痛泻要方的抗炎镇痛止泻作用及对PGE_2/cAMP信号通路的影响

目的探讨痛泻要方的抗炎镇痛作用机制。方法采用二甲苯致小鼠耳肿胀法观察抗炎作用;采用酶联免疫法测定冰醋酸致痛小鼠血清中前列腺素E2(PGE2)和环磷酸腺苷(cAMP)的浓度;采用大黄致泻法观察止泻作用。结果痛泻要方对二甲苯致小鼠耳肿胀、对冰醋酸致痛小鼠均有显著抑制作用;并明显降低冰醋酸致痛小鼠血清中PGE2和cAMP浓度;能延长小鼠排黑粪的潜伏期,明显减少黑粪排出数量。结论痛泻要方具有良好抗炎镇痛止泻作用,PGE2/cAMP信号通路参与了痛泻要方的抗炎镇痛作用。

PGE_2通过Wnt/β-catenin信号通路促进子宫内膜癌细胞生长的研究

目的:探讨PGE2对子宫内膜癌细胞生长的促进作用及分子机制。方法:免疫组织化学(EnVision)法检测正常子宫内膜与子宫内膜癌组织中β-catenin的表达;用PGE2、EP2受体激动剂Butaprost、EP2受体拮抗剂AH6809处理子宫内膜癌Ishikawa细胞株,以WST-8细胞增殖实验检测各实验组细胞的增殖率;用Western blot方法分别检测β-catenin、p-β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β在未处理组、PGE2处理组、EP2受体激动剂处理组和EP2受体拮抗剂处理组中的表达;免疫荧光技术检测β-catenin在未处理组和PGE2处理组中表达定位的情况。结果:免疫组织化学法结果显示β-catenin在正常子宫内膜组织中仅存在膜表达,而子宫内膜癌组织中为胞浆和胞核的表达。WST-8实验结果显示:经PGE2、Butaprost和AH6809处理后,细胞的增殖率相对于对照组分别为183.9%、151.9%、72.1%。Western blot实验结果显示:PGE2处理后,β-catenin蛋白表达上升至235.7%而p-β-catenin水平下降至76.8%,p-GSK-3β水平升高至204.3%;EP2受体激动剂+PGE2处理组显示β-catenin蛋白表达上升至279.7%而p-β-catenin水平下降至33.6%,p-GSK-3β水平升高至236.7%;EP2受体拮抗剂+PGE2处理组显示β-catenin蛋白表达上升至185.2%而p-β-catenin水平下降至73.9%,p-GSK-3β水平升高至116.2%。免疫荧光技术探测结果表明:PGE2处理子宫内膜癌细胞后,β-catenin蛋白在癌细胞胞浆中的表达信号明显强于未处理组,并出现明显核内表达信号。结论:PGE2能促进子宫内膜癌细胞的增殖,并伴有β-catenin蛋白的过表达和入核,其机制可能涉及到EP2受体激活和Wnt/β-catenin信号转导通路。

机动车尾气诱发大鼠慢性阻塞性肺疾病并上调气道上皮细胞COX-2/PGE2/EP受体信号通路

目的:探究机动车尾气(MVE)长期暴露引起大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)发生时,气道上皮细胞中环加氧酶2(COX-2)/前列腺素E;(PGE;)/E-前列腺素类激素(EP)受体信号通路成员的表达变化。方法:(1)动物实验:健康雄性SD纯系大鼠(SPF级)16只,随机分为2组:MVE暴露组(n=8)和空白对照(CTL)组(n=8)。采用MVE暴露6个月的方法建立COPD大鼠模型。造模结束后,使用Buxco小动物有创肺功能仪检测大鼠肺功能;肺组织切片行HE染色并评估肺组织病理变化;ELISA法检测大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和PGE;的水平,评估大鼠肺部炎症情况;采用免疫荧光及Western blot法检测肺组织COX-2及EP受体蛋白水平;提取肺组织核蛋白,Western blot检测MVE对肺组织NF-κB核转位的影响。(2)细胞实验:采用MVE细颗粒物(PM2.5)标准品刺激人正常支气管上皮细胞BEAS-2B。ELISA法检测细胞培养液中PGE;、IL-6和IL-8的水平;Western blot检测细胞中COX-2及EP受体蛋白水平;收集细胞核蛋白,检测PM2.5对NF-κB核转位的影响。结果:(1)MVE长期暴露致大鼠出现类似COPD的症状,包括气道炎症、肺气肿及肺功能下降(P<0.05);(2)MVE长期暴露显著上调大鼠肺组织及气道上皮细胞COX-2和EP1/EP4受体表达(P<0.05),而对EP2/EP3受体表达无显著影响(P>0.05);(3)MVE PM2.5标准品长时间暴露导致BEAS-2B细胞COX-2、PGE;和EP1/EP4表达水平显著升高(P<0.05),但对EP2/EP3表达无显著影响(P>0.05);(4)PM2.5暴露诱导大鼠肺组织及BEAS-2B细胞中NF-κB活化增加(P<0.05)。结论:MVE诱导大鼠COPD发病过程中,气道上皮细胞COX-2-PGE;-EP1/4受体信号通路成员表达增加并伴随NF-κB信号通路的活化。

