miR-103a-3P调控PFK-2对结直肠癌细胞增殖及糖酵解的作用机制

目的探究微小RNA(miR)-103a-3P调控6-磷酸果糖激酶(PFK)-2对结直肠癌细胞增殖及糖酵解的作用机制研究。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测正常结肠上皮细胞及4种结直肠癌细胞系中miR-103a-3p、PFK-2表达水平,将阴性对照、miR-103a-3P、PFK-2类似物转染至结直肠癌细胞中,EdU法检测细胞增殖,葡萄糖检测试剂盒和乳酸检测试剂盒检测糖酵解相关指标,双荧光素酶报告实验证实miR-103a-3P和PFK-2的相互作用。结果结直肠癌细胞系中的miR-103a-3P、PFK-2 mRNA表达量显著高于正常结直肠癌上皮细胞系NCM460(P<0.05),其中HCT116的miR-103a-3P、PFK-2 mRNA升高最大(P<0.05),选其备用。与CC组相比,MN组及PN组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量无统计学差异(P>0.05),MI组、PI组、MP组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显降低(P<0.05)。与MN组相比,MM组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显升高(P<0.05)。与MM组相比,MI组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显降低(P<0.05)。与PN组相比,PM组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显升高(P<0.05)。与PM组相比,PI组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显降低(P<0.05);MI组与PI组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量无统计学差异(P>0.05)。与PI组相比,MP组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告结果显示,转染miR-103a-3P后可显著促进PFK-2-3′-UTR-WT的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变基因无显著影响(P>0.05),且PFK-2与miR-103a-3P呈正相关。结论抑制miR-103a-3P表达可降低结直肠癌细胞增殖,并有效改善糖酵解,其作用机制可能与抑制PFK-2有关。

甘蓝型油菜依赖焦磷酸的磷酸果糖激酶(PFK)基因片段克隆及hpRNAi载体构建

依赖焦磷酸的磷酸果糖激酶(PFK)是糖酵解途径的关键酶。本研究首先构建带有种子特异性napin启动子和Nos终止子的植物表达载体2300-nap及带有组成型35S启动子和Nos终止子的植物表达载体2300-35S;然后用PCR法从甘蓝型油菜(BrassicanapusL.)中油119总基因组中扩增出依赖焦磷酸的磷酸果糖激酶(PFK)基因片段,再以扩增出的PFK基因片段作模板设计引物扩增出一个相应的小片段。将两个PFK基因片段反向连接,插入到植物表达载体2300-nap的napin启动子和nos终止子之间,植物表达载体2300-35S的35S启动子和nos终止子之间,分别构建成可转录表达出发夹RNA(hairpinRNA,hpRNA)结构的种子特异型和组成型油菜RNA干扰载体,为今后油菜利用RNA干扰(RNAi)提高含油量的基因工程研究奠定了基础。

FDP对连续力竭性运动后大鼠PFK活性和线粒体形态的影响

采用分组实验的方法。观察了FDP对PFK活性和骨骼肌线粒体形态的影响。结果显示,FDP可加快PFK活性的恢复,减轻运动中血乳酸升高的程度,促进肌糖元的恢复,并能维护肌线粒体的正常形态结构,有利于连续力竭性运动后机能的恢复。

合成滞育激素对家蚕卵Gpase、NAD-SDH、PFK、FBP活性的影响

二化性蚕品种大造在高温 (2 5℃ )明条件 (每日光照 18小时 )下催青时 ,全部产滞育卵 ,在低温 (16℃ )暗条件 (全天黑暗 )下催青时全部产非滞育卵。低温暗条件下催青的大造在化蛹第 3日注射一定剂量的合成滞育激素 ,可以诱导其产下 70 %左右的滞育卵。这种由合成滞育激素诱导形成的滞育卵 ,在滞育期中Gpase ,PFK ,FBP ,NAD -SDH等与碳水化合物代谢相关的酶活性与非滞育卵不同 ,但与天然滞育卵相似。

环保型绝缘气体C5-PFK—分子的构象分析

目前,环保型绝缘气体C5-PFK因其良好的环保性能和绝缘强度,在中低压气体绝缘电气设备中有替代SF_(6)的潜力。C5-PFK分子存在可旋转的C-C单键,在体系中彼此运动碰撞或受到外界能量时,几何构型可能会发生变化,进而造成分子的能量或反应活性等发生变化。文中利用密度泛函理论B3LYP-D3(BJ)方法、TZP基组及高收敛标准对C5-PFK分子进行几何结构优化,然后进行不同二面角的势能扫描,获取了其中4种可能存在的构象异构体,并对它们的几何构型和能量进行了分析,为后续开展C5-PFK热稳定性、表面吸附等研究工作提供一定的理论参考。

