耐力训练与p53抑制剂PFT-α对小鼠骨骼肌线粒体自噬相关基因表达的影响

目的:通过6周跑台耐力训练及PFT-α皮下给药干预,探讨耐力训练与PFT-α对小鼠骨骼肌线粒体自噬相关基因表达的影响。方法:8周龄ICR雄性小鼠24只,随机分为对照组C、PFT-α给药组P、耐力训练组E、耐力训练联合PFT-α给药组EP,每组6只;运动组E、EP进行6周跑台训练,P组、EP组皮下注射PFT-α溶液(0.83mg/mLPFT-α,10%DMSO),0.2mL/只/次,C组、E组注射同体积溶剂(10%DMSO)。结果:与C组相比,E组p53、ULK1、BECN1、p62、PINK1、PARK2mRNA表达增加有统计学意义(P<0.05),P组LC3、p62、NIX、BNIP3、PINK1、PARK2、PARLmRNA表达上调有统计学意义(P<0.05),其中,PINK1mRNA的相对含量为C组的12倍;与P组相比,EP组p53、LC3、NIX、BNIP3、PINK1、PARK2mRNA表达下降有统计学意义(P<0.01)。结论:耐力训练可促进PINK1/PARKIN依赖的线粒体自噬相关基因的表达,提示运动对线粒体的质量控制不仅与线粒体生物发生、线粒体动态变化有关,还可能与线粒体自噬有关;PFT-α可促进参与线粒体自噬的NIX/BNIP3信号通路相关基因的表达,提示p53的转录活性与参与线粒体质量控制的NIX/BNIP3信号通路密切相关;PFT-α使PINK1mRNA异常高表达可能导致线粒体功能紊乱,耐力训练可改善这一现象。

PFT-α与BMP-2联合诱导大鼠BMMSCs分化为心肌样细胞

目的探讨p53抑制剂(PFT-α)与骨形态发生蛋白2(BMP-2)联合诱导对骨髓间充质干细胞(BMMSCs)向心肌样细胞分化的影响。方法分离大鼠BMMSCs进行培养、传代及纯化,分别应用PFT-α、BMP-2及两者联合对第2代BMMSCs定向诱导,不加诱导剂为对照组。倒置显微镜下观察并记录对数增殖期细胞的形态变化;流式细胞计数法鉴定BMMSCs表面联合标记物;免疫组化法检测c Tn I、Cx43及TPM的表达;免疫荧光检测技术对c Tn I和Cx43进行荧光标记;透射电镜观察分化细胞的超微结构变化。结果经诱导后的BMMSCs以梭形为主,细胞体积变大。CD45、CD29和CD90的阳性率分别为0.3%、86.5%和84.7%。诱导组细胞的c Tn I、Cx43及TPM均呈阳性表达,对照组为阴性。诱导组细胞胞质内Cx43免疫荧光染色表达呈红色,c Tn I则呈绿色,胞核椭圆位于细胞中央,胞质内可见平行排列的肌丝、线粒体和糖原等。结论 PFT-α和BMP-2均可单独诱导BMMSCs分化为心肌样细胞,两者联合应用更加高效、安全。

p53抑制剂PFT-α对阿霉素诱导的人皮肤角质形成细胞凋亡的影响

目的探讨p53抑制剂PFT-α对阿霉素诱导的人皮肤角质形成细胞凋亡的影响。方法用MTT法通过比色分析测定吸光度(OD)值,检测0,4,8,12mg/LPFT-α和阿霉素给药对角质形成细胞增殖的影响,用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果阿霉素抑制体外培养的人皮肤角质形成细胞增殖,先给予8,12mg/LPFT-α处理细胞,然后给予阿霉素,与对照组比较,PFT-α升高OD值(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05)。结论先行给予适当剂量PFT-α处理人皮肤角质形成细胞,能一定程度减轻阿霉素对人皮肤角质形成细胞的损伤,表现出对阿霉素致凋亡的保护作用。