β-防御素3调节人牙龈成纤维细胞分泌MMP-1及PGE_2的信号通路研究

目的:研究β-防御素3(HBD3)调节人牙龈成纤维细胞(HGFs)分泌MMP-1和PGE2的信号通路。方法:取P5代HGFs接种于96孔板,并随机分为1个对照组(HBD3)和7个实验组(HBD3+antiTLR2、HBD3+anti-TLR4、HBD3+SB203580、HBD3+PD98059、HBD3+SP600125、HBD3+LY294002、HBD3+SC3060)。各实验组分别以相应的信号通路抑制剂anti-TLR2、anti-TLR4预处理30 min,SB203580、PD98059、SP600125、LY294002、SC3060预处理60min,然后各组再加入100μL浓度为1μg/mL的HBD3进行培养,12h后收集各组培养上清液,ELISA法检测MMP-1及PGE2浓度。结果:信号通路抑制剂SB203580、PD98059、SC3060、anti-TLR2各组MMP-1的浓度(ng/mL)分别为3.660±0.286、3.410±0.554、4.435±0.235、3.995±0.612,低于对照组(5.128±0.256)ng/mL(P<0.05);信号通路抑制剂SP600125、SC3060两组PGE2浓度(pg/mL)分别为146.518±15.800和180.349±5.490,低于对照组(209.213±7.284)pg/mL(P<0.05)。结论:HBD3调节HGFs分泌MMP-1涉及TLR2、P38、ERK、NF-κB信号途径;调节PGE2分泌涉及JNK和NF-κB信号途径。

断体地龙提取液对结肠炎相关性结肠癌COX-2/PGE_2/β-catenin信号通路的影响

目的:观察断体地龙提取液对结肠炎相关性结肠癌小鼠COX-2/PGE_2/β-catenin信号通路的影响。方法:60只C57BL/6J雄性小鼠随机分为空白组、模型组、断体地龙提取液低、中、高剂量组和柳氮磺吡啶组。除空白组外,其余5组均采用氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠法复制结肠炎相关性结肠癌模型。连续治疗15d后光镜下观察结肠组织病理学改变,并观察小鼠DAI评分、结肠器官重量及结肠组织成瘤率;Western-blot法检测结肠组织中COX-2、PGE_2和β-catenin蛋白的表达。结果:断体地龙提取液能够显著改善CACC小鼠结肠黏膜的病理学形态,降低小鼠DAI评分及结肠质量,减少结肠中瘤体的形成,明显优于模型组(P<0.05);断体地龙提取液能够显著降低结肠组织中COX-2、PGE_2、β-catenin蛋白的表达,与模型组比较明显优于模型组(P<0.05)。结论:断体地龙提取液能够通过抑制COX-2/PGE_2/β-catenin信号通路的激活,从而抑制结肠炎诱发的结肠癌的发生。

