端粒蛋白TRF1与肌动蛋白结合蛋白PFN2相互作用的鉴定

目的:鉴定端粒蛋白TRF1和肌动蛋白结合蛋白PFN2是否存在相互作用,并且两者的相互作用是否与端粒在细胞核周的锚定有关。方法:将TRF1构建到myc标签载体,PFN2构建到GST标签载体,采用GST-pull down技术,验证两者是否存在相互作用;同时将TRF1构建到EGFP标签的绿色荧光载体,PFN2构建到RED标签的红色荧光载体,两者共转入细胞,利用荧光显微镜观察两者在细胞中的共定位情况。结果:GST-pull down证明TRF1与PFN2存在直接相互作用,两者在细胞中可以共定位。结论:TRF1与PFN2存在相互作用,且这种相互作用发生在细胞核周。

PFN2在胃癌组织中高表达并促进胃癌细胞的增殖和迁移

目的研究PFN2作为胃癌新的预后评价指标及作为胃癌治疗全新靶点的潜力。方法组织层面上,应用免疫组织化学检测100例胃癌组织及其癌旁组织中PFN2蛋白表达水平;根据PFN2表达量,将研究对象分为癌组织中PNF2高表达组(46例)、低表达(48例)组,以及癌旁组织中PFN2高表达组(26例)、低表达(49例)组;采用χ^(2)检验、Spearman相关性以及Kaplan-Meier生存分析法,分析PFN2蛋白表达水平与患者的临床参数之间关系;细胞功能上,敲低MKN-45细胞中PFN2,将其分为controlsiRNA组与PFN2-siRNA组;过表达MKN-45细胞中PFN2,将其分为control-vector组与PFN2-vector组,选取Transwell实验、CCK-8实验检测PFN2对胃癌MKN-45细胞增殖及迁移影响。结果在胃癌组织中PFN2蛋白表达高于癌旁组织(P<0.01);PFN2蛋白的表达水平和胃癌病人的M分期显著正相关(P<0.05);在胃癌组织中,PFN2表达和VEGFR表达呈正相关关系(P<0.01);PFN2蛋白高表达的胃癌患者预后更差(P<0.01),并且是胃癌预后的独立预测因子(P<0.05);MKN-45细胞中高表达PFN2组较低表达组增殖、迁移能力更强(P<0.001)。结论PFN2蛋白在胃癌组织中高表达,并促进人胃癌MKN-45细胞的增殖、迁移。

PFN2对食管癌细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨PFN2在诱导食管癌Eca109细胞侵袭和迁移中的作用及机制。方法:化学合成靶向PFN2的si RNA,脂质体法转染Eca109细胞,采用Western blot检测细胞内PFN2、E-cadherin及Vimentin的表达,采用Transwell实验检测食管癌细胞迁移及侵袭能力的改变。结果:与对照组相比,siRNA下调PFN2表达后,食管癌Eca109细胞中PFN2蛋白水平显著下调,Vimentin表达明显下调,E-cadherin表达明显上调(<0.05),Eca109细胞迁移及侵袭能力均显著降低(<0.05)。结论:PFN2通过诱导食管癌Eca-109细胞发生上皮间叶转化,进而提高其侵袭和迁移能力。

Circ_0072088通过靶向miR-223-3p/PFN2轴促进乳腺癌细胞的生长

目的探究环状RNA(circular RNA,circRNA)0072088在乳腺癌(breast cancer,BC)细胞中的生物学功能及其作用机制。方法在公共基因芯片数据库Gene Expression Omnibus(GEO)中下载GSE101123数据集,通过GEO2R分析得到差异基因。通过实时定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测BC细胞中circ_0072088的表达水平。采用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测circ_0072088对BC细胞增殖、迁移和侵袭的作用。通过CircInteractome和TargetScan数据库预测circ_0072088与微小RNA223-3p(micro RNA-223-3p,miR-223-3p)、miR-223-3p与肌动蛋白结合蛋白profilin 2(PFN2)之间的靶向关系,并通过双荧光素酶报告基因实验和RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)实验验证circ_0072088、miR-223-3p与PFN2之间的靶向关系。结果circ_0072088在BC细胞系中的表达均显著上调。过表达circ_0072088促进BC细胞的增殖、侵袭和迁移,而上调miR-223-3p可削弱此作用。miR-223-3p是circ_0072088的下游靶点,可以被circ_0072088吸附;PFN2是miR-223-3p的靶基因,可以被circ_0072088间接正向调控。结论circ_0072088通过调节miR-223-3p/PFN2轴促进BC细胞的增殖和转移。

miR-183-5p对大肠癌细胞增殖、迁移能力的影响及机制

目的探讨miR-183-5p对大肠癌(CRC)细胞增殖、迁移能力的影响及机制。方法应用miRDB数据库,根据重组人抑制蛋白-2(PFN2)基因序列预测筛选的miR-183-5p;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测CRC组织及细胞系中miR-183-5p和PFN2 mRNA表达并分析其相关性;荧光素酶报告基因技术检测miR-183-5p与PFN23′非翻译区(3′UTR)特异性结合情况;应用qRT-PCR及Western blotting法检测转染miR-183-5p模拟物(mimics)后CRC细胞株PFN2表达情况;应用CCK8法及划痕实验检测转染miR-183-5p mimics后CRC细胞系的增殖、迁移能力。结果与正常大肠上皮细胞系及癌旁组织相比,PFN2在CRC细胞系及癌组织中的表达均下调(P均<0.05),miR-183-5p在CRC细胞系及癌组织中的表达均上调(P均<0.05),且二者表达呈负相关(r=-0.398,P=0.042);miR-183-5p可与PFN23′UTR特异性结合;转染miR-183-5p mimics后,CRC细胞系PFN2 mRNA及蛋白的表达受到抑制,CRC细胞增殖、迁移能力增强(P<0.05)。结论miR-183-5p可促进CRC细胞的增殖、迁移,其机制可能通过靶向下调PFN2表达实现。