p53抑制剂PFT-α对热化疗诱导肠上皮细胞凋亡的保护作用

目的:探讨PFT-α(p-fiftythreeinhibitor,PFT-α)对热化疗诱导原代培养肠上皮细胞(intestinalepithelialcells,IECs)凋亡及其凋亡相关基因表达的影响.方法:原代培养IECs分为正常对照组、热化疗组和PFT-α+热化疗组,运用顺铂联合温热(43℃)处理IEEs30min,对比加入不同浓度的PFT-α后,AnnexinV-FITC/PI染色,流式细胞仪检测细胞凋亡.Westernblot检测IECs的p53和Bax蛋白表达,RT-PCR检测BaxmRNA的表达.结果:热化疗导致IECs发生凋亡,Bax蛋白表达明显高于对照组.10,20,30,40μmol/LPFT-α作用于顺铂联合温热处理的IECs后,细胞凋亡率下降且呈剂量依赖陛,p53在IECs胞核/胞质表达比例下降,Bax蛋白和mRNA的表达随PFT-α的剂量升高而逐渐下降.结论:PFT-α热化疗诱导肠上皮细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与改变p53核转位和抑制促凋亡基因Bax的表达相关.

p53抑制剂PFT-α对热化疗所致肠上皮细胞损伤的保护效应

目的 探讨p5 3抑制剂PFT α(p fiftythreeinhibitor ,PFT α)对热化疗诱导原代培养肠上皮细胞 (intestinalepithe lialcells ,IECs)凋亡及p5 3靶基因Bax和MDM2表达的影响。方法 原代培养IECs分为正常对照组、热化疗组和PFT α加热化疗组 ,运用顺铂联合温热 ( 4 3℃ )处理IECs 3 0min ,对比加入不同浓度的PFT α后 ,AnnexinV FITC /PI染色 ,流式细胞仪检测细胞凋亡。MTT法分析PFT α对热化疗杀伤DLD1的影响。Westernblot检测IECs的p5 3、Bax和MDM2蛋白表达。结果 热化疗导致IECs发生凋亡 ,Bax和MDM2蛋白表达明显高于对照组。 10、2 0、3 0、40 μmol/LPFT α作用于顺铂联合温热处理IECs后 ,细胞凋亡率下降且呈剂量依赖性 ,p5 3在IECs胞核 /胞浆表达比例下降 ,Bax和MDM2的表达随PFT α的剂量升高而逐渐下降。热化疗杀伤肿瘤细胞的效应并未受到低剂量PFT α影响。结论 PFT α对热化疗损伤肠上皮细胞具有保护作用 ,其机制可能与改变p5 3核转位和抑制促凋亡基因Bax和MDM2的表达相关 ,抑制p5 3可作为克服热化疗抗肿瘤治疗副效应的新策略。

PFT-α对结肠上皮细胞凋亡和周期的影响及机制探讨

目的探讨p53抑制剂(p-fiftythreeinhibitor-alpha,PFT-α)对结肠上皮细胞凋亡、周期的影响及机制。研究PFT-α对热化疗损伤结肠上皮细胞的影响。方法顺铂联合温热处理原代培养结肠上皮细胞30min,对比加入不同浓度PFT-α后,AnnexinV-FITC/PI染色,流式细胞仪检测细胞凋亡。PI染色检测细胞周期。Westernblot检测结肠上皮细胞CyclinB1和Cdc2(Tyr15)表达。结果不同浓度PFT-α作用于热化疗处理的结肠上皮细胞后,细胞凋亡率下降且呈剂量依赖性。流式细胞仪细胞周期分析显示在运用PFT-α后,结肠上皮细胞的G2/M延长,CyclinB1和Cdc2(Tyr15)蛋白表达随PFT-α的剂量升高而逐渐增强。结论PFT-α可能通过促进CyclinB1蛋白表达,Cdc2(Tyr15)磷酸化水平升高,降低CyclinB1/Cdc2活性,细胞停滞于G2/M期,减轻热化疗对结肠上皮细胞的损伤。

PFT-α对热化疗损伤结肠上皮细胞P53蛋白表达及亚细胞定位的影响

目的探讨p53特异性抑制剂PFT-α(p-fifty three inhibitor-alpha,PFT-α)对热化疗损伤结肠上皮细胞P53蛋白表达、亚细胞定位的影响,及其在保护结肠上皮细胞中的作用。方法顺铂联合温热处理原代培养结肠上皮细胞30min,对比加入不同浓度PFT-α后,分别运用免疫细胞化学和Western blot观察在不同处理条件下结肠上皮细胞p53亚细胞结构定位和蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果PFT-α抑制热化疗诱导的结肠上皮细胞p53核转位,降低热化疗诱导的p53在细胞核中的蛋白表达水平。随PFT-α浓度增大,结肠上皮细胞的凋亡率逐渐降低。结论PFT-α通过抑制p53的核转位,使p53主要位于细胞质中,从而降低热化疗导致的结肠上皮细胞凋亡,发挥保护结肠上皮细胞的作用。