PGE_2-EP1信号转导通路在肝细胞癌中的作用及表没食子儿茶素没食子酸酯对其的影响

目的观察肝细胞癌(HCC)患者血清中前列腺素E2(PGE2)水平及前列腺素E受体(EP1)在HCC细胞和人肝细胞中的表达,分析PGE2及EP1激动剂ONO-DI-004对HCC增殖和移行的相关性,研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对PGE2或ONO-DI-004刺激的HCC的抑制作用及对HCC细胞周期、凋亡、PGE2、EP1和Bcl-2表达的影响,初步探讨EGCG抗HCC的作用靶点和机制。方法HepG2细胞设置组别为:对照组、PGE2(0、4、40、400、4 000、40 000 nmol/L)组、EGCG(12.5、25、50、100μg/ml)组、PGE2(4、40、400、4 000)+EGCG(100μg/ml)组、ONO-DI-004(4、40、400、4 000nmol/L)组、ONO-DI-004+EGCG(100μg/ml)组、ONO-8711(210 nmol/L,1、5、10μmol/L)组。MTT法检测HepG2的增殖;细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测HepG2的移行;Western blot法和免疫荧光实验检测HepG2中EP1、Gq和Bcl-2蛋白的表达;酶联免疫分析法检测HCC患者血清PGE2及HepG2产生PGE2和血管内皮生长因子(VEGF)的水平;流式细胞技术检测HepG2细胞周期和凋亡。结果与正常志愿者血清中的PGE2水平比较,HCC患者的血浆中PGE2的水平呈高表达。与对照组相比,EGCG(12.5、25、50、100μg/ml)显著降低HepG2中PGE2和VEGF水平。EP1在肝癌细胞株MHCC-97L和HepG2中的表达明显高于在人肝细胞株L02中的表达。EGCG(100μg/ml)能显著抑制EP1受体以及ONO-DI-004诱导的Bcl-2的表达(P<0.01)。观察EGCG(12.5、25、50、100μg/ml)作用于HepG2后对细胞的增殖作用,100μg/mlEGCG对HepG2作用24 h后可显著抑制HepG2的生长(P<0.01),细胞的平均抑制率为41%。24 h的药物浓度与抑制率具有相关性(r=0.8,P=0.02)。EGCG对HepG2具有显著抑制作用。细胞划痕实验和Transwell侵袭实验观察PGE2(4μmol/L)和ONO-DI-004(400 nmol/L)刺激后,HepG2移行较对照组明显增加,EGCG和ONO-8711均能显著抑制HepG2移行,且给予EGCG(100μg/ml)后可显著降低PGE2和ONO-DI-004刺激的HepG2的移行(P<0.01)。流式细胞术检测细胞凋亡率,HepG2经ONO-DI-004(400 nmol/L)、PGE2(4μmol/L)、EGCG(100μg/ml)、EGCG(100μg/ml)+ONO-DI-004(400 nmol/L)以及EGCG(100μg/mL)+PGE2(4μmol/L)作用24 h,对照组的细胞凋亡率为(2.36±2.51)%,EGCG(100μg/ml)处理组的凋亡率为(16.8±1.73)%,EGCG(100μg/ml)处理组与对照组的细胞凋亡率相比差异有显著性(P<0.01)。ONO-DI-004(400 nmol/L)处理组的凋亡率为(0.6±1.86)%,EGCG(100μg/ml)+ONO-DI-004(400 nmol/L)处理组的凋亡率为(12.25±2.64)%,两组间的差异具有显著性(P<0.01)。EGCG(100μg/ml)可显著诱导HepG2细胞的凋亡,对PGE2、ONO-DI-004刺激的HepG2细胞也有明显的促凋亡作用。结论①HCC患者血清中PGE2表达异常升高,提示PGE2在HCC患者中发挥重要作用;②HCC细胞株中EP1表达较正常肝细胞异常升高,PGE2可能通过EP1发挥促HCC作用;③EGCG呈浓度依赖性抑制由PGE2和ONO-DI-004刺激引起的HepG2的增殖和转移,抑制HCC异常增殖、移行、细胞周期,诱导凋亡是EGCG的重要作用;④EGCG抑制HepG2产生VEGF和PGE2,降低EP1及ONO-DI-004刺激的Bcl-2的表达,但对Gq蛋白的表达没有影响,降低PGE2和VEGF水平、下调EP1和Bcl-2的表达是EGCG抑制HCC增殖和移行、诱导凋亡的重要机制之一。

