人/猪OSBPL2同源性比较及猪PFFs靶基因敲除细胞系的建立

目的:基于CRISPR/Cas9技术构建猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts,PFFs)OSBPL2敲除细胞系,为构建小型猪致聋基因缺陷动物模型奠定重要的前期工作基础。方法:首先通过生物信息学方法对人与猪OSBPL2基因共线性和同源性进行分析,预测并模拟人与猪OSBPL2蛋白质二级、三级结构。其次,设计合成靶向猪OSBPL2第5、6外显子设计单导向RNA(single guide RNA,sg RNA),以p X330质粒为载体,构建含有Cas9骨架的重组载体,转染至猪PFFs中,G418药物筛选阳性单克隆细胞。最后,T7EN1酶切实验检测靶向效率,序列分析检测单克隆细胞基因型。结果:生物信息学分析结果表明人与猪的OSBPL2在染色体上具有较好的共线性关系,蛋白质氨基酸同源性高达88%,且具有相似的功能结构域。成功构建打靶OSBPL2基因的Cas9/sg RNA表达载体,转染PFFs细胞,药物筛选获得OSBPL2基因双敲的单细胞克隆并测序证实了基因突变型。结论:人和猪OSBPL2基因具有高度的同源性。构建成功的Cas9/sg RNA表达载体在PFFs中预期实现了OSBPL2基因编辑并获得基因双敲的单细胞克隆,为后续OSBPL2基因敲除猪模型构建提供了必需的实验材料。

碱基编辑器介导的猪IGF2基因高效定点突变

本研究旨在利用碱基编辑器在巴马猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblast cells,PFFs)中对生长性状相关基因胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2,IGF2)进行高效、精确的定点编辑。通过PCR扩增和测序对巴马猪和大白猪的IGF2基因序列进行鉴定,构建靶向巴马猪的sgRNA-IGF2表达载体,进而通过细胞转染、混合细胞编辑效率检测、单克隆细胞筛选及基因型鉴定等技术手段研究不同碱基编辑器对猪IGF2基因靶点的编辑效率及突变类型。结果显示,巴马猪和大白猪IGF2基因第3内含子存在第3072 bp处的单核苷酸多态性(SNP)位点,设计靶向巴马猪IGF2基因的单链寡核苷酸序列。单链寡核苷酸经退火后与BsaⅠ线性化的pGL3-U6-sgRNA质粒进行重组连接,构建sgRNA-IGF2表达质粒,重组质粒测序结果表明,sgRNA序列已经精确连入U6启动子和sgRNA骨架之间。将rA1-BE3、hA3A-BE3、hA3A-BE3-Y130F和hA3A-eBE-Y130F 4种胞嘧啶碱基编辑器分别与sgRNA-IGF2表达质粒共转染至猪胎儿成纤维细胞中,对混合细胞编辑效率进行检测结果表明,对于IGF2基因靶点,hA3A-BE3系列碱基编辑器C到T的编辑效率显著高于rA1-BE3(P<0.05)。流式分选、单克隆细胞培养及鉴定结果表明,虽然有71.43%的hA3A-BE3单克隆细胞已被编辑,但有42.86%的细胞存在插入和缺失(indels);hA3A-BE3-Y130F和hA3A-eBE-Y130F的编辑效率(56.86%和40.38%)虽低于hA3A-BE3(71.43%),但是indels的效率也较低(31.37%和21.15%)。测序结果分析表明,利用碱基编辑器高效筛选到IGF2基因靶点纯合点突变的单克隆细胞。碱基编辑器作为新的基因编辑工具,可以对猪基因组中与经济性状关联的SNP位点进行高效、精确的基因修饰,为加速猪经济性状的遗传改良提供理论与实践基础。

定向型的高校教师培养:美国博士生教育改革的新动向——美国“未来高校教师培养计划(PFF)”评析

为了提高教育质量,美国高等教育非常重视高素质教师的培养。PFF通过改革博士生教育的培养目标和培养方式,定向培养高校教师,确立了高校教师培养的新愿景,对我国博士生教育改革和高等教育质量建设具有重要的启示。

