磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)在乳腺癌及癌旁正常组织中的表达及意义

目的:探讨磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)在乳腺癌及癌旁正常组织中的表达及意义。方法:应用real time PCR,免疫组化法分别检测32例乳腺癌及癌旁正常组织中PGAM1在mRNA及蛋白水平的表达。结果:在收集的32例乳腺癌中PGAM1的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。结论:PGAM1在乳腺癌组织中有高表达,为乳腺癌的诊断及治疗提供了新的思路。

PGAM1在涎腺腺样囊性癌中的表达及其临床和生物学意义

目的:研究磷酸甘油酸变位酶1(phosphoglycerate mutase1,PGAM1)在人涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic car-cinoma,SACC)的表达及其临床和生物学意义。方法:收集31例SACC和25例正常腺体组织病理切片,免疫组化法检测两者中PGAM1蛋白的表达水平,分析其表达与临床病理之间的相关性。以人SACC高转移潜能细胞系(SACC-LM)为研究对象,构建PGAM1-siRNA干扰片段,检测分析PGAM1干扰前后细胞周期、增殖能力、迁移能力和侵袭能力变化;蛋白质免疫印迹法(West-ern blot)检测干扰前后基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达的变化。结果:PGAM1在31例SACC中20例(64.5%)为高表达,11例(35.5%)为低表达;在25例正常腺体中均为低表达。PGAM1在实体型SACC的表达明显高于筛孔型和腺管型SACC(P<0.05),PGAM1的表达与性别、年龄和发生部位等无关(P>0.05)。PGAM1基因表达下调后细胞的迁移和侵袭能力明显减弱(P<0.05),MMP-2、MMP-9的表达也明显下调(P<0.05),但细胞增殖和细胞周期比例没有变化(P>0.05)。结论:PGAM1在SACC中的表达与其病理分型有关。PGAM1的表达下调可以显著抑制SACC的迁移和侵袭能力。

沉默PGAM1基因对食管癌细胞生物学功能的影响

目的探讨沉默磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)基因对食管癌细胞生物学功能的影响及可能机制。方法收集2016年7月至2017年6月间在我院行手术切除的67例食管癌及对应癌旁正常组织,采用免疫组化SP法检测PGAM1表达并分析其表达与临床病理特征的关系。PGAM1 sh RNA(sh PGAM1组)或sh RNA-NC(NC组)转染至食管癌Eca-109细胞,分析PGAM1基因沉默对Eca-109细胞凋亡和增殖的影响。采用实时荧光定量PCR(QPCR)和Western blotting法检测PGAM1对Akt/m TOR信号通路关键分子的影响。结果食管癌组织中PGAM1高表达率为58. 2%(39/67),高于癌旁组织的31. 3%(21/67),差异有统计学意义(P<0. 05)。PGAM1表达与临床分期、分化程度、浸润深度有关(P<0. 05),而与年龄、性别、淋巴结转移等无关(P>0. 05)。sh PGAM1组和NC组中PGAM1 m RNA表达量分别为0. 48±0. 10和1. 01±0. 14,差异有统计学意义(P<0. 05)。MTT法检测结果显示,培养24、48、72、96 h后,sh PGAM1组Eca-109细胞增殖率分别为(87. 65±7. 42)%、(79. 34±9. 11)%、(70. 17±6. 84)%、(60. 36±7. 95)%,明显低于NC组,差异有统计学意义(P<0. 05)。48 h后sh PGAM1组和NC组的Eca-109细胞凋亡率分别为(45. 36±5. 38)%和(24. 81±4. 67)%,差异有统计学意义(P<0. 05); sh PGAM1组和NC组Eca-109细胞培养上清的葡萄糖消耗量分别为(56. 84±11. 35)%和(99. 87±10. 48)%,sh PGAM1组和NC组Eca-109细胞培养上清的乳酸含量分别为(48. 02±10. 18)%和(99. 00±12. 35)%,差异均有统计学意义(P<0. 05)。sh PGAM1组细胞的PTEN表达量高于NC组(P<0. 05),而p-Akt、p-mTOR表达量均低于NC组(P<0. 05)。结论 PGAM1高表达与食管癌的发生、发展有关,通过激活Akt/mTOR信号通路诱导的Warburg效应,促使肿瘤细胞增殖,抑制其凋亡。

