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pH值域和亮氨酸丰富重复蛋白质磷酸酶蛋白1与喉鳞癌转移的相关性及作用机制研究 被引量:2
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作者 肖林 饶晓花 +1 位作者 郑晶琼 顾衍 《中国卫生检验杂志》 CAS 2018年第14期1725-1728,1731,共5页
目的观察PHLPP1与喉鳞癌的相互作用,为寻找新的诊治靶点提供数据支撑。方法以80例喉鳞癌患者为研究对象,包括转移组30例和未转移组50例,采用免疫蛋白印记(WB)实验检测PHLPP1蛋白表达水平。并通过RNA干扰实验构建PHLPP1过表达和干扰重组... 目的观察PHLPP1与喉鳞癌的相互作用,为寻找新的诊治靶点提供数据支撑。方法以80例喉鳞癌患者为研究对象,包括转移组30例和未转移组50例,采用免疫蛋白印记(WB)实验检测PHLPP1蛋白表达水平。并通过RNA干扰实验构建PHLPP1过表达和干扰重组慢病毒载体,分别转染至HEP-2细胞共培养,观察细胞生长、迁移与侵袭能力,采用荧光定量PCR实验和WB实验测定细胞PHLPP1和P-AKT/AKT表达水平。结果转移组PHLPP1蛋白表达水平低于未转移组,未转移组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。PHLPP1过表达组细胞生长速率、迁移和侵袭数目低于对照组,而PHLPP1沉默组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。PHLPP1过表达组P-AKT/AKT mRNA与蛋白表达水平低于对照组,而PHLPP1沉默组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PHLPP1与喉鳞癌的发生与转移密切相关,可抑制喉鳞癌细胞的增殖与侵袭能力,且其作用可能与阻碍AKT磷酸化激活有关。 展开更多
关键词 ph丰富重复蛋白磷酸酶蛋白1 喉鳞癌 P-AKT/AKT
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下调PHLPP1表达通过激活PI3K/AKT/mTOR通路改善高糖诱导的人足细胞自噬抑制和凋亡促进作用 被引量:7
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作者 蔡根深 张晶 王汝朋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期8-15,共8页
目的研究富含亮氨酸重复序列的普列克底物蛋白同源结构域蛋白磷酸酶1(PHLPP1)在糖尿病肾病(DN)肾组织的表达及其对足细胞自噬、凋亡的影响并初步探究其相关作用机制。方法采用免疫组织化学检测DN肾组织及非糖尿病肾组织PHLPP1表达,免疫... 目的研究富含亮氨酸重复序列的普列克底物蛋白同源结构域蛋白磷酸酶1(PHLPP1)在糖尿病肾病(DN)肾组织的表达及其对足细胞自噬、凋亡的影响并初步探究其相关作用机制。方法采用免疫组织化学检测DN肾组织及非糖尿病肾组织PHLPP1表达,免疫荧光组织化学染色检测肾病蛋白(nephrin)、 PHLPP1的共表达以确定PHLPP1在足细胞的定位;在正常葡萄糖(NG)及高糖(HG)培养液中培养足细胞,实时荧光定量PCR检测细胞PHLPP1 mRNA表达。采用脂质体瞬时转染技术将靶向沉默PHLPP1的小干扰RNA(si-PHLPP1)转染入足细胞,实时定量PCR检测转染效率;按足细胞处理方式的不同将细胞分为NG组(正常葡萄糖浓度的培养液进行培养的足细胞)、 HG组(高糖培养液培养的足细胞)、 HG联合si-PHLPP1组(高糖培养液培养转染si-PHLPP1后的足细胞组)、羟氯喹(HCQ)处理的HG组(用自噬抑制剂HCQ与HG培养液联合处理的足细胞)。透射电镜观察各组足细胞中自噬小体的形成, Western blot法检测微管相关蛋白1轻涟3(LC3)、 P62、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化的mTOR(p-mTOR)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、蛋白激酶B (AKT)及磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白表达,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果 PHLPP1在DN患者肾组织中高表达,且主要表达于肾小球足细胞内。