007, 67 （ 9 ） ： 4408 -4417.

FGF21类似物通过抑制线粒体自噬促进白色脂肪细胞“棕色化”的机制研究

目的:探讨成纤维细胞生长因子21(FGF21)长效类似物PF-05231023通过抑制白色脂肪组织(WAT)线粒体自噬对WAT“棕色化”的作用以及其中涉及的分子机制。方法:(1)使用高脂饮食(HFD)复制小鼠肥胖模型,18只C57BL/6J小鼠被分为3组:正常对照(NC)组、HFD组和PF-05231023干预(PF+HFD)组,每组6只。饲养12周后麻醉小鼠,摘眼球取血,分离血清,检测小鼠血清中的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度胆固醇脂蛋白(LDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平;收集小鼠腹股沟WAT(iWAT)、附睾WAT(eWAT)和肝脏,一部分组织用于Western blot实验,检测“棕色化”相关指标解偶联蛋白1(Ucp-1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)以及线粒体自噬相关指标PTEN诱导激酶1(Pink1)、parkin、beclin-1和微管相关蛋白1轻链3-II(LC3-II)蛋白表达水平,另一部分固定于多聚甲醛中,用于后续HE和免疫组织化学染色。(2)3T3-L1细胞采用经典的“鸡尾酒”方法诱导成为成熟的脂肪细胞。CCK-8法检测不同浓度PF-05231023干预对细胞活力的影响。用PF-05231023干预3T3-L1细胞48 h,收集细胞团块用于Western blot实验检测“棕色化”相关指标Ucp-1和PGC-1α以及线粒体自噬相关指标Pink1、parkin、beclin-1和LC3-II蛋白表达水平。油红O染色检测细胞积累。免疫荧光染色检测Ucp-1蛋白含量。随后将3T3-L1细胞分为正常组、PF-05231023干预组、Pink1激动剂MTK458干预组和MTK458+PF-05231023干预组,收集细胞团块用于Western blot实验检测上述指标。结果:(1)PF-05231023干预不影响小鼠能量摄入并且能降低HFD诱导肥胖小鼠的体重、肝重和脂肪重量(P<0.05),降低脂质积累(TC、TG和LDL-C)和肝损伤(ALT和AST)并减轻肝脏空泡样变性和脂肪细胞面积大小(P<0.05);(2)与HFD组相比PF-05231023干预增加了iWAT和eWAT中Ucp-1和PGC-1α蛋白表达水平(P<0.01),免疫组织化学染色结果中PF-05231023干预组比HFD组Ucp-1蛋白含量更高;(3)PF-05231023干预可呈剂量依赖式增加诱导成熟的3T3-L1细胞中Ucp-1和PGC-1α的蛋白表达水平(P<0.01),减少细胞脂质积累,免疫荧光染色结果显示PF-05231023干预后诱导成熟的3T3-L1细胞中Ucp-1蛋白含量增加;(4)PF-05231023干预可抑制iWAT、eWAT和诱导成熟的3T3-L1细胞中线粒体自噬相关指标Pink1、parkin、beclin-1和LC3-II蛋白表达水平(P<0.05);(5)MTK干预可增加Pink1、parkin和beclin-1和LC3-II蛋白表达水平,增加Ucp-1蛋白表达水平,与MTK干预组比,MTK和PF-05231023共同干预后可部分降低Pink1、parkin、beclin-1和LC3-II蛋白表达水平,部分恢复Ucp-1蛋白表达水平(P<0.01)。结论:(1)PF-05231023干预能够改善HFD诱导小鼠的肥胖和相关代谢紊乱;(2)PF-05231023干预能够抑制WAT和诱导成熟的3T3-L1细胞线粒体自噬,并通过抑制线粒体自噬促进“棕色化”;(3)其机制可能与抑制Pink1-parkin信号通路有关。

PF-4989216在人工胃肠液中的稳定性研究

研究PF-4989216在人工模拟胃肠液中的稳定性,为其代谢稳定性研究提供一定的基础。采用RP-HPLC法测定PF-4989216在人工胃肠液放置0,0. 5,1. 0,1. 5,2. 0,3. 0,4. 0,6. 0 h后的含量,计算其降解剩余百分含量。结果表明PF-4989216质量浓度与峰面积在2. 5～160μg/m L(R2=0. 9995,n=7)呈良好线性关系,在37℃空白人工胃肠液(不加酶)及人工胃肠液中的降解剩余百分率大于86. 77%。PF-4989216在模拟人体胃肠道环境的溶液中很稳定,不会发生明显降解,不受胃蛋白酶和胰蛋白酶的影响。