胰腺神经内分泌肿瘤术后预后不良与PGAM1表达水平的相关性研究

目的检测PGAM1在胰腺神经内分泌肿瘤患者中的表达情况,评估其与临床病理特征和预后的关系。方法采用免疫组化方法对71例胰腺神经内分泌肿瘤患者肿瘤组织中PGAM1免疫反应性进行检测。分别用实时荧光定量PCR(qRT⁃PCR)和Western blot检测肿瘤标本及其癌旁正常组织(n=24)的mRNA和蛋白水平。根据PGAM1免疫染色水平将胰腺神经内分泌肿瘤患者分为两组。分析研究PGAM1表达水平与患者临床病理特征和生存率的相关性。结果qRT⁃PCR(P=0.017)和Western blot检测均显示胰腺神经内分泌肿瘤组织中PGAM1表达水平明显高于正常胰腺组织,71例胰腺神经内分泌肿瘤标本免疫组化染色显示PGAM1蛋白主要定位于细胞质,PGAM1表达水平增高与肿瘤体积增大相关(t=3.65,P=0.025)。Kaplan⁃Meier生存曲线显示,PGAM1高表达的患者总生存率(P=0.019)和无进展生存率(P=0.049)均较低。结论PGAM1高表达可能是胰腺神经内分泌肿瘤患者的一个潜在的预测预后的生物标志物。

磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的分析磷酸甘油酸变位酶1(phosphoglycerate mutase1,PGAM1)在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达程度,探讨PGAM1的表达与胃癌临床病理特征的关系。方法选取2019年2~5月于徐州医科大学附属医院胃肠外科接受胃癌手术治疗的55例患者,采用免疫组化法检测55例患者胃癌组织及癌旁正常组织中PGAM1的表达水平,分析其水平与临床病理特征的关系。结果55例患者胃癌组织中的PGAM1高表达率(34/55,61.8%)显著高于癌旁正常组织(18/55,32.7%),差异有统计学意义(P<0.05);PGAM1蛋白表达水平与患者的临床分期(TNM)、淋巴结转移有关(P<0.05);与患者性别、年龄、肿瘤分化程度、肿瘤直径、脉管侵犯及浸润深度无关(P>0.05)。结论PGAM1在胃癌组织中呈高度表达,并且与胃癌的临床病理特征相关。

大肠癌组织中PGAM1和mTOR的表达及其临床意义

目的探讨磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在大肠癌组织中的表达及其临床意义。方法选取2015年1月至2018年12月临海市第一人民医院手术切除的60例大肠癌标本,采用免疫组化En Vision法检测大肠癌组织和癌旁组织(距肿瘤原发灶>5 cm)中PGAM1和mTOR的表达情况,采用χ2检验分析PGAM1和mTOR表达与大肠癌临床病理特征的关系,Spearman秩相关分析PGAM1和mTOR表达的相关性。结果大肠癌组织中PGAM1和mTOR的阳性表达率分别为61.67%和65.00%,均明显高于癌旁组织的11.57%和10.00%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。PGAM1、mTOR阳性表达均与大肠癌浸润深度、淋巴结是否转移、TNM分期有关(均P<0.05)。PGAM1和mTOR在大肠癌组织中的表达呈正相关(P<0.05)。结论PGAM1和mTOR表达升高可能与大肠癌的发生、发展密切相关。

探究胃癌组织中PDK-1、PGAM1的表达及临床病理特征

了解胃癌组织中PDK-1与PGAM1的表达和临床病理特征。方法 研究时间为2020年1月~2023年1月,选取了病例数43例,患者均为胃癌患者,另选取医院收治的43例普通胃病患者,两类患者分别划分至A组和B组,对两组患者的PDK-1、PGAM1表达阳性率展开比较,以此明确胃癌患者的PDK-1、PGAM1表达及临床病理特征。结果 A组患者都是危害患者,该组患者的PDK-1与PGAM1表达阳性率比B组患者更高,(P<0.05)。A组患者的PDK-1和PGAM1阳性表达在手术方式、肝转移、不同发病部位、脉管侵犯间无明显差异,(P>0.05)。A组患者中,PDK-1、PGAM1蛋白阳性表达者在3年内的生存率要远低于阴性表达者,(P<0.05)。结论 在胃癌组织当中,如果PDK-1与PGAM1都呈现高表达,可能直接和胃癌的临床病理特征产生密切的影响,只有掌握二者的表达、临床病理特征,有利于对胃癌患者展开准确的预后评估。