HG培养液能够促进足细胞中PHLPP1 mRNA表达,并具有时间依赖性;与NG组相比, HG组、 HG联合si-PHLPP1组及HG联合HCQ组的足细胞自噬水平、 PI3K蛋白表达与mTOR的磷酸化水平均显著减低,细胞凋亡率、 c-caspase-3蛋白表达水平均显著增加,但HG联合si-PHLPP1组细胞的AKT磷酸化水平明显升高,其余两组AKT磷酸化水平显著降低;与HG组相比, HG联合si-PHLPP1组细胞的凋亡率、c-caspase-3蛋白表达均明显降低,而自噬水平, PI3K蛋白表达与mTOR和AKT蛋白的磷酸化水平均显著增加, HG联合HCQ组细胞的自噬水平明显降低,凋亡率与c-caspase-3蛋白表达均显著增加,其他指标无明显变化。结论 PHLPP1在DN肾组织显著高表达,下调足细胞PHLPP1的表达通过激活PI3K/AKT/mTOR通路促进足细胞自噬水平,减少足细胞的凋亡。 展开更多
关键词 富含重复序列的普列克底物蛋白同源结构蛋白磷酸酶1(phLPP1) 磷脂酰肌醇3激酶(PI3K) 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) 蛋白激酶B(AKT) 足细胞 自噬
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FKBP51·PHLPP·Akt信号模块对大鼠脑缺血/再灌注后Akt磷酸化及海马神经元损伤的影响 被引量:2
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作者 魏秀娥 张风玉 +2 位作者 王凯 张清秀 荣良群 《中华行为医学与脑科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期15-18,共4页
目的探讨FKBP51·PHLPP·Akt信号模块对大鼠脑缺血/再灌注(I/R)后Akt磷酸化及海马CAl区迟发性神经元损伤的影响。方法采用Pulsinelli-Brierley法制作全脑缺血损伤模型,每亚组6只动物,缺血前连续3d侧脑室注射PH结构域且富... 目的探讨FKBP51·PHLPP·Akt信号模块对大鼠脑缺血/再灌注(I/R)后Akt磷酸化及海马CAl区迟发性神经元损伤的影响。方法采用Pulsinelli-Brierley法制作全脑缺血损伤模型,每亚组6只动物,缺血前连续3d侧脑室注射PH结构域且富含亮氨酸重复基序的丝/苏氨酸蛋白磷酸酶2(PHdo.mainand Leucinerichrepeat Protein Phosphatases,PHLPP2)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)后缺血15rain,再灌注6h,应用免疫共沉淀及免疫印记分别检测PHLPP2、FK506连接蛋白5(FK506bindingprotein5,FKBP51)和蛋白激酶B(ProteinkinaseB,Akt)三者两两结合、检测Akt及其磷酸化的表达情况。再灌注5d,断头取脑,石蜡切片,苏木精一伊红染色,图像分析测定单位面积内染色细胞面积总和。I/R+ASODN组分别与I/R组及I/R+错义寡核苷酸(missense0ligodeoxynucleotides,MSODN)组比较,进行统计学分析。结果单因素方差分析结果显示:与I/R+PHLPP2MSODN组(1.24+0.24)比较,I/R+PHLPP2ASODN组(1.06±0.01)PHLPP2与Akt间的两两结合水平明显受到抑制(P〈0.05);与I/R+PHLPP2MSODN组(1.68±0.11)比较,I/R+PHLPP2ASODN组(1.04±0.13)FKBP51与Akt间的两两结合水平明显受到抑制(P〈0.05);与I/R+PHLPP2MSODN组(0.58±0.01)比较,I/R+PHLPP2ASODN组(0.76±0.02),P-Akt表达水平明显增加(P〈0.05),而Akt总蛋白表达无明显变化(P〉0.05);I/R5d+PHLPP2ASODN组[(88-3±2.7)个]与I/R+PHLPP2MSODN组[(20.1±2.5)个]比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论FKBP51·PHLPP·Akt模块可能通过Akt信号通路参与脑缺血再灌注损伤,促进海马CAl区神经元的迟发性损伤。 展开更多
关键词 全脑缺血 ph结构富含重复基序的丝 蛋白磷酸酶2 FK506连接 蛋白5 蛋白激酶B