PFF复合反滤层及其在支挡工程中的应用研究

为避免地下水对支挡结构的不利影响,需设置反滤层排除支挡工程背后岩土体的渗水。目前支挡工程多采用混凝土浇筑施工,受墙后空间狭小影响,常规的砂砾石反滤层不易压实,影响支挡工程受力和使用功能。文章结合反滤层的隔离挡土、过滤、排水等基本作用原理,研制开发了一种由隔水层、排水层、透水层相结合形成的具有墙背模板功能的PFF整体式复合反滤层,以适应混凝土支挡结构浇筑施工工法。试验工点排水试验表明,该新型反滤层排出水数量和效率均优于传统的砂砾石反滤层,可在支挡工程中推广应用。

初次全髋置换术后股骨假体周围骨折30例原因分析及对策

目的:总结分析30例全髋置换术后假体周围骨折的形成原因,为减少假体周围骨折的发生和处理提供一些参考.方法:我科自2013-2015年4年间收治的,其中术中骨折15例,术后骨折15例(同时伴有髋关节脱位5例).初次手术诊断股骨颈骨折16例,股骨头缺血性坏死10例,髋关节发育不良4例;平均年龄65岁(55-75岁);左髋18例,右髋12例,男性14例,女性16例.术后骨折平均时间为1.6年(术后6个月-3年).初次使用生物型假体26例,骨水泥假体4例.结果:本组30例中均获得随访,平均随访时间为2.5年(1-4年),30例病人均获得骨性愈合,末次随访时髋关节Harris评分平均为88.4分(82-97分),VAS评分为1.2分(0-2分),所有病例假体稳定性良好,无松动迹象,无感染,无血栓,无关节僵硬,无异位骨化等并发症发生.29例步态正常,1例因中风后遗症而无法自己独立行走,在家属的保护下行走跛行.结论:通过对30例假体周围骨折的分析和治疗,可以有效的预防PFF的发生,而对已有的PFF的治疗本组均获得了满意的效果.

多元宇宙算法及其在电力系统环境经济调度的应用

提出了一种求解电力系统环境经济调度的新方法,该方法利用宇宙空间在随机创建过程中高膨胀率的物体随虫洞在空间移动物体的规律,通过对白洞和黑洞间随机传送物体来实现最优搜索.算法具有运算速度快,收敛性强,适用于高维计算等特点.以总燃料费用最低和总污染排放最少为多目标建立环境经济调度模型,通过PFF定价原则对多目标规划问题进行转化.最后,通过发电厂传统10机组和40机组算例进行仿真.结果表明:本文所提算法具有经济性和有效性.

MR定量分析肝脏和胰腺脂肪含量与非酒精性脂肪性肝病关系的应用研究

目的:探讨MR脂肪定量技术分析肝脏脂肪含量值(LFF)和胰腺脂肪含量(PFF)与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)严重程度及肝功能的关系。方法:选取医院收治的185例接受MR全肝脏mDIXON序列扫描的患者,测量LFF及PFF,并根据肝脏脂肪分数图(FF)将其分为NAFLD组(160例)和对照组(25例)。比较两组患者体质量指数(BMI)、丙氨酸转氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、空腹血糖(FBG)、低密度脂蛋白(LDL-c)、高密度脂蛋白(HDL-c)、LFF和PFF,采用Spearman分析法分析LFF和PFF与各指标的相关性;采用Logistic回归分析法分析NAFLD严重程度的影响因素。结果:NAFLD组160例患者中轻度72例(LFF为5.1%~14.0%),中度76例(LFF为14.1%-28.0%),重度12例(LFF>28.0%);对照组25例患者LFF均正常。NAFLD组与对照组LFF、PFF及BMI比较,差异均有统计学意义(t=17.259,t=9.058,t=7.430;P<0.05),ALT、TG、FBG、LDL-c及HDL-c指标比较,差异均有统计学意义(t=6.591,t=3.957,t=3.267,t=2.112,t=-3.727;P<0.05)。轻度、中度和重度患者的LFF、PFF及BMI比较,差异均有统计学意义(F=21.944,F=16.391,F=5.872;P<0.05),ALT、TG、FBG、LDL-c及HDL-c指标比较,差异均有统计学意义(F=30.240,F=3.984,F=3.863,F=3.398,F=1.214;P<0.05)。BMI、ALT、TG、FBG与NAFLD患者的LFF和PFF均呈明显正相关(rLFF=0.31,r=0.52,r=0.33,r=0.35;rPFF=0.30,r=0.36,r=0.27,r=0.29;P<0.05),与HDL-c呈明显的负相关(r=-0.16,r=-0.3;P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,HDL-c是NAFLD严重程度的独立保护因素(OR=0.004,P<0.05),LFF、PFF、BMI、ALT、TG及LDL均为NAFLD严重程度的独立危险因素(OR=2.252,OR=1.988,OR=1.404,OR=1.196,OR=1.025,OR=5.150;P<0.05)。结论:LFF和PFF与NAFLD严重程度及肝功能指标有密切关系,LFF和PFF的升高是NAFLD加重的独立危险因素,采用MR定量分析LFF和PFF对临床监测NAFLD严重程度及肝功能具有一定的指导意义。