气吹作用对CO2、CO2/C4-PFN、CO2/C5-PFK混合气体燃弧特性的影响

CO2及其混合气体在替代SF6方面已表现出较大的应用潜力,研究其燃弧特性对于新型断路器的研发具有重要意义。为此设计了模拟直动式和压气式高压负荷开关的燃弧过程的实验装置,搭建了多参量综合测量的实验平台,针对CO2及其与C4–PFN、C5–PFK混合气体在拉弧以及喷口限制吹弧条件下的燃弧特性开展了实验研究,对燃弧过程中的电弧电压、电弧电流以及电流过零附近的零区特性进行了测量,并利用Mayr电弧模型,对比了不同燃弧实验中CO2及其与C4–PFN、C5–PFK混合气体的弧后击穿特性。研究发现:气吹作用对于小电流期间电弧的能量耗散有着极强的促进作用;在拉弧实验中,CO2气体的热开断性能大约为SF6的50%,C5–PFK–CO2混合气体的热开断性能约为SF6的75%,而C4–PFN–CO2混合气体则与SF6的热开断性能相当;在吹弧实验中,CO2、C5–PFK–CO2和C4–PFN–CO2混合气体的热开断能力分别大约为SF6的45%、68%和91%。

猪背最长肌PFK-2/FBPase-2荧光定量RT-PCR方法的建立

为研究糖酵解关键酶果糖-6-磷酸-2激酶/果糖-2,6-二磷酸酯酶(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase,PFK-2/FBPase-2)基因转录水平与宰后肉品质间的关系,根据猪PFK-2/FBPase-2 mRNA序列(GenBank登录号:NM_001143721.1)设计一对特异性引物并选择β-actin作为内参基因,构建含有各自序列的重组质粒标准品,通过对反应条件的优化,建立了荧光定量实时-聚合酶链式反应技术检测猪PFK-2/FBPase-2基因转录水平的方法。结果表明,所建立的方法线性关系好,目的基因与内参基因R2均大于0.999;灵敏度高,两基因检出下限均为10拷贝/μL;特异性好,扩增产物均有特异性单一峰。同时根据标准曲线计算可知目的基因与内参基因的扩增效率分别为104.5%和104.0%,扩增效率接近一致,可对PFK-2/FBPase-2转录水平进行相对定量。本研究选取PSE肉产生程度不同的三元杂交猪、杜洛克猪和太湖猪,利用建立的方法对不同品种猪宰后45 min背最长肌中PFK-2/FBPase-2 mRNA转录水平进行测定,结果表明,太湖猪转录水平最高、杜洛克次之、三元杂交猪最低,且3个品种间有显著性差异(P<0.05)。

PFKFB3在胶质瘤组织中的表达及其对H4细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨恶性胶质瘤组织中糖酵解限速酶6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3,PFKFB3)的表达水平及PFKFB3抑制剂PFK15对胶质瘤H4细胞增殖、迁移、克隆形成和体内成瘤的影响。方法:采集2015年2月1日至2016年1月31日安康市中医医院神经外科手术切除的31例恶性脑胶质瘤及相应瘤旁组织标本,应用免疫组化技术和Western blotting检测胶质瘤和瘤旁组织中PFKFB3的表达水平。用不同浓度的(1.25、2.5、5.0μmol/L)PFK15抑制胶质瘤H4细胞的PFKFB3表达,通过MTT法、EdU细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验、克隆形成实验和裸鼠体内成瘤实验分别观察PFK15对H4细胞增殖、迁移、侵袭、克隆形成和体内成瘤的影响。结果:PFKFB3在胶质瘤组织中阳性率显著高于瘤旁组织[(80.60±8.98)%vs(41.57±10.16)%,P<0.05]。MTT和EdU实验结果显示,PFK15可明显抑制H4的增殖活性(P<0.05),且抑制作用具有浓度依赖性。PFK15处理后的H4细胞迁移、侵袭和克隆形成能力明显低于对照组(均P<0.05)。注射PFK15的裸鼠H4细胞移植瘤体积明显小于对照组裸鼠[(254.15±154.25)vs(801.52±224.25)mm3,P<0.01]。结论:PFKFB3在恶性胶质瘤组织中高表达,下调PFKB3可显著抑制胶质瘤H4细胞的恶性生物学行为和体内成瘤,PFKFB3可作为恶性胶质瘤生物治疗潜在的分子靶点。

