酿酒酵母磷酸甘油酸激酶基因(PGK1)的分子克隆和特性研究

以大肠杆菌和酵母菌穿校质粒pCN60为载体,大肠杆菌C600或HB101为受体构建成酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)Hind Ⅲ基因文库。从基因文库中提取重组DNA转化酵母受体XSB44-35D(a,pgkl,leul,adel,trpl,gall),选出转化体Pgk1^+。琼脂糖凝胶电泳指出所插入的DNA片段长度为3.1kb。 PGK1 DNA片段插入的方向性是此基因的5'-侧翼区靠近pCN60的BamH Ⅰ位点,而3'-侧翼区接近Bgl Ⅱ位点。Cla Ⅰ,EcoRV,Kpn Ⅰ,Xba Ⅰ,Pst Ⅰ,Hind Ⅲ,BamH Ⅰ及Pvu Ⅰ等核酸内切酶制作的酶切图谱的结果表明,除报道的PGK酶切位点外,还发现一个新的Kpn Ⅰ及一个新的Cla Ⅰ位点。