参榆洗液改善痔术后大鼠痛觉敏化及对cAMP/PKA信号通路的影响

目的:基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A(c AMP/PKA)信号通路探究参榆洗液对痔术后大鼠疼痛的影响。方法:构建痔术后大鼠模型,将造模成功的56只SD大鼠随机分为模型组、溶剂模型组、参榆洗液组、参榆洗液+Forskolin(c AMP/PKA信号通路激动剂)组、Forskolin组、H-89(c AMP/PKA信号通路抑制剂)组、NS-398(PGE_(2)抑制剂)组,每组8只;另取8只大鼠为空白组。各组大鼠给予对应药物干预,连续7 d。给药结束后1 d,观察大鼠一般状态及疼痛相关动物学行为,观察创面变化并计算创面愈合率,苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠创面组织病理学改变,蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测各组大鼠背根神经节TRPV1、p-PKA蛋白表达及创面组织中c AMP、PKA蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠创面组织中c AMP m RNA、PKA m RNA表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测创面组织中PGE_(2)、IL-6、IL-1β含量。结果:模型组大鼠背根神经节组织中p-PKA、TRPV1及创面周围组织c AMP、PKA、PGE_(2)、c AMP m RNA、PKA m RNA、IL-6、IL-1β表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,H-89组、NS-398组、参榆洗液+Forskolin组、参榆洗液组创面组织病变程度减轻,创面愈合率依次上升,背根神经节组织中p-PKA、TRPV1及创面组织c AMP、PKA、c AMP m RNA、PKA m RNA、IL-6、PGE_(2)、IL-1β表达水平依次降低(P<0.05);Forskolin干预能显著提高痔术后大鼠模型c AMP、PKA、TRPV1、p-PKA、PGE_(2)、IL-6、IL-1β表达水平(P<0.05),与参榆洗液联合干预后,上述蛋白及炎症因子表达水平显著下降(P<0.05)。结论:参榆洗液对痔术后大鼠cAMP/PKA信号通路有抑制作用,抑制c AMP/PKA信号通路可改善痔术后痛觉敏化,其机制可能与抑制PGE_(2)表达、减少炎症因子释放、抑制TRPV1活化有关。

Peiminine通过调控COX-2/PGE2/EGFR信号通路促进人结肠癌HCT-116细胞凋亡的分子机制

目的研究Peiminine调控COX-2/PGE2/EGFR信号通路促使人结肠癌HCT-116细胞凋亡的分子机制。方法基于ELISA法、Real-time qPCR和Western Blot法测定Peiminine处理人结肠癌HCT-116细胞后PGE2、COX-1、COX-2、ERK、P-ERK、P53、P-P53、P38和P-P38含量的变化。结果与对照组(Ctrl)相比,Peiminine处理后细胞内PGE2含量显著降低(P<0.01)。同时利用Real-time qPCR和Western Blot法检测发现Peiminine能够明显降低人结肠癌HCT-116细胞COX-2的含量,IL-6和NF-κB也显著下调而IL-10明显上调。后期的研究发现EGFR信号通路中关键蛋白(ERK、P-ERK、P53、P-P53、P38和P-P38)的表达量经Peiminine处理后均降低,具有统计学差异(P<0.01)。结论Peiminine可以抑制COX-2的表达和PGE2的生成,改善抗肿瘤免疫反应,抑制EGFR信号通路,从而促进肿瘤细胞凋亡,达到抗肿瘤的作用。

虫草素通过调节COX-2/PGE2信号通路促进骨质疏松大鼠的骨折愈合

目的探讨虫草素(Cordycepin)调控环氧化酶2(COX-2)/前列腺素E2(PGE2)信号通路对骨质疏松大鼠骨折愈合的影响。方法制备骨质疏松大鼠模型,将大鼠分为Sham组、Model组、Cordycepin组(10 mg/kg腹腔注射)、Cordycepin+NS-398组(腹腔注射10 mg/kg的Cordycepin+10 mg/kg的COX-2抑制剂),分别检测骨折愈合情况、骨密度(BMD)及生物力学性能,HE染色观察骨痂组织病理学变化,ELISA法检测血清ALP、CTX-Ⅰ、OC水平及骨痂组织COX-2、PGE2、cAMP水平,免疫组化法检测骨痂组织COX-2、VEGF表达。结果与Sham组比较,Model组骨折线明显,X光片评分、BMD、骨最大负荷与刚度、ALP、OC水平显著降低、骨组织COX-2、PGE2、cAMP、VEGF表达水平显著降低,CTX-Ⅰ水平显著升高(P<0.05);与Model组比较,Cordycepin组X光片评分、BMD、骨最大负荷与刚度、ALP、OC水平显著升高、骨组织COX-2、PGE2、cAMP、VEGF表达水平显著升高,CTX-Ⅰ水平显著降低(P<0.05);NS-398可逆转Cordycepin对骨质疏松大鼠骨折愈合的促进作用。结论虫草素可能通过激活COX-2/PGE2信号通路,促进骨质疏松大鼠的骨折愈合。