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LRCH1维持狼疮肾炎模型小鼠调节性T细胞的功能
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作者 覃智慧 谭德敏 +1 位作者 王旺珍 张瑶 《基础医学与临床》 2022年第3期441-447,共7页
目的探讨富含亮氨酸的重复序列和钙调理蛋白同源域1(LRCH1)在狼疮肾炎模型小鼠调节性T细胞(Tregs)中的表达和功能。方法6月龄C57BL/6小鼠和MRL/lpr小鼠,用流式细胞仪分选脾脏和肾脏内的CD45^(+)CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low) Tregs,RT-qPC... 目的探讨富含亮氨酸的重复序列和钙调理蛋白同源域1(LRCH1)在狼疮肾炎模型小鼠调节性T细胞(Tregs)中的表达和功能。方法6月龄C57BL/6小鼠和MRL/lpr小鼠,用流式细胞仪分选脾脏和肾脏内的CD45^(+)CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low) Tregs,RT-qPCR检测Tregs LRCH1 mRNA水平。过继输注外源性Tregs至C57BL/6小鼠和MRL/lpr小鼠体内,RT-qPCR检测受者小鼠脾脏和肾脏内外源性Tregs LRCH1、IL-10和TGF-β的表达。用siRNA转染Tregs干扰Lrch1的表达。然后,用流式细胞仪检测Tregs对传统T细胞增殖的抑制功能;以免疫印迹法检测IL-2信号途径的活化。结果与野生型小鼠相比,MRL/lpr小鼠肾脏内的Tregs的LRCH1 mRNA增高4.13倍(P<0.05)。过继输注实验显示,狼疮肾炎微环境诱导Treg细胞的LRCH1表达升高1.98倍(P<0.05),IL-10和TGF-β的表达升高13.83和3.58倍(P<0.05)。Lrch1沉默使IL-2刺激下的p-STAT5降低约50%(P<0.05),导致IL-2信号转导受抑制,Foxp3表达下降,削弱了Tregs对传统T细胞增殖的抑制效应。结论LRCH1对狼疮肾炎模型小鼠浸润性Tregs的免疫抑制功能有正调控作用。 展开更多
关键词 狼疮肾炎 免疫抑制 调节性T细胞 富含重复序列和钙调理蛋白同源1(LRCH1)
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miR-190-5p靶向抑制PHLPP1的表达促进肺腺癌A549细胞增殖和转移
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作者 黄小琴 贾玉芳 +4 位作者 莫婷 余华军 张召 廖卫平 张海涛 《生命的化学》 CAS 2023年第9期1445-1455,共11页
miR-190-5p是小分子非编码RNA,参与调控肺腺癌细胞的增殖和转移。对miR-190-5p调控肺腺癌细胞的增殖和转移的机制深入研究会帮助了解到肺腺癌的发生机制和探究潜在的药物干预靶点。本文研究了miR-190-5p对肺腺癌A549细胞的增殖和转移的... miR-190-5p是小分子非编码RNA,参与调控肺腺癌细胞的增殖和转移。对miR-190-5p调控肺腺癌细胞的增殖和转移的机制深入研究会帮助了解到肺腺癌的发生机制和探究潜在的药物干预靶点。本文研究了miR-190-5p对肺腺癌A549细胞的增殖和转移的影响,解释了miR-190-5p促进肺腺癌生长的机制;通过感染miR-190-5p的慢病毒表达系统,克隆了稳定过表达miR-190-5p的肺腺癌A549细胞系;通过生物信息学方法和荧光素酶报告实验确认了miR-190-5p的靶基因。结果发现,稳定过度表达的miR-190-5p能促进A549细胞的增殖和转移;确定了miR-190-5p的靶点是PH域富含亮氨酸重复的蛋白磷酸酶1(Leucine-rich repeat-rich protein phosphatase 1 in the PH domain,PHLPP1),miR-190-5p降低PHLPP1蛋白水平;稳定表达的miR-190-5p增加了A549细胞中E盒结合锌指蛋白1(E box-binding zinc finger protein1,TCF8/ZEB1)、锌指转录因子(Zinc finger transcription factor,Snail)、具有凝血酶原基序的解体蛋白和金属蛋白酶1(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 1,ADAMTS1)的表达和蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)在Ser473的磷酸化,而过表达PHLPP1削弱了miR-190-5p的功能,降低了miR-190-5p促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力;miR-190-5p通过抑制PHLPP1的表达而增强了A549细胞的增殖和转移。