伊犁马 PFKM 基因表达及酶活性分析

【目的】测定PFKM基因在伊犁马不同组织部位中的差异表达,为该基因在伊犁马的糖酵解过程中功能提供一定基础。【方法】以伊犁马为试验动物,分别提取心脏、肝脏、夹肌、斜方肌、背阔肌、臀中肌、半腱肌以及腹外斜肌8种组织的总RNA,以伊犁马不同组织的RNA为模板,逆转录合成cDNA,GAPDH为内参基因,运用荧光定量PCR的方法检测PFKM基因mRNA在伊犁马不同组织间的相对表达量。运用酶联免疫法(Elisa)检测伊犁马不同组织中糖酵解相关酶的含量。【结果】伊犁马PFKM基因在以上8种组织部位中都有表达,在心脏中相对表达量最高,肝脏中相对表达量最低,心脏中PFKM基因mRNA相对表达量极显著高于马匹其他部位(P<0.01)。马匹心脏组织中6-磷酸果糖激酶的活性显著高于其他部位。【结论】在糖酵解途径中,PFKM基因6-磷酸果糖激酶对心脏组织的糖酵解有重要的影响。

老年人PFK抑制试验正常值和老年人癌的早期诊断

中老年癌发生率较高,如何提高疗效,关键是早期诊断,以便在癌发生转移前实行有效的疗法。中村氏提出PFK(磷酸果糖激酶)抑制试验能发现人体内极小的癌肿,可作为癌早期诊断的过筛方法。我们对该法进行了改进,测定了73例健康老年前期和老年人血清PFK抑制率,并对52例确诊癌瘤老年前期和老年患者的血清作了相同的测定,以评价该法应用的前景。

组合称重法与分压法的C_(5)F_(10)O-PFK/Air混气制备技术研究

制备高精度的C5-PFK/Air混合气体有利于实现对C5-PFK气体-电气性能的科学论证。采用称重法与分压法实现了对不同混合比的C5-PFK/Air混合气体的制备,搭建C5-PFK/Air混气制备实验系统,建立了气相色谱-氢火焰离子化检测器(GC-FID)对制备的C5-PFK/Air混气中C5-PFK定性定量分析的仪器方法,可对实验结果进行溯源校准。研究结果表明,制备13%C5-PFK/Air混合气体的RSD为0.89%,最大示值误差为0.77%;压力为0.5 MPa时,12%~15%浓度范围内C5-PFK/Air混气中C5-PFK峰面积线性拟合系数R^(2)为0.995,一致性良好,可完全汽化;6个月的稳定性考察,气体特性值保持不变,稳定性良好。

PFK薪酬体系的优劣分析

随着知识经济的到来,PFK薪酬体系在理论和实践方面都受到了普遍的关注,本文对其进行简单的介绍,从企业和员工两方面分析了其潜在的优点和可能的缺陷,并提出自己的建议。

昆明小鼠早期胚胎PFK基因转录产物的检测

根据小鼠肝脏型 6 磷酸果糖激酶 (PFK)的cDNA序列设计合成内外 2对引物 ,以巢式RT PCR方法检测昆明小鼠早期胚胎是否转录出PFK的mRNA 结果发现 ,1 细胞至桑椹期胚胎的mRNA均能以外引物扩增产物为模板通过内引物扩增出 1条特异性目的片段 .表明昆明小鼠 1 、2 、4 、8 细胞至桑椹期胚胎的PFK以肝脏型的形式出现 ,其PFK基因已转录 ,糖酵解及三羧酸循环可能是早期胚胎葡萄糖代谢的主要方式 .