PFT-α在调控热化疗损伤结肠上皮细胞增殖和周期中的作用

目的：探讨p53抑制剂PFT-α（p-fifty three inhibitor-alpha，PFT-α）对热化疗损伤肠上皮细胞增殖、周期的影响，及对热化疗损伤肠上皮细胞的保护作用。方法：MTT法分析PFT-α对结肠上皮细胞增殖及其对热化疗杀伤DLD1细胞的影响。顺铂联合温热处理结肠上皮细胞，对比加入不同浓度的PFT-α，Annexin V-FITC／PI和PI染色后流式细胞仪检测细胞凋亡和周期。结果：PFT-α在低于50μmol／L时，对于结肠上皮细胞增殖无影响，高于60μmol／L则抑制细胞增殖（P＜0．01）。PFT-α在5～40μmol／L之间。PFT-α不影响DLD1细胞生长，达50μmol／L时，则对肿瘤细胞的生长有一定的抑制效应（P〈0．05）。达60μmol／L，这种抑制效应更明显（P〈0．01）。PFT-α呈浓度依赖性降低热化疗诱导的结肠上皮细胞凋亡率，使细胞G2／M延长。结论：PFT-α可使细胞G2／M期延长而保护结肠上皮细胞。

PFT-α对脑缺血后神经干细胞移植中PUMA的调控研究

目的探索p53抑制剂(PET-α)对脑缺血后神经干细胞(NSCs)中p53下游促凋亡基因(PuMA)的表达影响。方法利用SD仔鼠分离NSCs,原代及传代培养,经氧糖剥夺(OGD)处理6 h后分为OGD+二甲基亚砜(DMSO)组和OGD+PFT-α组,采用免疫印迹技术比较2组p53蛋白及PUMA的表达变化。体内实验中采用Longa法建立经CT证实的大脑中动脉栓塞模型大鼠48只,随机分为PFT-α+NSCs移植组(n=24)和DMSO+NSCs移植组(n=24);采用免疫荧光技术检测不同移植组中PUMA的表达。结果 (1)体外实验中氧糖剥夺6 h后OGD+PFT-α组中p53蛋白入核水平下调,胞浆内表达上调,而OGD+DMSO组主要表达位于胞核;PUMA的表达水平明显低于OGD+DMSO组(P<0.05);(2)体内实验中,与DMSO+NSCs组相比,PIT-α+NSCs移植组中PUMA表达阳性的细胞明显减少[(38.9±4.3)%vs.(29.4±5.6)%,P<0.01]。结论 PFT-α与神经干细胞联合应用后,可明显抑制PUMA的表达,这可能是PFT-α促进移植后神经干细胞在脑缺血区存活的重要机制。

p53抑制剂PFT-α研究进展

p53是最重要的肿瘤抑制基因之一,各种应激反应损伤后p53短期内即可在细胞内累积,并作为转录因子调节许多下游的凋亡相关基因表达,诱导凋亡的发生.研究表明在抗肿瘤治疗过程中,放化疗在杀伤肿瘤细胞的同时损伤增生活跃的淋巴、造血及肠上皮细胞,产生抗肿瘤的副效应,而p53介导的凋亡是产生这种副效应的关键因素.一种新的p53特异性抑制剂PFT-α(p-fiftythreeinhibitor,PFT-α),可以暂时的可逆性抑制p53介导的凋亡发生,因此成为克服抗肿瘤治疗副效应和研究p53功能的有效工具.