标本配穴针灸干预COX2/PGE2信号通路改善腹泻型肠易激综合征大鼠内脏高敏感性

目的观察标本配穴针灸对IBS-D大鼠血清、心脏组织、结肠组织COX2、PGE2的影响,探讨标本配穴针灸是否干预COX2/PGE2信号通路,改善IBS-D大鼠内脏高敏感性。方法将40只SD大鼠随机分为4组,即对照组、模型组、标本配穴组、常规配穴组。模型组、标本配穴组、常规配穴组大鼠通过慢性、急性应激结合的方法,制备IBS-D模型,评价模型指标为内脏疼痛阈值(P<0.05)。标本配穴组给予针刺+艾灸“内关”“足三里”“关元”,常规配穴组给予针刺+艾灸“上巨虚”、“足三里”、“天枢”,1次/d,共28d。观察各组大鼠的内脏疼痛阈值、腹泻指数及粪便率,代谢组学技术检测血清代谢物、Western blot检测大鼠心脏组织、结肠组织COX2、PGE2蛋白水平,qPCR检测大鼠心脏组织、结肠组织COX2 mRNA表达。结果造模后,模型组大鼠与对照组比较内脏疼痛阈值,有显著统计学差异(P<0.01),提示造模成功;标本配穴组、常规配穴组大鼠与模型组比较内脏疼痛阈值,有显著统计学差异(P<0.01)。模型组大鼠与对照组比较粪便含水量,有显著统计学差异(P<0.01);模型组大鼠与标本配穴组大鼠比较粪便含水量,有显著统计学差异(P<0.01);标本配穴组大鼠与常规配穴组比较粪便含水量,有显著统计学差异(P<0.01)。模型组与对照组比较,差异代谢物PGE2下降;标本配穴组与模型组比较,差异代谢物PGE2上升。模型组与对照组大鼠比较心脏组织COX2、PGE2和结肠组织PGE2蛋白水平,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。标本配穴组与模型组大鼠比较心脏组织COX2、PGE2和结肠组织PGE2蛋白水平,差异有显著统计学意义(P<0.01)。常规配穴组与模型组大鼠比较心脏组织COX2、结肠组织PGE2蛋白水平,差异有统计学意义(P<0.01;P<0.05)。常规配穴组与标本配穴组比较结肠组织COX2蛋白水平,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组与对照组大鼠比较心脏组织、肠道组织COX2 mRNA表达水平,差异均有显著统计学意义(P<0.01);标本配穴组与模型组大鼠比较心脏组织、肠道组织COX2 mRNA表达水平,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);常规配穴组与模型组比较肠道组织COX2 mRNA表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论标本配穴针灸能够上调IBS-D大鼠血清中差异代谢物PGE2,降低心脏组织、肠道组织COX2的表达,降低肠道组织PGE2的表达,改善腹痛、腹泻症状,改善内脏高敏感性。

阻断Cn/NFAT通路对钛颗粒诱导成骨细胞分泌IL-6和PGE_2的影响

目的:观察阻断钙调磷酸酶(Cn)/活化T细胞核因子(NFAT)通路对钛颗粒诱导成骨细胞分泌IL-6和PGE2的影响。方法:取新生大鼠头颅骨,经消化法获取成骨细胞,根据培养条件,分为钛颗粒组、钛颗粒/VIVIT肽组、VIVIT肽组和对照组。细胞培养96 h后行Western blot检测NFATc1蛋白表达,于6、24、96 h离心后取细胞培养上清,用ELISA法检测各组IL-6和PGE_2的含量。结果:钛颗粒组NFATc1表达高于对照组(P<0.01),钛颗粒/VIVIT肽组NFATc1表达显著低于钛颗粒组(P<0.01),钛颗粒组培养上清IL-6和PGE_2含量各时间点均显著高于对照组(P<0.05),钛颗粒/VIVIT肽组较钛颗粒组各时间点均显著降低(P<0.05)。结论:11R-VIVIT肽特异性阻断Cn/NFAT通路可显著抑制钛颗粒诱导的成骨细胞IL-6和PGE_2的分泌。

