ID1启动子的构建及其在不同细胞系中的表达

目的观察不同细胞系中ID1启动子活性的表达的不同。方法以大鼠的基因组DNA为模板克隆了长度为1742bp(-1765/+88)的大鼠ID1启动子序列,将其连接到带有luciferase报告基因的PGL3-basic载体上,构建PGL3-ID1启动子序列。测序正确后,用磷酸钙共沉淀法转染大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)、A549细胞、F10细胞、MEF细胞和MC3T3细胞。转染36h后,收取细胞应用荧光素酶报告基因系统检测PGL3-ID1报告基因的表达。结果构建成功的PGL3-ID1启动子在A549细胞、F10细胞、MSCs细胞、MEF细胞中的表达明显增高,尤以A549和F10的表达最为显著;在MC3T3细胞中表达不明显。结论 ID1启动子的活性与细胞的分化程度密切相关,可能对细胞的增殖和分化起了关键性的调控作用。