甲状腺乳头状癌组织PFKFB3表达及其意义

目的肿瘤细胞产生能力的方式是糖酵解,且糖酵解与恶性肿瘤的发生、发展及转移关系非常密切。本研究的目的是评估甲状腺中糖酵解限速酶6磷酸果糖2激酶/果糖-2,6-二磷酸酶(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3,PFKFB3)的表达水平,及其在甲状腺细胞生长、迁移、体内成瘤的影响,以期为甲状腺治疗提供新思路。方法收集2015-01-01-2016-12-31右江民族医学院附属医院病理科存档蜡块标本28例及11例癌周正常甲状腺组织标本。应用免疫组织化学技术检测甲状腺和正常甲状腺组织中PFKFB3的表达。采用PFKFB3的抑制剂PFK15抑制甲状腺细胞PFKFB3的表达,并观察PFKFB3抑制对甲状腺癌细胞生长、迁移、体内成瘤的影响。结果免疫组化结果显示,PFKFB3在甲状腺组织中表达阳性率达85.7%(24/28),明显高于正常甲状腺组织中的PFKFB3的18.2%(2/11),F=3.24,P<0.001。蛋白质印迹检测结果同样证实,甲状腺癌组织中PFKFB3蛋白表达水平明显高于正常甲状腺组织。MTT试验表明,与对照组(1.1±0.12)相比,0.25(0.82±0.08)、2.5(0.61±0.16)和5μmol/L(0.15±0.05)PFK15可明显抑制SW579细胞的增殖活性(F值分别为3.47、2.35和3.77,均P<0.05)和增殖相关分子的表达。细胞划痕实验结果显示,刮除细胞24h后,0.25、2.5和5μmol/L PFK15处理组的SW579细胞向划痕区域迁移,但其划痕区域的细胞数量分别为86±14(F=2.59,P<0.001)、57±12(F=3.52,P<0.001)和46±8(F=2.15,P<0.001),明显少于对照组的102±13。Transwell小室表明,0.25、2.5和5μmol/L PFK15处理组中,穿过基质胶的SW579细胞数量分别为71±6(F=2.35,P<0.001)、58±11(F=3.68,P<0.001)和41±7(F=2.38,P<0.001),明显少于对照组的91±8。裸鼠移植瘤实验结果显示,注射浓度为1[(661±168)mm^3,F=3.42,P<0.01]和5mg/kg[(514±147)mm^3,F=2.87,P<0.001)]组裸鼠的肿瘤体积明显小于对照组的(924±254)mm^3,且0.25、2.5和5μmol/L PFK15组肿瘤质量[(201±74)mg,F=1.27,P>0.05;(142±42)mg,F=3.56,P<0.01;(112±32)mg,F=3.57,P<0.001]明显小于对照组的(223±87)mg。裸鼠肺转移模型结果显示,0.25、2.5和5μmol/L PFK15组裸鼠肺部转移灶数目[(12±4)个,F=3.66,P<0.05;(4±3)个,F=2.86,P<0.01;(2±1.5)个,F=3.31,P<0.001]明显少于对照组的(16±5)个。结论 PFKFB3在甲状腺组织中高表达,且在甲状腺癌的增殖、迁移、侵袭和转移中起重要作用。抑制PFKFB3可作为甲状腺生物治疗的潜在分子靶点。

清燥救肺汤对荷Lewis小鼠肺癌细胞糖酵解关键限速酶HK2,PFK2,PKM2的影响

目的:观察清燥救肺汤对荷Lewis小鼠肺癌细胞糖酵解关键限速酶己糖激酶2(hexokinase 2,HK2),6-磷酸果糖激酶2(phosphofructokinase,PFK2),M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase isoform M2,PKM2)的表达及葡萄糖含量的影响。方法:雄性C57BL/6J小鼠50只,随机分为模型组,环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)组,清燥救肺汤高、中、低剂量组,每组10只。所有小鼠右腋下注射Lewis肺癌细胞建立肺癌荷瘤模型,清燥救肺汤高、中、低剂量组剂量分别为11,5.5,2.75 g·kg^-1·d^-1,造模前2周开始灌胃给药,CTX组以50 mg·kg^-1·(2 d)-1腹腔注射给药,模型组以等体积生理盐水灌胃给药,接种后继续给药2周,处死小鼠取瘤组织;氧化酶法检测葡萄糖含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测HK2 mRNA表达;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测PFK2蛋白表达;酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunesorbent assay,ELISA)检测PKM2活性。结果:与模型组比较,清燥救肺汤高、中、低剂量组肺癌细胞HK2 mRNA表达及PKM2活性显著降低,葡萄糖含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,清燥救肺汤高、中剂量组肺癌细胞PFK2蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:清燥救肺汤可有效抑制荷Lewis肺癌细胞增殖,降低肺癌细胞葡萄糖摄取速率,糖酵解关键限速酶HK2,PFK2,PKM2可能是其药效作用靶点。