利拉鲁肽通过cAMP/PKA/CREB通路干预2型糖尿病大鼠骨质疏松的机制研究

目的:探讨利拉鲁肽通过环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(CREB)通路干预2型糖尿病大鼠骨质疏松的机制。方法:建立2型糖尿病骨质疏松大鼠模型,随机分为模型组、利拉鲁肽组、N-[2-(对溴甲酰氨基)乙基]-5-异喹啉磺酰胺·2HCl水合物(H-89,PKA抑制剂)组和利拉鲁肽+H-89组,每组12只;另取12只SD大鼠设为假手术组。分组处理后,通过微计算机断层扫描术(micro-CT)检测大鼠股骨干骺端显微结构,比较骨矿物质密度(BMD)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨体积分数(BV/TV)和骨小梁数量(Tb.N);通过骨科生物力学测试评估大鼠股骨生物力学状况,比较最大载荷、屈服载荷和弹性模量;检测大鼠股骨矿盐含量;通过试剂盒检测大鼠血清活性氧(ROS)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和cAMP水平;通过Western blot法检测大鼠骨组织cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白(p-PKA/PKA和p-CREB/CREB)水平。体外培养大鼠股骨成骨细胞,随机分为对照组、模型组、利拉鲁肽组、H-89组和利拉鲁肽+H-89组,后3组以16.5 mmol/L葡萄糖处理以构建细胞模型。分组处理后,通过CCK-8实验检测细胞活力;通过试剂盒检测细胞cAMP水平;通过Western blot法检测细胞cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白(p-PKA/PKA和p-CREB/CREB)水平。结果:与假手术组(对照组)相比,模型组大鼠BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、最大载荷、屈服载荷、弹性模量、骨矿盐含量,血清CAT、GSH-Px及cAMP水平,细胞活力、细胞cAMP水平、骨组织及细胞p-PKA/PKA和p-CREB/CREB水平显著降低(P<0.05),ROS和MDA水平显著升高(P<0.05)。与模型组及利拉鲁肽+H-89组分别相比,利拉鲁肽组大鼠BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、最大载荷、屈服载荷、弹性模量、骨矿盐含量,血清CAT、GSH-Px及cAMP水平,细胞活力、细胞cAMP水平、骨组织及细胞p-PKA/PKA和p-CREB/CREB均显著升高(P<0.05),ROS和MDA水平均显著降低(P<0.05);H-89组上述指标均呈相反改变(P<0.05)。结论:利拉鲁肽可激活cAMP/PKA/CREB信号通路,进而清除高糖诱导的ROS,降低2型糖尿病大鼠氧化应激水平,提高其骨生物力学性能及骨矿化,缓解骨流失,减轻大鼠骨质疏松症状。

