亚抑菌浓度头孢他啶对大肠埃希菌胞外多糖和pga基因的影响

目的明确亚抑菌浓度头孢他啶在大肠埃希菌生物膜抑制过程中对胞外多糖和pga基因的影响。方法采用标准琼脂平板倍比稀释法检测细菌最低抑菌浓度,采用96孔板结晶紫染色法检测生物膜形成能力,采用苯酚-硫酸法测定胞外多糖含量,pgaABCD基因表达采用RT-PCR扩增。结果大肠埃希菌对氨苄西林和氟喹诺酮类耐药率较高,而对阿米卡星和碳青霉烯类全部敏感。亚抑菌浓度头孢他啶对大肠埃希菌生物膜形成、胞外多糖产生能力和pgaABCD基因表达均有显著抑制作用,但其降低程度不完全一致。结论亚抑菌浓度头孢他啶在抑制生物膜形成过程中能降低大肠埃希菌胞外多糖产生和pga基因表达,但其与生物膜降低程度存在差异性。

马铃薯PGA1基因的克隆及序列分析

糖苷生物碱是马铃薯块茎中普遍存在的一种有苦味的毒性甾类生物碱,其毒性可使人、动物变畸形或死亡,PGA1基因是催化糖苷生物碱合成的关键酶基因。通过同源克隆的方法,采用RT-PCR技术对马铃薯大西洋品种的PGA1基因进行克隆,获得了PGA1基因的cDNA序列;并对马铃薯PGA1基因进行生物信息学分析。结果表明,PGA1基因的CDS全长为1497 bp,编码498个氨基酸,所编码蛋白的分子质量为57.087 ku,理论等电点为9.29,为不稳定蛋白;该蛋白的二级结构包括α螺旋(52.41%)、β转角(6.02%)、延伸链(12.85%)和无规则卷曲(28.71%),其中,α螺旋和无规则卷曲为主要元件,与预测的蛋白质三级结构一致。研究结果可为进一步深入了解PGA1基因的功能和调控机制,利用基因工程技术调控马铃薯中糖苷生物碱含量提供理论依据。

青霉素G酰化酶通用表达载体的构建方法初探

结合信号肽预测软件 (SignalP)对现有的青霉素G酰化酶 (PGA)的大肠杆菌 枯草杆菌穿梭表达质粒pZ0 1进行信号肽的合理设计 ,在其C 端置换 2个氨基酸 ,即引入NotI酶切位点序列 ,从而构建成PGA的通用表达载体。将粪产碱杆菌 (Alcaligenesfaecalis)的PGA基因导入其中 ,构建成表达质粒pzfpganoti.,转入枯草杆菌进行表达 ,测活结果显示 ,表达产物具有生物活性 (酶的平均活力为 0 .18U ml发酵液 )。为进一步应用信号肽预测软件进行表达系统的研究、设计打下了基础。