龙马溪组页岩气开发采气井口装置优化措施及建议

涪陵龙马溪组页岩气开发是中国石化重点项目之一,特殊的开采条件对普通采气井口的技术水平提出了新的挑战,比如前期在焦石坝区块,部分已完成分段加砂压裂气井所用的采气井口均存在PFF180-105大通径平板阀压裂作业后阀门关闭不严的缺点。文章结合当前采气井口装置配置和分段压裂工艺,对现有页岩气采气井口装置的适应性进行了分析,提出采气井口装置的优化措施并结合现场实际提出三点改进建议,为页岩气采气井口的进一步规范选型提供理论依据。

猪卵泡液(抑制素)抑制切除卵巢大鼠的FSH脉冲式分泌

已知一些雌性哺乳动物 LH 的分泌是呈脉冲式的,但是尚未证实 FSH 的分泌是否也呈脉冲式,因此作者用切除卵巢的大鼠观察 FSH 分泌形式,并从猪卵泡液(PFF)中获得抑制素(inhibin),用以研究其对 FSH 分泌的影响。材料与方法成年雌性大鼠,实验前4周切除卵巢,静脉插入硅胶管,24小时后开始采血,每10分钟取血250μl,连续3小时。放射免疫法测定血FSH 和 LH 浓度,取血后补入等量盐水。

中国消费者对食品安全的关切——对天津消费者的调查与分析

本研究表明 ,中国的消费者对食物安全非常担忧 ,特别是对蔬菜和奶制品 ,对转基因(GM)食品和有机食品的认识很有限 ,而对绿色食品和无公害食品 (PFF)相对比较熟悉。他们不愿为质量较高的食品支付过多的费用。此外 ,本研究还表明 ,年轻人和受过高等教育的男性是PFF的最早接受者。尽管GM食品最近才出现 ,但是受过高等教育的和追求多样化的消费者将来购买GM食品的可能性非常大。本文最后提出了相关政策建议和有待进一步研究的问题。

对不同职称护士人格特征的调查研究

采用卡特尔１６ＰＦ问卷对天津市２３４名在职护士进行人格特征测评。结果表明：不同职称护士的人格特征在某些项目上差异存在显著性。差异的原因可能与被试者的经历、环境等因素有关。测试结果对于选拔心理素质合格的护理人员以及对护理人员的管理及心理素质的训练有一定意义。

行李箱不再是累赘!能跟着主人去逛街

意大利比亚乔集团推出Gita和Kilo行李箱机器人,这两款行李箱的外型像一个放倒的邮筒,内部是载物空间。行李箱机器人可以通过用户佩戴的专门腰带跟在他们身后,记录走过的路线,可以自己回家。Gita外型像一个放倒的邮筒,内部是载物空间。机器人高66厘米,有两个像自行车一样的窄轮胎,最高时速35公里,可以通过两个轮子反向运转原地转身,充电3小时可以行驶8小时。机器人带有GPS、超声波雷达和摄像头,可以通过用户佩戴的专门腰带跟在他们身后。