基于PGAM5-Drp1轴调控线粒体稳态探讨温肺降浊方对血管性痴呆模型大鼠的神经保护作用

目的观察温肺降浊方对血管性痴呆(vascular dementia,VaD)大鼠的影响,探究其可能的作用机制。方法36只健康雄性SD大鼠随机分为Sham group、Model group、Donepezil group、WFJZF-L group、WFJZF-M group和WFJZF-H group,每组6只,除Sham group,其余各组制备VaD模型,造模成功后各组以相应药物灌胃,治疗3周后进行各项检测。观察各组大鼠的行为学、海马CA1区形态学、神经树突及线粒体的变化,检测磷酸甘油酸变位酶5(phosphoglycerate mutase 5,PGAM5)、粒体动力相关蛋白(dynamics-related proteins1,Drp1)、神经萎缩相关蛋白1(opticatrophyprotein-1,OPA1)及相关蛋白的表达。结果与Sham group比较,Model group和各干预组大鼠逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数缩短(P<0.05),海马神经元形态稀疏,二级树突棘减少,线粒体外膜破裂;海马组织中PGAM5、Drp1蛋白表达升高(P<0.05),OPA1、Mfn1/2蛋白表达下降(P<0.05);与Model group比较,Donepezil group和WFJZF-H group大鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05),穿越平台次数增加(P<0.05),海马神经元数量增多,排列紧密,二级树突增多,线粒体损伤减少;PGAM5、Drp1蛋白表达下降(P<0.05),OPA1、Mfn1/2蛋白表达升高(P<0.05)。结论温肺降浊方可以调控PGAM5-Drp1信号轴以改善线粒体稳态平衡,从而改善大脑认知情况,发挥脑保护效应。

磷酸甘油酸变位酶1在生精功能障碍睾丸组织中的表达及意义

目的:检测磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)在不同程度生精功能不良睾丸组织中的表达情况,并分析PGAM1表达与临床病理参数的关系。方法:收集生精功能正常、轻度生精功能不良、重度生精功能不良、唯支持细胞综合征患者睾丸组织标本,统计性激素六项结果,采用免疫组化、qRT-PCR检测PGAM1在不同程度生精功能不良睾丸组织中的表达情况。结果:免疫组化结果显示PGAM1的高表达率在生精功能正常、轻度生精功能不良、重度生精功能不良及唯支持细胞综合征患者各组间比较,差异具有统计学意义(P=0.000),PGAM1表达与患者的年龄、睾丸体积、LH及T表达均无明显相关(P>0.05);而PGAM1低表达患者FSH水平高于PGAM1高表达患者(P=0.002 3);qRT-PCR结果提示PGAM1 mRNA在生精功能正常及唯支持细胞综合征患者睾丸组织中表达水平明显高于重度生精不良睾丸组织中的表达,差异具有统计学意义(P=0.000),PGAM1 mRNA表达与患者的年龄、睾丸体积、LH及T表达均无明显相关(P>0.05),而在FSH≤12 mIU/mL患者睾丸组织中的表达明显高于FSH>12 mIU/mL患者(P=0.043 0)。结论:PGAM1的表达与睾丸生精功能障碍有关,其低表达与重度生精功能不良的形成相关,其异常高表达与唯支持细胞综合征的形成有关。

磷酸甘油酸变位酶1在单次热应激小鼠睾丸中的表达变化

目的:探讨磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)在单次热应激致小鼠睾丸中的表达变化。方法:C57雄性小鼠32只,随机分为对照组(n=16)和热应激组(n=16)。热应激组和对照组小鼠下腹部分别置于43℃和25℃水浴中干预15 min,于处理后1、7 d取睾丸组织。HE检测睾丸组织细胞形态改变,免疫组化染色检测PGAM1蛋白定位及表达,Western印迹检测PGAM1蛋白表达水平。结果:HE结果显示,在热应激后小鼠睾丸体积显著减小,生精小管结构紊乱,细胞数量减少,第7天后细胞基本消失。免疫组化显示,PGAM1蛋白在睾丸生精小管广泛表达,热应激1天后睾丸组织中PGAM1的表达显著高于对照组,第7天睾丸组织中PGAM1表达较第1天下调,但仍显著高于对照组。Western印迹检测显示,与对照组相比,热应激后PGAM1蛋白表达明显增加。结论:小鼠睾丸热应激处理后PGAM1蛋白表达量在睾丸中出现动态变化,这种变化与热应激后睾丸生精细胞的增殖分裂相关。