PFT-α对隐睾所致生精细胞凋亡的影响

目的:通过研究PFT-α对隐睾生精细胞中p53和bcl-2/bax表达的影响,探讨生精细胞凋亡的分子机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组、隐睾组、隐睾+p53抑制剂(p-i t y three inhibitor-alpha,PFT-α)组、隐睾+PFT-α溶媒(DMSO)组。后三组建立单侧隐睾模型,后两组分别于大鼠腹腔内注射PFT-α和PFT-α溶媒,每天1次,定时定量。7 d后处死所有大鼠,取双侧睾丸称湿重。观察手术侧睾丸生精细胞组织形态,采用TUNEL法结合流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测生精细胞凋亡程度,免疫组织化学和Western印迹分别检测p53和bcl-2/bax的表达。结果:隐睾+PFT-α组与隐睾组和隐睾+PFT-α溶媒组比较,生精上皮排列有序,细胞层数厚,凋亡指数较低,p53和bax表达弱,bcl-2表达强。结论:PFT-α可能通过上调bcl-2,下调p53和bax的表达,抑制隐睾生精细胞的过度凋亡。

P53特异性抑制剂PFT-α诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化

背景:最新研究表明,P53可通过阻断P53-P21蛋白通路,显著提高干细胞分化率。而5-氮杂胞苷主要通过激活P53-P21蛋白通路,抑制细胞增殖,导致细胞凋亡。目的:观察P53特异性抑制剂PFT-α对大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的影响。方法:分离SD大鼠骨髓间充质干细胞进行培养、传代,取第4代细胞分为4组,正常对照组、PFT-α组、5-氮杂胞苷组及PFT-α+5-氮杂胞苷组。结果与结论:原代培养的骨髓间充质干细胞传代诱导后细胞体积变大,呈长梭形,排列趋一致。当PFT-α浓度≤20μmol/L时,能减少骨髓间充质干细胞凋亡。心肌样细胞鉴定结果显示,诱导后4周时,可见正常对照组少量表达肌钙蛋白Ⅰ和CX-43,其余3组均强表达。心肌细胞分化率结果显示,诱导4周时,PFT-α组和5-氮杂胞苷+PFT-α组显著高于5-氮杂胞苷组。Western Blotting检测结果示,诱导1周时,5-氮杂胞苷组P53、P21表达最强,PFT-α组几乎不表达;诱导4周时,5-氮杂胞苷组、PFT-α组、PFT-α+5-氮杂胞苷组P53、P21表达明显高于正常对照组。PFT-α组、PFT-α+5-氮杂胞苷组内诱导4周时P53、P21表达量均高于1周时表达。提示通过P53抑制剂PFT-α阻断P53-P21蛋白通路,能显著减少骨髓间充质干细胞凋亡,促进其增殖,且能诱导其向心肌样细胞分化。

p53抑制剂PFT-α对热化疗损伤结肠上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨p53抑制剂PFT-α(PFT-α)对结肠上皮细胞增殖、周期的影响及周期调控机制。观察PFT-α对热化疗损伤结肠上皮细胞的影响。方法运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察不同浓度PFT-α对结肠上皮细胞增殖的影响。顺铂联合温热处理原代培养结肠上皮细胞30min,对比加入不同浓度PFT-α后,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)染色,流式细胞仪检测细胞凋亡,PI染色检测细胞周期。Western印迹检测结肠上皮细胞细胞周期蛋白(cyclin)B1和Cdc2(Tyr15)表达。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测结肠上皮细胞cyclinB1mRNA的表达变化。结果PFT-α在低于50μmol/L时对结肠上皮细胞增殖无任何影响,高于60μmol/L则对该细胞的增殖产生抑制效应(10、20、30、40μmol/L的PFT-α,对细结肠上皮细胞的凋亡率分别为14.8%±1.5%、9.7%±1.2%、6.1%±1.3%、3.8%±0.3%)。不同浓度PFT-α作用于热化疗处理的结肠上皮细胞后,细胞凋亡率下降且呈剂量依赖性。流式细胞仪细胞周期分析显示在运用PFT-α后,结肠上皮细胞的G2/M延长,cyclinB1和Cdc2(Tyr15)蛋白表达随PFT-α的剂量升高而逐渐增强。结论PFT-α可能通过促进cyclinB1蛋白和mRNA表达,Cdc2(Tyr15)磷酸化水平升高,降低cyclinB1/Cdc2活性,细胞停滞于G2/M期,减轻热化疗对结肠上皮细胞的损伤而发挥保护效应。