NAP-2和PF-4在烧伤后大鼠骨髓巨核细胞表达变化情况

目的观察大鼠30%Ⅲ度烧伤后趋化因子NAP-2和PF-4在大鼠骨髓巨核细胞的表达变化情况。方法采用免疫组织细胞化学的方法观察烧伤后24h和15d NAP-2和PF-4表达情况。结果大鼠烧伤后24h骨髓巨核细胞特异分泌的趋化因子NAP-2和PF-4明显低于正常组,烧伤后15d巨核细胞表达NAP-2和PF-4较烧伤后24h恢复,但仍低于正常对照组。结论严重烧伤可以导致大鼠骨髓巨核细胞分泌特异趋化因子NAP-2和PF-4的能力减退。

PF-1型旧氟离子选择电极的再利用

基于氟离子选择电极对OH-的敏感性,提出了一种用NaOH溶液活化再生旧氟离子选择电极的方法,实验结果表明:NaOH溶液浓度在0.005～0.05mol·L-1,活化时间在30～35min为宜.将活化的电极用于样品分析及加标回收率的测定,结果令人满意.

趋化因子受体2抑制剂PF-04136309的合成研究

对CCR2抑制剂PF-04136309的合成路线进行改进和优化。以2-溴-5-氯吡啶、间三氟甲基苯甲酸、1,4-环己二酮单乙二醇缩酮为起始原料,经过缩合、亲核加成、偶联、脱保护、还原等7步反应制备PF-04136309。通过优化合成路线,关键中间体4-羟基-4-[5-(2-嘧啶基)-2-吡啶基]环己酮的产率得到了较大幅度的提升,采用Suzuki-Miyaura反应代替镍催化剂的使用避免了无水无氧反应条件,使后处理纯化步骤较现有文献简化。通过优化后的反应路线,PF-04136309的总产率达到44.9%(以2-溴-5-氯吡啶计),较文献报道总产率30.2%(以2,5-二溴吡啶计)有了较大幅度的提升。该合成方法具有原料易得、操作简便、路线简短、产率较高等优点。

有关给定小素数pf-值的有限群

研究了给定小素数pf-值对有限群构造的影响,给出了pf-值为小素数时,这类群的完全分类,其结果为:有限群G的pf-值为1,则G同构于C2或C3;pf-值为2,则G同构于C4,C5,C7或C2×C2。交换群G的pf-值为3,则G同构于C6,C9,C3×C3或C2×C2×C2。

基于增强采样构建的隐式马尔可夫状态模型分析GLP-1R激动剂对GLP-1R激活机制

目的 基于增强采样构建的隐式马尔可夫状态模型,分析胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)激动剂PF-06882961激活GLP-1R的机制。方法 从PDB数据库中下载GLP-1R晶体结构(PDBID:6X1A),基于该晶体结构构建PF06882961与GLP-1R结合的高斯加速动力学(GaMD)体系,模拟PF06882961与GLP-1R结合的动力学轨迹。使用工具包Pyemma读取PF06882961与GLP-1R结合的GaMD动力学轨迹,构建马尔可夫模型。然后分别从一级结构[关键氨基酸残基间的αC间距(Glu247-His180;Glu364-Arg190)]和二级结构[关键α螺旋间扭转角(Val365-Pro358-Ala350;Arg380-Phe390-Met397)]两个层面对构建的马尔可夫模型中PF-06882961与GLP-1R复合物若干构象进行聚类分析,得出5个结构具有差异的PF-06882961与GLP-1R复合物宏观态构象(S1、2、3、4、5),将其可视化后分析各个宏观态构象之间的结构差异,以明确PF-06882961激活GLP-1R的结构基础。结果 从二级结构层面进行聚类分析时,PF06882961与GLP-1R结合后,GLP-1R细胞外结构域部分与跨膜结构域间距离减小,GLP-1R下游的G蛋白发生了重要构象转变。从一级结构及二级结构层面进行聚类分析时,PF-06882961结合GLP-1R后,GLP-1R的跨膜结构域内关键氨基酸残基重排出新的极性网络(Glu364-Tyr241-His180-Glu247),细胞外结构域内由Phe385-Tyr203-Tyr148组成π-π堆叠网络。结论 PF-06882961与GLP-1R结合后,通过由Phe385-Tyr203-Tyr148组成的π-π堆叠网络、由Glu364-Tyr241-His180-Glu247重排而成的新极性网络分别稳定GLP-1R的细胞外结构域及跨膜结构域,从而激活GLP-1R。