基于Keap1/PGAM5/AIFM1介导的氧死亡途径探讨健脾益气化瘀祛痰法对高脂血症大鼠的影响与机制

目的 探讨健脾益气化瘀祛痰法防治血脂异常的可能有效机制。方法 将24只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、化瘀祛痰方组(13.846 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组8只。模型组、化瘀祛痰方组采用高脂饲料喂养建立高脂血症模型,造模8周后灌胃给药,化瘀祛痰方组给予化瘀祛痰方进行灌胃,空白组及模型组给予相应体积的生理盐水灌胃。4周后通过全自动生物化学分析仪检测甘油三酯(triglyceride,TG),总胆固醇(total cholesterol,TC),高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的含量;HE染色观察肝脏组织病理变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肝脏组织中活性氧(ROS)、醌氧化还原酶[NAD(P)H quinone dehydrogenase-1,NQO-1]和血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的含量;Western blotting法与实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肝脏组织中Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1),核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor2,Nrf2),去磷酸化线粒体凋亡诱导因子1(apoptosis inducing factor mitochondria associated 1,AIFM1),磷酸甘油酸变位酶5(phosphoglycerate mutase5,PGAM5)蛋白及mRNA的表达。结果 与空白组相比,模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C含量显著升高,HDL-C含量显著降低(P<0.05或P<0.01);肝脏脂肪变性脂肪空泡布满视野,肝细胞体积变大;肝脏组织中ROS含量显著升高,NQO-1和HO-1含量显著下降(P<0.01);肝脏组织中Keap1、AIFM1及PGAM5蛋白和mRNA的表达显著升高、Nrf2蛋白和mRNA的表达显著降低(P<0.01)。化瘀祛痰方可使TC、TG、 LDL-C含量显著降低,HDL-C含量显著升高(P<0.05或P<0.01);脂肪变性程度明显缓解,肝细胞脂肪空泡明显减少;肝脏组织中ROS含量显著降低,NQO-1和HO-1含量显著升高(P<0.05或P<0.01);肝脏组织中Keap1、AIFM1及PGAM5蛋白和mRNA的表达显著降低、Nrf2蛋白和mRNA的表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论 健脾益气化瘀祛痰法可能通过降低Keap1/PGAM5/AIFM1介导的氧死亡相关通路的表达而减轻脂质沉积及肝脏损伤,从而防治血脂异常。

磷酸甘油酸变位酶1在结直肠癌组织中的表达及其对患者预后和癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨结直肠癌(CRC)组织中磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)的表达及其与患者预后的关系,研究PGAM1对CRC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:选择2003年3月至2008年11月间在天津医科大学肿瘤医院手术切除的30例CRC患者的肿瘤组织标本及临床资料,采用免疫组织化学染色法检测CRC组织中PGAM1蛋白的表达,分析PGAM1表达与患者临床病理特征的关系,Kaplan-Meier生存分析法比较PGAM1高表达与低表达患者的OS、PFS来评价PGAM1表达与患者预后的关系。利用RNA干扰技术分别将si-PGAM1及si-NC质粒转染至HCT-116和SW480细胞,WB法检测转染细胞中PGAM1蛋白的表达水平,CCK-8、Transwell实验分别检测敲低PGAM1对CRC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:30例CRC组织中PGAM1阳性染色定位于CRC细胞的细胞质,其中33.3%(10/30例)呈高表达。虽然PGAM1高表达与CRC患者年龄、性别、组织学类型、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移及临床TNM分期无关(均P>0.05),但是PGAM1高表达与低表达患者相比其OS、PFS显著缩短。在CRC细胞中敲低PGAM1后,细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低(均P<0.05)。结论:CRC组织中PGAM1呈高表达,PGAM1高表达的患者预后较差;敲低PGAM1后细胞的增殖、迁移及侵袭能力均显著降低,提示PGAM1可能是CRC患者预后的生物标志物。