新型PFT-1高强度耐热合金钢的应用

ＰＦＴ－１钢是在ＨＫ４Ｄ钢的基础上加入少量Ｎｂ，Ｔｉ等元素，以改善碳化物强化相的种类、形态和分布的一种新型高强度耐热合金钢。为考察该钢种的长期使用性能，并为设计使用提供稳定可靠的高温强度数据，对该合金钢进行了在９５０°Ｃ下时间长达３０ ０００ ｈ的持久强度试验。考察表明，ＰＦＴ－１钢持久强度分别是 ＨＫ４０钢和ＨＰ＋Ｎｂ钢的１５和１．２倍左右。特别是已在大庆石油化工总厂服役３５ ０００ ｈ的ＰＦＴ－１钢转化炉管，其解剖性能仍然比未服役的ＨＫ４０钢和ＨＰ＋Ｎｂ钢的持久强度高．这充分证明新钢种的组织和性能具有长期稳定的特点。此外，ＰＦＴ－１钢的热疲劳性能优于ＨＫ４０钢，抗氧化性能则与ＨＫ４Ｄ钢及ＨＰ＋Ｎｂ钢相当，其焊接性能良好。用以代替ＨＫ４０钢和ＨＰ＋Ｎｂ钢生产大直径转化炉管，可以强化石油化工流程的工艺参数，从而取得十分明显的经济效益。

P53-P21蛋白通路对5-氮杂胞苷诱导的大鼠骨髓间充质干细胞 增殖和凋亡的影响

背景:5-氮杂胞苷是诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的有效化学试剂。目的:观察 P53 特异性抑制剂 PFT-α阻断 P53-P21 蛋白通路对 5-氮杂胞苷诱导的大鼠骨髓间充质干细胞增殖和凋亡的影响。方法:分离 SD 大鼠骨髓间充质干细胞,取第 3 代细胞分为 4 组,即正常对照组、5-氮杂胞苷组、PFT-α组、PFT-α+5-氮杂胞苷组。观察骨髓间充质干细胞培养传代过程中细胞形态变化,应用流式细胞仪鉴定骨髓间充质干细胞表面抗原,MTT 法测定诱导后各组骨髓间充质干细胞增殖能力,以流式细胞仪检测诱导后各组细胞凋亡率,采用 Western blot 法测定诱导后P53、P21 蛋白表达情况。结果与结论:原代培养的骨髓间充质干细胞 2 周形成集落,传代细胞体积变大,呈长梭形,排列趋一致。骨髓间充质干细胞表面抗原 CD44,CD45 阳性表达率分别为(89.98±1.29)%,(2.14±0.22)%。MTT 结果显示,当 PFT-α浓度≤20 μmol/L 时,对骨髓间充质干细胞的增殖有一定促进作用;而当其浓度达到 40 μmol/L 时,PFT-α则可明显抑制骨髓间充质干细胞的增殖。培养第 5,7 天时,与其他 3 组比较,5-氮杂胞苷组对骨髓间充质干细胞增殖表现出明显抑制(P<0.01)。流式细胞仪结果显示,5-氮杂胞苷组骨髓间充质干细胞凋亡率显著高于其他 3 组(P<0.01)。Western blot 结果显示,各组均有 P53、P21 蛋白的表达,以 5-氮杂胞苷组表达量明显增多。提示通过 P53 特异性抑制剂 PFT-α阻断 P53-P21 蛋白通路,能显著减少 5-氮杂胞苷诱导的骨髓间充质干细胞的凋亡,促进 5-氮杂胞苷诱导的骨髓间充质干细胞增殖。

皮斐松-α衍生物的合成及表征

以皮斐松-α(PFT-α)为先导化合物,对其结构进行分析、修饰,保留了PFT-α结构中的2-氨基噻唑基本结构母环,设计合成了5种新型PFT-α衍生物Ⅲa~Ⅲe。以无水乙醇为溶剂,在哌啶-冰醋酸存在条件下与不同的醛进行反应,得到目标化合物Ⅲa~Ⅲe,通过IR,^(1)H NMR等对产物、中间体结构进行了表征。