几乎优越扩张及Kasch.PF-环

如Ｓ≥Ｒ 是几乎优越扩张。我们证明了如果一环是Ｋａｓｃｈ 环（ＰＦ－ 环） ， 则另一环也是。进一步得到矩阵环 Ｍｎ （ Ｒ） ，ｔｈｅ ｃｏｒｓｓｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔ Ｒ＊ Ｇ （ Ｇ 有限， ｏ （ Ｇ） － １ ∈Ｒ） 是Ｋａｓｃｈ 环（ＰＦ－ 环） ，

生防假单胞菌Pf-5对秀丽隐杆线虫的毒性及其作用机制

[目的]本文旨在研究生防假单胞菌(Pseudomonas protegens)Pf-5菌株的杀线虫活性,以及鉴定其产生的主要杀线虫活性物质。[方法]采用基于sacB基因的蔗糖致死无标记突变体系,构建Pf-5菌株的相关突变体;以模式线虫秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)为作用对象,利用绿色荧光蛋白基因对菌株进行标记,研究菌株对秀丽隐杆线虫的致死效果;利用扫描和透射电镜研究Pf-5菌株杀线虫物质的作用机制。[结果]Pf-5菌株对秀丽隐杆线虫具有很强的致死活性,用不同浓度的Pf-5菌液处理线虫,48h对秀丽隐杆线虫的致死中浓度(LC50)为4.92×10^7CFU·mL^-1,96hLC50为3.58×10^6CFU·mL^-1;处理48h时,野生型Pf-5菌株对秀丽隐杆线虫的致死率达到73.57%,而突变体Pf-5ΔfitD的致死活性显著下降,只有25.04%;Pf-5菌株fitD基因的Delivery结构域和CROPS结构域缺失突变体对线虫的致死活性也显著下降,表明FitD蛋白是Pf-5菌株的主要杀线虫物质。扫描电镜结果表明,Pf-5菌株及其突变体都不会破坏线虫的体壁;透射电镜的结果则表明,Pf-5菌株导致线虫肠道绒毛变薄和脱落,而突变体Pf-5ΔfitD则没有此效果。[结论]生防假单胞菌Pf-5菌株中杀线虫物质为FitD蛋白,初步表明其作用位点在肠道部位。

PF-4989216的合成工艺优化

以价廉易得的丙二腈为起始原料,经二硫化碳/碘甲烷取代、巯基乙酸乙酯环合、桑德迈尔反应制得中间体(5),5再经钨酸钠/双氧水体系氧化进而得到中间体(6),6经吗啉取代后再与2-氟-4-氰基苯硼酸进行Suzuki偶联得到中间体(8),8与甲酰胺/甲醇钠反应进一步制得酰胺9,9与DMF-DMA发生缩合后再与水合肼环合制得PF-4989216,总收率19.6%(以2计),纯度99.73%。该路线反应条件温和、操作简单,具有较好的工业化前景。

PF-4708671和NVP-BEZ235联合用药协同抑制MDA-MB-436和A549细胞增殖

目的研究p70核糖体S6激酶β-1(S6K1)抑制剂PF-4708671激活蛋白激酶B(AKT)的分子机制,以及其联合磷脂酰肌醇-3-激酶/哺乳动物西罗莫司(雷帕毒素)靶蛋白抑制剂NVP-BEZ235对肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法 PF-4708671单独处理人乳腺癌MDA-MB-436和肺癌A549细胞0,1,3,6,12和24 h或与西罗莫司联合处理24 h后,Western蛋白印迹法检测p-S6及p-AKT表达水平;敲低肿瘤细胞中S6K1基因,并用PF-4708671处理野生型和突变型细胞,Western蛋白印迹法检测S6K1及p-AKT473表达水平;PF-4708671和NVP-BEZ235单用及联用于肿瘤细胞,Western蛋白印迹法检测p-S6及p-AKT473的表达水平,同时分别采用平板克隆和CCK8法检测肿瘤细胞增殖和存活。结果 PF-4708671处理肿瘤细胞不同时间后,在抑制S6K1活性的同时增强AKT活性(P<0.01);西罗莫司和PF-4708671都能抑制S6K1活性(P<0.01)并激活AKT,并在联用时进一步增强AKT活性;敲低S6K1基因导致AKT活性增强;PF-4708671处理敲低S6K1基因的突变型细胞,相对于野生型细胞,对AKT活性的激活程度显著减弱(P<0.01);PF-4708671和NVP-BEZ235联用能抑制AKT活性(P<0.01),同时显著降低肿瘤细胞的克隆形成率和增殖活性(P<0.01)。结论 PF-4708671通过抑制S6K1活性反馈激活AKT,这可能是导致其对肿瘤细胞增殖抑制作用减弱的原因之一;PF-4708671和NVP-BEZ235联用对肿瘤细胞生长和增殖的抑制作用明显增强。