这表明,miR-190-5p可能可以作为肺腺癌治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 miR-190-5p 肺癌 ph域富含亮氨酸重复的蛋白磷酸酶1 增殖 转移
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溃疡性结肠炎小鼠血清miR-23a-3p和miR-27a-3p的表达水平及其作用的研究 被引量:6
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作者 陈巍 韩峥 +2 位作者 邹艳丽 黄莎莎 田霞 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1069-1074,共6页
目的·探究miR-23a-3p和miR-27a-3p在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠血清中的表达及其可能的作用机制。方法·将20只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和模型组,每组10只。模型组小鼠采用含有5%硫酸葡聚糖钠(dextran sul... 目的·探究miR-23a-3p和miR-27a-3p在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠血清中的表达及其可能的作用机制。方法·将20只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和模型组,每组10只。模型组小鼠采用含有5%硫酸葡聚糖钠(dextran sulfate sodium,DSS)的饮用水诱导7 d,诱导期间观察小鼠一般情况、粪便形态以及隐血状况;7 d后,采集小鼠全血和结肠组织,测量结肠长度并称取湿重。qRT-PCR检测血清中miR-23a-3p和miR-27a-3p的表达,Western blotting检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor γ,coactivator 1α,PPARGC1A)、PH域富含亮氨酸重复蛋白磷酸酶2(PH domain leucine-rich repeat protein phosphatase,PHLPP2)、B淋巴细胞瘤2蛋白(B-cell lymphoma-2,BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,BAX)、细胞色素C(cytochrome c,CYT-C)和胱天蛋白酶3剪切体(cleaved cysteine-containing aspartate-specific proteases,cleaved-caspase-3)蛋白表达。结果·DSS诱导后,模型组小鼠出现精神萎靡、体质量减轻、腹泻、肉眼血便等症状,结肠长度缩短、湿重减轻(均P<0.05),小鼠UC模型构建成功。与对照组比较,模型组小鼠血清中miR-23a-3p和miR-27a-3p表达明显下调(均P<0.05),结肠组织中PPARGC1A、PHLPP2、BAX、CYT-C和cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高(均P<0.05),而BCL-2表达显著降低(P<0.05)。结论·miR-23a-3p和miR-27a-3p在UC小鼠血清中呈低表达水平,可能通过介导结肠组织中PPARGC1A和PHLPP2表达上调,触发线粒体途径诱导细胞凋亡,从而参与了UC的发生/发展。 展开更多
关键词 溃疡性结肠炎 疾病活动指数 微小RNA 过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α ph富含重复蛋白磷酸酶2 线粒体途径 细胞凋亡
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miR-452靶向PHLPP1抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭 被引量:4