PM2.5暴露后激活核转录因子/环氧化酶2/前列腺素E2信号通路引起氧化应激损伤雄性生殖功能的机制研究

目的分析大气细颗粒物(PM2.5)暴露后激活核转录因子κB(NF-κB)/环氧化酶2(COX-2)/前列腺素E2(PGE2)信号通路引起氧化应激损伤雄性生殖功能的机制。方法20只清洁级别雄性小鼠随机分为对照组、暴露组各10只,对照组仅饲养于SPF级动物中心,暴露组予以PM2.5暴露,连续12周后均麻醉处死,评估生殖功能,进行考马斯亮蓝染色法、免疫组化法观察,测定睾丸组织匀浆及血清中睾酮(T)、雄性激素结合蛋白(ABP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6),实时荧光定量PCR及Western blot法测定NF-κB、COX-2、PGE2。结果暴露组的睾丸系数、附睾系数、精子计数、精子活动率、精子成活率低于对照组,精子畸形率高于对照组(P<0.05);考马斯亮蓝染色中暴露组细胞质骨架逐渐松弛回缩甚至断裂、消失,分布紊乱,生精细胞脱落;免疫组化染色中暴露组睾丸间质细胞体积较对照组变小,染色加深,细胞核固缩,胞浆含量少;暴露组睾丸组织匀浆及血清中T、ABP表达水平低于对照组,TNF-α、IL-1、IL-6水平高于对照组(P<0.05);暴露组NF-κB、COX-2、PGE2的mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(P<0.05)。结论PM2.5暴露可能增加睾丸Sertoli细胞形态结构及功能损伤,影响雄性大鼠生殖功能,机制可能为激活NF-κB/COX-2/PGE2信号通路引起氧化应激损伤。

红景天苷通过COX-2/PGE2/VEGF通路对糖尿病大鼠视网膜病变的影响

目的探讨红景天苷对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠视网膜病变(DR)的保护作用。方法将32只雄性SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组及红景天苷低、高剂量(50、200 mg/kg)组。腹腔注射STZ建立糖尿病大鼠模型。模型诱导成功后,灌胃给予红景天苷12周。苏木素和伊红染色观察视网膜组织的病理学改变;荧光定量PCR、免疫印迹及酶联免疫吸附试验检测视网膜内相关mRNA和蛋白的表达情况。结果与对照组相比,糖尿病组视网膜神经节细胞层排列紊乱、视网膜神经节细胞(RGC)密度明显降低(P<0.05);视网膜环氧合酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01),前列腺素E2(PGE2)分泌水平显著升高(P<0.01)。与糖尿病组相比,红景天苷低剂量组COX-2和VEGF mRNA表达以及PGE2分泌水平显著下降(P<0.05);红景天苷高剂量组RGC层排列情况有所改善,RGC密度明显升高(P<0.05),COX-2和VEGF mRNA及蛋白表达(P<0.05)和PGE2分泌水平(P<0.01)显著降低。结论红景天苷能改善糖尿病大鼠视网膜组织病理改变,其机制可能与抑制COX-2/PGE2/VEGF通路相关。

盆腔器官脱垂患者子宫骶韧带COX2、PGE2和p16的表达及意义

目的探讨盆腔器官脱垂(POP)患者子宫骶韧带环氧化酶2(COX2)、前列腺素E2(PGE2)、p16的表达及其与年龄和胶原代谢的关系。方法应用免疫组化法检测POP组(POP患者)和对照组(非脱垂者)子宫骶韧带石蜡标本中COX2、PGE2、p16、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(COLⅢ)的表达;再将2组按照年龄分为<55岁亚组与>65岁亚组,并比较其表达情况;分析COX2、PGE2与COLⅠ和COLⅢ之间的相关性。结果POP组子宫骶韧带组织中COLⅠ和COLⅢ的表达水平低于对照组,COX2、PGE2表达则高于对照组;POP组与对照组的<55岁亚组与>65岁亚组COX2、PGE2表达水平无明显差异;COX2、PGE2与COLⅠ和COLⅢ的表达呈负相关;2组p16表达无明显差异,但在>65岁亚组中的表达高于<55岁亚组。结论COX2、PGE2在POP患者子宫骶韧带组织中表达水平升高,从而使韧带组织胶原纤维的含量减少。COX2、PGE2的表达水平与年龄无明显关系。COX2/PGE2信号通路可能参与POP的发生发展。

白细胞内IRE1αlpha-XBP1信号通路控制前列腺素的生物合成进而参与对痛觉的调控

IRE1alpha-XBP1信号通路在调控免疫代谢过程中参与维持内质网的稳态(Homeostasis),但该信号通路在白细胞内的生理功能尚无研究报道。本研究发现IRE1αlpha缺陷的髓系白细胞在发生内质网应激(ER stress)或通过模式识别受体(PRR)被刺激以后,前列腺素内过氧化物合成酶2(Ptgs2/Cox-2)及前列腺素E合酶(Ptges/mPGES-1)的水平下调。在IRE1α或XBP1缺陷的髓系白细胞中,可诱导的前列腺素包括致痛介质—前列腺素E2(PGE2)的生物合成减少;但在其他内质网应激感受器缺陷时,未发现PGE2的合成减少。功能性XBP1反式激活人源PTGS2及PTGES基因以保证适量的PGE2生成。白细胞内IRE1alpha-XBP1功能缺陷或给予IRE1alpha抑制剂的小鼠,在PGE2依赖的疼痛模型中表现出痛行为的减轻。因此,IRE1alpha-XBP1是控制前列腺素生物合成的通路,也是治疗疼痛的潜在靶点。