基于RIPK1/PGAM5通路探讨二甲双胍干预治疗对高眼压青光眼大鼠视网膜神经节细胞退行性变的影响

目的探讨单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)激活抑制RIPK1及其下游信号通路参与挽救视网膜神经节细胞退行性变的机制。方法清洁级大鼠72只,其中8只为假手术组(A组),其余构建高眼压(IOP)青光眼手术模型,随机分成B、C、D、E AMPK拮抗组、RIC组、RIPK1激动组。药物处理后检测IOP;染色比较各组视网膜形态学,视网膜神经节细胞凋亡情况,线粒体功能,AMPK、RIPK1、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、磷酸甘油酸变位酶(PGAM)5、Keap1蛋白表达水平,RIPK1、PGAM5的mRNA水平变化。结果D、E、siRNA、RIC组IOP低于治疗前、B、C、AMPK拮抗、RIPK1激动组(P<0.05);D、E、siRNA、RIC组GCL、IPL、ONL、OPL细胞密度、IPL细胞厚度高于B、C、AMPK拮抗、RIPK1激动组(P<0.05);D、E、siRNA、RIC组Cytc/a、P/O、H_(2)O_(2)水平高于B组(P<0.05),AMPK拮抗、RIPK1激动组Cytc/a、P/O、H_(2)O_(2)水平低于B组(P<0.05);B组神经组织中AMPK、PGAM5、Keap1表达水平低于A组(P<0.05),RIPK1、Caspase-3表达水平高于A组(P<0.05);siRNA、RIC组AMPK、PGAM5、Keap1表达水平高于D、E组,D、E组高于B、C、AMPK拮抗、RIPK1激动组(P<0.05),siRNA、RIC组RIPK1、Caspase-3表达水平低于D、E组,D、E组低于B、C、AMPK拮抗、RIPK1激动组(P<0.05);药物处理后,D、E、siRNA、RIC组RIPK1、PGAM5 mRNA表达水平低于B、C、AMPK拮抗、RIPK1激动组(P<0.05)。结论二甲双胍通过激活AMPK抑制RIPK1介导青光眼神经节细胞的退行性变,促使PGAM5降解,改善线粒体功能,从而发挥抑制神经节细胞程序性坏死的作用。

磷酸甘油酸变位酶1变构抑制剂增强结肠癌细胞对奥沙利铂的敏感性

目的:探究磷酸甘油酸变位酶1(phosphoglycerate mutase 1,PGAM1)变构抑制剂能否提高结肠癌细胞对奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)的敏感性。方法:癌症药物敏感性基因组学(genomics of drug sensitivity in cancer,GDSC)和癌细胞系百科全书数据库(cancer cell line encyclopedia,CCLE)分析四种共识分子亚型(consensus molecular subgroups,CMS)结肠癌细胞对OXA敏感性和PGAM1的表达水平;采用CCK8法和Annexin V/PI双染法,探究PGAM1变构抑制剂HKB99对人源结肠癌细胞增殖和凋亡的作用;采用CCK8法分析HKB99联合OXA对结肠癌增殖的作用,并进行协同系数分析。结果:首先,GDSC和CCLE数据库分析结果显示,相对于CMS2和CMS3亚型,CMS1和CMS4亚型结肠癌细胞对OXA敏感的细胞比例降低,PGAM1表达升高,具有显著性差异(P<0.05)。进一步研究表明,HKB99显著抑制不同CMS类型的人源结肠癌SW480、SCUN2B和DLD-1细胞的增殖,其IC50均为1μM左右;Annexin V/PI双染法结果显示,与对照组相比,HKB99处理组DLD-1细胞的凋亡水平显著上升(P<0.01)。最后,CCK8法检测显示,与OXA单加药组相比,1.5μM的HKB99显著提高结肠癌DLD-1细胞对OXA的敏感性(IC_(50):3.26 vs0.37μM);协同系数分析结果显示,OXA在浓度1.56μM和25μM之间与HKB99的协同系数小于1。结论:本研究发现相对于CMS2和CMS3,CMS1和CMS4结肠癌细胞对OXA敏感性较低且PGAM1表达水平升高,PGAM1变构抑制剂HKB99增强结肠癌细胞对OXA的敏感性,提示HKB99有望提高结肠癌OXA化疗的敏感性,为患者个体化化疗提供新的治疗策略。

抗肿瘤代谢靶标磷酸甘油酸变位酶1及其抑制剂的研究进展

肿瘤细胞的Warburg效应是近期肿瘤代谢研究的一大热点,磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)在糖酵解生物通路中起着重要作用。报道显示PGAM1在肿瘤细胞中普遍高表达,同时促进细胞增殖过程中的糖酵解和生物合成代谢通路。基于该发现,针对PGAM1进行小分子抑制剂研究成为开发抗肿瘤药物的新思路。综述PGAM1在肿瘤细胞中的功能、意义以及PGAM1抑制剂的开发前景。