反相高效液相色谱双梯度洗脱分离肽混合物及质谱分析

复杂肽段混合物的有效分离是高覆盖率地鉴定蛋白质混合物的前提。"鸟枪法"(Shotgun)蛋白质组学研究策略通常采用蛋白酶切、二维液相色谱-串联质谱分析肽段混合物从而鉴定蛋白质,其中高效率地分离肽段混合物是关键步骤之一。本文通过pH梯度结合有机溶剂梯度的反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行一维液相色谱分离,按等时间间隔收集馏分并将一个梯度的前段的一个馏分与后段一个馏分混合,然后进行纳升级液相色谱-质谱联用(nanoRPLC-MS/MS)分析。将该方法应用于酵母蛋白质的分离和鉴定,实验结果为:与常规的强阳离子色谱-反相液相色谱-质谱分离鉴定方法相比,采用pH梯度结合有机相梯度的RP-HPLC-RPLC-MS分离鉴定方法多鉴定到567个酵母蛋白质(簇,含有3 035个唯一肽段);其中鉴定到肽段的pI分布范围为3.42～12.01,相对分子质量范围为587.67～3 499.79;蛋白质的pI分布范围为3.82～12.19,相对分子质量范围为3 446.55～432 905。该结果表明这种方法在复杂体系蛋白质组分离鉴定中具有明显的优势,在蛋白质组学研究中有较好的应用前景。

利用HLA-DRβ1亚型同源多肽筛选类风湿关节炎相关抗原的研究

目的 :筛选与类风湿关节炎易感基因HLA DRβ1亚型同源多肽结合的抗原性蛋白。方法 :利用HLA DRβ1亚型同源多肽亲和层析柱结合类风湿关节炎患者B细胞可溶性蛋白 ,并以pH梯度洗脱获取HLA DRβ1同源多肽结合蛋白。 结果 :类风湿关节炎易感基因HLA DRβ1亚型同源多肽可高亲和力结合II型胶原、热休克蛋白 90和组蛋白等 5种抗原蛋白。 结论 :II型胶原及热休克蛋白 90可能通过与HLA DRβ1分子形成二聚体复合物参与类风湿关节炎的发病。