p53抑制剂对扩增晚期人骨髓间充质干细胞活力的影响

背景:p53抑制剂能否直接干预骨髓间充质干细胞活力及其可能的机制尚不完全清楚。目的:探讨p53抑制剂PFT-α对体外扩增培养晚期骨髓间充质干细胞衰老进程的影响,寻找延缓人骨髓间充质干细胞复制性衰老的关键靶点。方法:qP CR检测扩增早、晚期人骨髓间充质干细胞p53、p21和p15 mR NA的表达。20μmol/L p53抑制剂PFT-α或等量二甲基亚砜分别作用晚期人骨髓间充质干细胞2周,β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察衰老细胞阳性率,TUNEL染色法检测细胞凋亡情况。300μmol/L H2O2作用于人骨髓间充质干细胞30 min,CCK-8法检测细胞抗氧化应激能力。结果与结论:qP CR显示晚期人骨髓间充质干细胞p15,p21,p53 mR NA表达水平分别较早期人骨髓间充质干细胞增高(1.45±0.23)倍,(1.51±0.14)倍,(1.78±0.14)倍(P<0.05)。PFT-α组衰老细胞阳性率(41±5)%低于二甲基亚砜组(63±7)%(P<0.05),但PFT-α组与二甲基亚砜组细胞凋亡率差异无显著性意义(P>0.05)。经H2O2处理后,CCK-8结果显示PFT-α组吸光度值为二甲基亚砜组(1.27±0.13)倍(P<0.001),以上结果表明p53信号通路激活可能是导致人骨髓间充质干细胞衰老的重要因素,应用p53抑制剂PFT-α能够增强晚期人骨髓间充质干细胞抗氧化应激损伤能力。

P53结合位点在NOD8启动子基因克隆调节及其对NOD8基因中的作用

为探讨P53结合位点在NOD8基因调控中的作用,采用PCR技术从人基因组DNA中扩增含有P53结合位点人NOD8基因启动子序列,并定向克隆入已切除启动子的表达载体pEGFP-C2中,构建含有人P53结合位点的人NOD8基因启动子驱动的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2-NOD8;并构建P53结合位点缺失突变载体pEGFP-C2-NOD8,将构建的质粒经阳离子聚合物JetPeiTM介导瞬时转染HEK293细胞,在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。用不同浓度的p53抑制剂PFT-α(pifithrinalpha,PFT-α)预处理HEK293细胞24 h后,将重组质粒pEGFP-C2-NOD8wt瞬时转染HEK293细胞,观察绿色荧光蛋白的表达。结果表明pEGFP-C2-NOD8wt和mpEGFP-C2-NOD8经酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功。细胞转染后,缺失P53结合位点的NOD8启动子驱动的绿色荧光蛋白荧光强度明显低于含P53结合位点的重组质粒;且不同浓度PFT-α预处理HEK293细胞后重组质粒绿色荧光蛋白表达下降呈剂量依赖性。结论是P53结合位点突变重组质粒在HEK293细胞中其绿色荧光表达明显减弱;PFT-α可以通过抑制P53表达使重组质粒pEGFP-C2-NOD8wt在细胞中绿色荧光表达呈剂量依赖性减弱。说明P53结合位点在NOD8基因调控中发挥了正调节作用。

p53在黑素细胞对抗紫外线或H2O2诱导的氧化应激中的作用

目的通过紫外线照射（UVR）或过氧化氧（H2O2）对人黑素细胞p53的表达影响，并使川p53激活剂顺式咪唑啉衍生物-3（nutlin3）和p53抑制剂（PFT-α）对人黑素细胞UVR或H2O2的氧化应激脱氧核糖核酸（DNA）损伤的影响，探讨p53在人黑素细胞对抗氧化应激中的作用。方法Western印迹法测定UVR、不同浓度H2O2、nutlin3和PFT-α处理后的人黑素细胞p53表达；单细胞电泳实验（彗星分析）测定nutlin-3或PFT-α对人黑素细胞UVR或H2O3氧化成激DNA损伤的影响；7-H2AX免疫荧光实验测定nutlin-3对人黑素细胞UVR氧化应激DNA损伤的影响。结果Western印迹结果屁示UVR、H2O2可以增加人黑素细胞总p53的表达，并且足伴随着15丝氨酸磷酸化t）53的增高而增高，nutlin-3和PFT—α分别增加和减少人黑索细胞内p53表达；墙壁分析显示．预先使用nutlin-3可以明显减少UVR或H2O2造成的DNA损伤的尾素，PFT—α明娃增加UVR或H2O3造成的DNA损伤的尾素，差异具有统计学意义（P〈0．05）；流式细胞仪分析最示预先使用nutlin-3可以减少UVR造成的7H2AX表达。结论p53在人黑素细胞对抗UV或H2O2诱导的氧化应激中起着重要的作用。