MK2抑制剂PF-3644022对视网膜分支静脉阻塞模型大鼠的治疗作用

目的探讨MK2抑制剂PF-3644022对视网膜分支静脉阻塞(BRVO)模型大鼠的治疗作用。方法通过激光光凝建立BRVO模型大鼠,将BRVO模型大鼠随机分为5组(n=12)对照组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。低、中和高剂量组大鼠分别按1 mg·kg^(-1)、5 mg·kg^(-1)、10 mg·kg^(-1)给予2 mL丝裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶2(MK2)抑制剂PF-3644022灌胃,对照组和模型组大鼠给予2 mL蒸馏水或生理盐水灌胃,共治疗21 d。分别在治疗后1 d、7 d和14 d进行眼底照相、光学相干断层扫描(OCT)和荧光素眼底血管造影(FFA)检查,利用苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠视网膜变化,采用免疫荧光染色及Western blot检测各组大鼠视网膜组织中MK2、p-MK2和血管内皮生长因子-α(VEGF-α)的表达。结果HE染色、眼底照相、FFA和OCT检查结果均显示,MK2抑制剂PF-3644022以剂量依赖性方式减轻BRVO模型大鼠视网膜水肿、血管排列紊乱和收缩、视盘陷凹消失等病理现象。Western blot检测结果显示,治疗后1 d,与模型组(1.00±0.05)相比,低剂量组(0.75±0.04)、中剂量组(0.52±0.03)和高剂量组(0.43±0.02)大鼠视网膜组织中VEGF-α蛋白的相对表达水平均显著降低,并呈剂量依赖性降低(均为P<0.05);治疗后21 d,各组大鼠视网膜组织中VEGF-α蛋白的表达均无明显差异(均为P>0.05)。治疗后1 d和21 d,与模型组(1.00±0.05、1.00±0.06)相比,低剂量组(0.51±0.03、0.47±0.02)、中剂量组(0.26±0.01、0.23±0.01)和高剂量组(0.22±0.01、0.21±0.01)大鼠视网膜组织中MK2蛋白的磷酸化水平均显著降低,并呈剂量依赖性降低(均为P<0.05)。结论MK2抑制剂PF-3644022通过减轻视网膜水肿、调节VEGF-α蛋白的表达、抑制MK2活性等作用对BRVO动物模型发挥治疗作用。

PF-300便携式非甲烷总烃测试仪的现场监测应用

传统实验室气相色谱法测试非甲烷总烃的方法通常存在样品衰减、测试时效性以及数据代表性的问题。为此,本文针对传统分析方法的不足,研究使用PF-300便携式非甲烷总烃监测仪,并与在线设备和实验室设备做了监测比对。结果表明,便携式监测仪能够迅速准确的提供具有实时监控效果的数据,其适用于在线设备的验收和比对。

CK1δ/ε抑制剂,PF-670462治疗慢性淋巴细胞白血病的效果

酪蛋白激酶（CK）1δ/ε是非经典Wnt信号通路的关键组成成分,既往研究已证实其可促进慢性淋巴白血病（CLL）的病程进展。现研究人员对CK1δ/ε抑制对原发性CLL细胞的影响进行全面的研究,并用两种Eμ-TCL1诱导的白血病小鼠模型系统分析其治疗潜能。研究人员证实CK1δ/ε抑制剂PF-670462可显著阻滞CLL所有主要亚型的原发性CLL细胞的微环境互作（趋药性、侵袭性以及与基质细胞的交流）。