噬菌体展示技术筛选大鼠佐剂性关节炎中PGE_2受体的拮抗剂

目的:通过噬菌体技术筛选PGE2受体拮抗剂,探讨其在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)中的作用,为RA的治疗开辟新的途径。方法:应用噬菌体展示技术,以PGE2为靶点,对噬菌体环七肽库进行“吸附-洗脱-扩增”筛选过程,5轮筛选后,随机挑取噬菌体克隆进行亲和力鉴定,并选取亲和力高的克隆进行测序并对序列进行分析。合成环七肽后,建立佐剂性关节炎(AA)动物模型,通过分析足爪肿胀度,以及采用ELISA方法检测关节浸液中细胞因子的含量,对小肽的抗炎作用进行探讨。结果:噬菌体经过富集后,随机挑选的23个克隆中有21个阳性克隆,而在测序的8个克隆中4个具有相同的序列,其余也具有保守氨基酸。合成的环七肽能降低AA关节的肿胀度并减少关节浸液中前炎症细胞因子的含量。结论:噬菌体筛选PGE2受体拮抗剂的方法可行,并且得到的环七肽具有一定的抗炎作用。

rhIL-1α和rhTNF-α对人成纤维滑膜细胞PGE_2受体和Gαs的影响及芍药苷的作用

目的探讨rhIL-1α和rhTNF-α对人成纤维样滑膜细胞(FLS)PGE2受体(EP2)及Gαs表达的影响及芍药苷(Pae)的作用。方法体外培养人FLS,使用不同浓度的rhIL-1α和rhTNF-α刺激人FLS,观察EP2及Gαs蛋白表达的情况,观察Pae对其的影响。采用免疫荧光标记法结合激光共聚焦显微镜分析技术检测人FLS的EP2表达,Western blot检测Gαs表达。结果 rhIL-1α(0.1、1、10μg/L)和rhTNF-α(0.2、2、20μg/L)明显降低人FLS EP2和Gαs表达,Pae(10-8、10-7、10-6、10-5mol/L)可上调人FLS的EP2和Gαs表达。结论 Pae恢复rhIL-1α和rhTNF-α刺激后EP2和Gαs的表达可能是其抑制滑膜细胞增殖和亢进分泌功能的分子机制之一。

机动车尾气诱发大鼠慢性阻塞性肺疾病并上调气道上皮细胞COX-2/PGE2/EP受体信号通路

目的:探究机动车尾气(MVE)长期暴露引起大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)发生时,气道上皮细胞中环加氧酶2(COX-2)/前列腺素E;(PGE;)/E-前列腺素类激素(EP)受体信号通路成员的表达变化。方法:(1)动物实验:健康雄性SD纯系大鼠(SPF级)16只,随机分为2组:MVE暴露组(n=8)和空白对照(CTL)组(n=8)。采用MVE暴露6个月的方法建立COPD大鼠模型。造模结束后,使用Buxco小动物有创肺功能仪检测大鼠肺功能;肺组织切片行HE染色并评估肺组织病理变化;ELISA法检测大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和PGE;的水平,评估大鼠肺部炎症情况;采用免疫荧光及Western blot法检测肺组织COX-2及EP受体蛋白水平;提取肺组织核蛋白,Western blot检测MVE对肺组织NF-κB核转位的影响。(2)细胞实验:采用MVE细颗粒物(PM2.5)标准品刺激人正常支气管上皮细胞BEAS-2B。ELISA法检测细胞培养液中PGE;、IL-6和IL-8的水平;Western blot检测细胞中COX-2及EP受体蛋白水平;收集细胞核蛋白,检测PM2.5对NF-κB核转位的影响。结果:(1)MVE长期暴露致大鼠出现类似COPD的症状,包括气道炎症、肺气肿及肺功能下降(P<0.05);(2)MVE长期暴露显著上调大鼠肺组织及气道上皮细胞COX-2和EP1/EP4受体表达(P<0.05),而对EP2/EP3受体表达无显著影响(P>0.05);(3)MVE PM2.5标准品长时间暴露导致BEAS-2B细胞COX-2、PGE;和EP1/EP4表达水平显著升高(P<0.05),但对EP2/EP3表达无显著影响(P>0.05);(4)PM2.5暴露诱导大鼠肺组织及BEAS-2B细胞中NF-κB活化增加(P<0.05)。结论:MVE诱导大鼠COPD发病过程中,气道上皮细胞COX-2-PGE;-EP1/4受体信号通路成员表达增加并伴随NF-κB信号通路的活化。