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作者 黄仲根 徐波 沈飞 《中国临床研究》 CAS 2019年第3期340-345,共6页
目的探讨微小核糖核酸(micro RNA,miR)-452靶向PH结构域富含亮氨酸重复序列的蛋白磷酸酶1(PHLPP1)抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的作用。方法选取142例结直肠癌组织及癌旁组织。体外培养结直肠癌细胞株SW480细胞(SW480癌细胞组),... 目的探讨微小核糖核酸(micro RNA,miR)-452靶向PH结构域富含亮氨酸重复序列的蛋白磷酸酶1(PHLPP1)抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的作用。方法选取142例结直肠癌组织及癌旁组织。体外培养结直肠癌细胞株SW480细胞(SW480癌细胞组),并以miR-452模拟物(miR-452模拟物组)、miR-452抑制剂(miR-452抑制剂组)转染SW480细胞。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力、癌细胞单克隆形成数目。流式细胞术检测凋亡率及细胞周期,Transwell细胞迁移实验检测穿膜细胞数,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-452-5、PHLPP1 mRNA表达水平,酶联免疫吸附法测定培养液中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、血管内皮生长因子(VEGF)在培养液中水平。结果结直肠癌组miR-452-5p相对表达水平(1.25±0.65)低于癌旁组(3.76±0.43,t=17.04,P<0.01)。依miR-452模拟物组→SW480癌细胞组→miR-452 inhibitor组之序,癌细胞单克隆形成数目、穿膜数(P<0.01)升高,细胞凋亡率、G1期比例降低(P<0.01);miR-452-5p、PHLPP1 mRNA表达水平降低(P<0.01),MMP-9、Cyclin D1、VEGF蛋白表达水平升高(P<0.01)。miR-452与PHLPP1表达水平呈明显正相关(P<0.01),与MMP-9、Cyclin D1、VEGF表达水平分别呈负相关(P<0.01)。结论 miR-452通过靶向降低PHLPP1的表达而抑制结直肠癌细胞增殖、迁移浸润,其机制与miR-452诱导结直肠癌细胞低表达MMP-9、Cyclin D1、VEGF有关。 展开更多
关键词 微小核糖核A-452 ph结构富含重复序列的蛋白磷酸酶1 结直肠癌细胞 增殖 迁移 侵袭
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miR-25-3p和PHLPP2在肺腺癌中的表达及其与预后的相关性分析 被引量:4
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作者 张卫强 赵京 +3 位作者 刘克强 裴迎新 谭健 马静波 《重庆医学》 CAS 2020年第23期3936-3940,共5页
目的检测miR-25-3p与PH结构域和富含亮氨酸的重复蛋白磷酸酶2(PHLPP2)在肺腺癌组织中的表达情况,探讨二者与肺腺癌临床病理参数及预后的相关性。方法选择2014年3月至2016年11月在该院手术治疗的肺腺癌患者90例,采用实时荧光定量PCR(qRT-... 目的检测miR-25-3p与PH结构域和富含亮氨酸的重复蛋白磷酸酶2(PHLPP2)在肺腺癌组织中的表达情况,探讨二者与肺腺癌临床病理参数及预后的相关性。方法选择2014年3月至2016年11月在该院手术治疗的肺腺癌患者90例,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测研究对象肺腺癌组织与癌旁组织中miR-25-3p和PHLPP2 mRNA表达水平,分析miR-25-3p mRNA和PHLPP2表达与肺腺癌患者预后的关系。结果miR-25-3p mRNA在肺腺癌组织中表达水平高于癌旁组织(P<0.05),PHLPP2 mRNA在肺腺癌组织中表达水平低于癌旁组织(P<0.05);miR-25-3p mRNA和PHLPP2表达水平与肺腺癌分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05);miR-25-3p mRNA高表达组患者的3年累积生存率明显低于miR-25-3p mRNA低表达组,PHLPP2高表达组患者的3年累积生存率明显高于PHLPP2低表达组(P<0.05)。