经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸对膝骨性关节炎患者TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路及TGF-β_1水平的影响

目的:探讨经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸对膝骨性关节炎(KOA)患者TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路及转化生长因子β_1(TGF-β)1水平的影响。方法:将KOA患者98例(98膝)随机分为2组各49例,对照组给予嘎日迪-15味丸治疗,实验组在对照组基础上给予经筋微创松解疗法,疗程均为2个月;观察2组治疗效果,比较2组治疗前后膝关节WOMAC评分、关节液中前列腺素E_2(PGE)2、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、TGF-β_1水平、关节软骨中Toll样受体4 (TLR4)、髓样分化因子(MyD88)、核因子κB (NF-κB)蛋白表达。结果:总有效率实验组为89.90%,对照组为71.43%,2组比较,差异有统计学意义(P <0.05)。治疗后2组功能、关节疼痛、僵硬等评分均较治疗前降低(P <0.05),且实验组各项评分均低于对照组(P <0.05)。治疗后2组关节积液TGF-β_1、PGE_2、MMP-9水平均较治疗前降低(P <0.05),且实验组各项指标水平均低于对照组(P <0.05)。治疗后2组关节软骨MyD88、TLR4、NF-κB蛋白表达水平较治疗前降低,且实验组各项指标水平均低于对照组(P <0.05)。结论:经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸治疗KOA疗效显著,其作用机制可能与降低MyD88、TLR4、NF-κB蛋白表达及TGF-β_1、PGE_2、MMP-9水平有关。

复方柴归方超临界CO2提取物调控cAMP信号通路的抗抑郁作用机制研究

目的从环磷酸腺苷(c AMP)信号通路角度探讨复方柴归方超临界CO2提取物的抗抑郁作用机制。方法采用慢性温和不可预知应激(CUMS)程序对大鼠进行造模,以高、中、低剂量复方柴归方超临界CO2提取物及文拉法辛为干预药物,检测各组大鼠海马组织中c AMP、蛋白激酶A(PKA)、环磷酸腺苷反应原件结合蛋白(CREB)、脑源性神经生长因子(BDNF)水平及其相应m RNA水平。结果与对照组比较,模型组大鼠海马组织中c AMP、PKA、p-CREB、BDNF水平显著下降(P<0.05、0.01),复方柴归方干预后,与模型组比较,各剂量组c AMP、PKA、p-CREB、BDNF水平均出现回调(P<0.05、0.01);同时,模型组大鼠海马组织中酪氨酸激酶B(TrkB)、PKA、p-CREB、BDNF的m RNA水平显著下降(P<0.05、0.01),复方柴归方干预后,与模型组相比,各剂量组Trk B、PKA、p-CREB、BDNF的m RNA水平均出现回调(P<0.05、0.01)。结论复方柴归方超临界CO2提取物可通过调控c AMP-PKA-CREB-BDNF信号通路发挥抗抑郁作用。

PGE2信号通路对子宫内膜异位症发病机制的影响

子宫内膜异位症(EMs)是育龄期妇女常见的一种多基因、多因素发病的良性疾病,但是目前具体发病机制尚不明确。最近研究表明PGE2与EMs的发病及相关并发症的发生密切相关。EMs具有雌激素依赖性,患者体内机体免疫细胞清除机制受到抑制,其体内PGE2水平升高,不但可以直接促进异位内膜细胞的存活和增殖,而且具有促进雌激素合成、抑制机体免疫细胞清除机制及促进生长因子产生的作用。因此,PGE2通过直接与间接途径对EMs中异位内膜的存活和增殖进行调节,对EMs的发病具有重要作用。但是目前还不能表明PGE2对EMs作用的确切病理机制,尚需进一步研究明确PGE2信号通路异常的分子机制。