前列腺素E_2体外主要通过活化受体EP_4促进人CD34^+细胞增殖

【目的】明确介导前列腺素E2(PGE2)促进人CD34^+细胞增殖的具体受体亚型。【方法】收集2013年6月至2014年10月期间18例健康志愿者经G-CSF动员的外周血,采用免疫磁珠法分选人CD34^+细胞,并用流式细胞术鉴定其纯度;用q RT-PCR检测经PGE2作用后的人CD34^+细胞中PGE2四个亚受体(EP1~EP4)m RNA表达情况;根据处理方法不同,将人CD34^+细胞分为对照组、前列腺素E2(PGE2)组、前列腺素E2受体EP2激动剂(EP2A)组、EP2A^+前列腺素E2受体EP2拮抗剂(EP2AA)组、前列腺素E2受体EP4激动剂(EP4A)组及EP4A^+前列腺素E2受体EP4拮抗剂(EP4AA)组,每组3例,分别接受上述组药物处理,采用集落形成实验检测红系集落形成单位CFU-E、红系爆式集落形成单位BFU-E、粒系集落形成单位CFUG、单核系集落形成单位CFU-M、粒-单核系集落形成单位CFU-GM及粒、红、单核、巨核系集落形成单位CFU-GEMM集落形成情况;用流式细胞术检测细胞周期分布;用Real time-PCR检测CD34^+细胞内survivin-m RNA水平、Western blot检测胞浆内β-catenin和survivin蛋白表达情况。【结果】人CD34^+细胞可表达PGE2的四个亚受体,但主要表达受体EP2和EP4;PGE2作用后,EP2和EP4m RNA表达量较对照组明显升高,而EP1和EP3的m RNA表达变化不明显;EP4A可促进人CD34^+细胞各系造血集落形成;EP4A可促进人CD34^+细胞进入细胞周期,使G2/M期比例增加;EP4A可促进凋亡抑制蛋白survivin的m RNA和蛋白表达、β-catenin蛋白表达。【结论】前列腺素E2体外主要通过受体EP4促进人CD34^+细胞增殖。

足月妊娠临产前后子宫下段肌层FP、EP_2的表达

目的 研究前列腺素F2α受体(Prostaglandin F2α Receptor,FP)及前列腺素E2受体亚型-2(Prostaglandin E2 Receptor subtype-2,EP2)在足月妊娠临产前后子宫下段肌层组织中的表达变化,探讨PGF2α、PGE2在分娩发动中的作用机制,为临床有效地防治分娩发动异常所致的疾患提供理论基础。方法81例子宫下段肌层组织标本分别取自足月剖宫产术中,其中未临产组56例(妊娠37—38+6周16例,39—39+6周20例,40-40+6周20例),临产组25例(潜伏期12例,活跃期13例)。通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PER),半定量研究各组FP及EP2亚型的mRNA的表达。结果RT-PCR方法的研究表明FP的mRNA的表达在临产组高于未临产组(P=0.003),两组EP2的mRNA的表达量无差异(P=0.38);未临产组不同孕周组之间比较FP、EP2的mR-NA的表达,差异均无显著性(P值均>0.05)。结论足月妊娠37周后,临产的子宫下段肌层的PGF2α的受体FP的表达较未临产时增高,提示PGF2α受体FP的表达上升与分娩的发动有关,EP2的mRNA的表达变化与分娩的发动无明显的相关性。