Pfk基因过表达对乳酸乳球菌N8产nisin速率的影响

【目的】通过基因工程手段增加糖酵解途径中编码限速酶6-磷酸果糖激酶基因Pfk在乳酸链球菌素(nisin)产生菌Lactococcus lactis N8中的表达,增快nisin的产生,从而提高单位时间内nisin的产量,缩短发酵周期。【方法】将pfk基因及编码以c AMP为依赖的蛋白激酶催化亚基基因pka C克隆到表达质粒p MG36e上,将共表达重组质粒转入L.lactis N8中,使Pfk-pka C基因过量表达,得到重组菌株L.lactis N8-p MG36epfk-pka C,并比较该重组菌株与野生菌的生长曲线、胞内6-磷酸果糖激酶活性、发酵上清液的抑菌活性及效价,并从转录水平分析两株菌nis A及pfk-pka C的转录差异,比较野生菌与重组菌在不同葡萄糖含量下培养产nisin的变化。【结果】Pfk基因与pka C基因的过表达对重组菌的生长速度没有明显的影响,却能提高重组菌产nisin的速度,在发酵10 h时nisin的产量比野生菌提高了20%,使得发酵周期缩短近2 h。野生菌及重组菌在不同葡萄糖含量下培养发酵上清液的nisin效价没有明显的变化。【结论】糖酵解途径中6-磷酸果糖激酶基因Pfk的过表达可以加快乳酸乳球菌N8产nisin的速率,缩短发酵周期。

环保型气体在充气柜中应用分析与研究

六氟化硫(SF_(6))气体电气性能良好,但其温室效应严重,使用受到很大限制。通过试验数据对比分析了SF_(6)、N_(2)及干燥空气的理化特性、绝缘性能、分解特性、温升效果,发现干燥空气绝缘性能比N_(2)高10%,但温升效果略低于N_(2),而N_(2)温升值比SF_(6)温升值高10 K左右。并对比分析了新型环保气体C4-PFN和C5-PFK的理化特性,研究了二者及其混合气体的温升性能及分解特性,给出了各自的应用场合。指出新型环保气体绝缘性能优良,具有良好的应用前景,但存在液化温度高、成本高等问题,对于最佳混合比、气体分子间协同作用有待进一步研究。

大鼠死后肝脏磷酸果糖激酶-2含量的变化

目的分析不同死亡时间和死亡原因大鼠肝脏组织内磷酸果糖激酶-2(PFK-2)含量的变化。方法大鼠105只随机分为三组,以不同方式(失血、窒息、断颈)处死。分别于死后0、1、2、4、8、12和24h取大鼠肝脏组织,免疫组化和图像分析技术测定大鼠PFK-2变化。结果三组不同死亡原因大鼠肝脏组织内PFK-2的含量随死亡时间延长呈规律性减弱趋势。结论大鼠肝脏组织内PFK-2的变化可以反映死亡时间的变化趋势。

一种采用洁净空气绝缘和真空灭弧技术的环境友好型GIS的研究和应用

对于高压产品尤其是GIS/AIS开关,SF_6一直被作为主要的灭弧和绝缘介质广泛使用。但因为其非常高的全球变暖潜能(GWP=23 900),在过去几十年人们从没停止过对其替代气体的研究和寻找工作。近年氟化腈(如:C4-PFN即C4F7N)和氟代酮(如:C5-PFK即C5F10O)气体及其混合气体作为潜在的SF_6替代气体受到关注和初步应用;同时采用基于真空灭弧室灭弧配合洁净空气绝缘的GIS/AIS开关产品上也被开发并有了实际应用。文中简单总结了现有SF_6替代气体方案的技术现状,并重点介绍一种基于洁净空气绝缘和真空灭弧技术、不采用SF_6和任何氟类气体的GIS产品在研发过程中的一些关键技术,试验发现和最终应用情况。首先通过洁净空气在GIS中不同工况下的绝缘击穿试验和典型缺陷下的局放试验确立该新型GIS的尺寸参数标准;其次比较了GIS隔离开关和接地开关在洁净空气、C4-PFN混合气体、C5-PFK混合气体以及SF_6气体等不同工况下的小电流开合性能,并确定了洁净空气的相关开合特性和相对的优缺点;然后描述了为了满足高压断路器性能对真空灭弧室关键技术的相关改进情况;此外还从环境、安全和运维角度,对使用上述几种气体的开关进行了优劣势评估和讨论;最后结合该类新型开关设备的现场运行经验,认为基于洁净空气绝缘和真空灭弧技术的环境友好型GIS是理想的SF_6 GIS的替代产品。

PLANTSCAPE系统在长庆银川配气站的应用

银川配气站是长庆油田公司采气一厂下属配气站之一,地处宁夏银川市长庆石油基地,肩负着向近10家天然气用户供气的任务,供气量也逐年增大,旧的生产模式(如双波纹管流量计量)已不能满足生产的需求。所以我们引进了HONEYWELL公司的PLANTSCAPE工业控制系统,该系统达到国际先进水平,在国内属于领先地位。伴随着气田的大规模开发,外供气量的逐年增加,此系统必将发挥更大的作用,对长庆气田的可持续发展具有十分重要的意义。