Cox回归模型分析显示,淋巴结转移、miR-25-3p mRNA高表达、PHLPP2低表达是影响肺腺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论在肺腺癌组织中miR-25-3p mRNA高表达、PHLPP2低表达与患者生存情况有关,可能作为肺腺癌患者潜在的预后标志物。 展开更多
关键词 肺肿瘤 腺癌 微RNA-25-3p ph结构富含重复序列的蛋白磷酸酶 预后 危险因素
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微小RNA-224对乳腺癌锁骨上淋巴结转移的影响及其作用机制 被引量:4
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作者 杜新峰 张浩 +6 位作者 刘平贤 王征 翟晓建 陆佳团 高洁 宋春峰 郭满 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2021年第1期144-147,共4页
目的探讨微小RNA(miR)-224对乳腺癌锁骨上淋巴结转移的影响及其作用机制。方法选择2018年6月至2019年6月南阳市中心医院收治的45例锁骨上淋巴结转移的乳腺癌和45例无淋巴结转移的乳腺癌作为研究对象。采用转录组织化学方法分析淋巴结转... 目的探讨微小RNA(miR)-224对乳腺癌锁骨上淋巴结转移的影响及其作用机制。方法选择2018年6月至2019年6月南阳市中心医院收治的45例锁骨上淋巴结转移的乳腺癌和45例无淋巴结转移的乳腺癌作为研究对象。采用转录组织化学方法分析淋巴结转移和无淋巴结转移癌组织中差异表达的miRNA。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析差异表达的miRNA(miR-224);采用慢病毒介导miRNA阴性对照和miR-224过表达在人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)乳腺癌细胞建立对照细胞系(对照组)和miR-224过表达细胞系(miR-224组)。将对照组和miR-224组细胞接种至裸鼠腋下,并于30 d后处死,解剖分析锁骨上淋巴结转移;生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-224靶基因,蛋白质印迹法(Western blot)分析临床样本和细胞系miRNA靶蛋白(PHLPP)1表达水平,组间比较采用t检验。结果转录组化学结果显示,淋巴结转移乳腺癌组织miR-224表达水平(5.08±0.69)明显高于未淋巴结转移乳腺癌组织(2.10±0.69),差异有统计学意义(t=3.109,P<0.05)。荧光定量PCR结果验证显示,淋巴结转移乳腺癌组织miR-224表达水平(2.98±0.41)高于无淋巴结转移乳腺癌组织miR-224表达水平(1.20±0.31),差异有统计学意义(t=2.839,P<0.05)。miR-224组细胞侵袭数量[(119.49±9.72)个]高于对照组细胞侵袭数量[(69.39±6.09)个],差异有统计学意义(t=4.091,P<0.05)。miR-224组细胞接种移植瘤30 d后淋巴结转移病灶数[(25.98±3.12)个]高于对照组细胞接种移植瘤30 d后淋巴结转移病灶数[(10.54±2.39)个],差异有统计学意义(t=3.001,P<0.05)。PHLPP1是miR-224靶基因。淋巴结转移乳腺癌组织中PHLPP1蛋白表达水平(0.36±0.12)低于未淋巴结转移乳腺癌组织中PHLPP1蛋白表达水平(0.94±0.16),差异有统计学意义(t=2.816,P<0.05)。miR-224组细胞PHLPP1蛋白表达水平(0.50±0.12)低于对照组细胞PHLPP1蛋白表达水平(1.04±0.18),差异有统计学意义(t=2.212,P<0.05)。结论miR-224在淋巴结转移的乳腺癌中呈高表达,其可能机制为通过调节PHLPP1蛋白表达参与了乳腺癌的侵袭和转移。 展开更多
关键词 微小RNA 乳腺癌 ph结构富含重复基序的丝/苏蛋白磷酸酶1 淋巴结转移 转移
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