微小RNA-195通过靶向抑制PH结构域富亮氨酸重复蛋白磷酸酶2表达参与香烟烟雾诱导急性肺损伤机制研究

目的:探究miR-195通过靶向抑制PH结构域富亮氨酸重复蛋白磷酸酶2(PHLPP2)表达参与香烟烟雾诱导急性肺损伤的机制。方法:选择90只健康小鼠,均分为A、B、C三组,使用香烟烟雾暴露建立小鼠急性肺损伤模型,A组为正常对照组,B组为低剂量干预组,C组为高剂量干预组,干预后检测三组小鼠肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-8(IL-8)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平,对比三组小鼠肺泡灌洗液中白细胞、中性粒细胞计数,对比三组小鼠肺组织中髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽(GSH)水平,最后检测三组小鼠肺组织中miR-195及PHLPP2蛋白表达量。结果:①肺泡灌洗液中TNF-α、IL-8及MMP-9水平C组>B组>A组,组间对比差异具有统计学意义(均P<0.05);②肺泡灌洗液中白细胞、中性粒细胞计数C组>B组>A组,组间对比差异具有统计学意义(均P<0.05);③肺泡灌洗液中MPO、SOD、GSH水平C组>B组>A组,组间对比差异具有统计学意义(均P<0.05);④肺组织中miR-195表达C组>B组>A组,PHLPP2蛋白表达C组<B组<A组,组间对比差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:香烟烟雾能够诱导小鼠肺组织出现炎性改变,其机制可能与miR-195过表达并抑制PHLPP2蛋白表达有关。

中医药干预核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(NLRP3)炎症小体防治类风湿性关节炎的研究进展

类风湿性关节炎(RA)是一种慢性、全身性自身免疫性疾病,以软骨损伤、滑膜炎症等为主要病理特征。核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(NLRP3)炎症小体是一种细胞内感应蛋白复合物,可感知内源性危险信号并鉴别外来病原体,从而释放白细胞介素-1β、白细胞介素-18等促炎因子,介导细胞凋亡。研究表明,NLRP3炎症小体可以诱发炎症级联反应,加速软骨破坏,与RA密切相关。中医药在防治RA方面已取得一定成果。多项研究证实,中医药可靶向干预NLRP3炎症小体介导RA的病变过程,但尚未有系统性的相关论述。该文论述NLRP3炎症小体参与RA的机制,总结归纳近几年中医药干预NLRP3炎症小体防治RA的研究进展,以期为RA靶向药物的研发与应用提供一定借鉴。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)增强顺铂诱导的人垂体瘤细胞凋亡

目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白结构域1(LRIG1)在人垂体瘤组织中表达情况,并观察过表达LRIG1后对顺铂(DDP)诱导的垂体瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法采用免疫组织化学染色法检测45例垂体瘤患者肿瘤组织及瘤旁组织中的LRIG1表达,分析LRIG1阳性表达与患者临床病理指标的相关性。选取原代分离培养的人垂体瘤细胞,采用脂质体介导的基因转染技术将LRIG1基因过表达质粒p EGFP-N1-LRIG1转染进细胞中,筛选LRIG1过表达的细胞,同时选取转染空质粒p EGFP-N1的细胞作为对照组。两组细胞均经20μg/m L DDP诱导48 h,流式细胞术检测细胞凋亡情况,平板克隆实验检测细胞的增殖能力,Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白BAX、胱天蛋白酶3(caspase-3)和Bcl2的相对表达量。结果垂体瘤患者肿瘤组织中LRIG1阳性率显著低于瘤旁组织,且LRIG1在侵袭性肿瘤表达显著降低。与对照组相比,过表达LRIG1后,DDP诱导的细胞凋亡率显著增加、细胞增殖显著降低、BAX、caspase-3的水平显著增加,而Bcl2水平显著降低。结论过表达LRIG1增加DDP诱导的人垂体瘤细胞凋亡并抑制其增殖。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1、E-Cadherin和EGFR在胃癌中的表达和临床意义

目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)、上皮钙黏蛋白(E-Cadherin)和表皮生长因子受体(EGFR)在胃癌中的表达和及其与临床病理特征的相关性。方法选取50例胃癌患者作为研究对象,并选取正常胃黏膜组织50例作为对照。用免疫组化方法检测两组患者卵巢组织中的LRIG1、E-Cadherin和EGFR的表达,分析LRIG1、E-Cadherin和EGFR的阳性表达率在胃癌患者不同临床病理特征中的差异。采用spearson秩相关分析LRIG1,E-Cadherin和EGFR的阳性表达率的相关性。结果胃癌组的LRIG1、E-Cadherin的阳性表达率显著低于正常胃黏膜组,胃癌组的EGFR的阳性表达率显著高于正常胃黏膜组。胃癌中LRIG1、E-Cadherin和EGFR阳性表达率与临床分期、病理分级和淋巴结转移有关(P<0.05),而与年龄、组织学类型无关(P>0.05)。LRIG1、E-Cadherin和EGFR在胃癌患者中的阳性表达率具有相关性,共同调控参与胃癌的发生和发展。结论 LRIG1、E-Cadherin在胃癌中低表达和EGFR在胃癌中高表达,与胃癌的进展和转移相关。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1基因特异性RNA干扰表达载体的构建、鉴定和稳定株筛选(英文)

背景:有研究表明富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains1,LRIG1)基因在神经胶质瘤细胞中呈低表达,LRIG1基因过表达后对神经胶质瘤细胞的LRIG1mRNA和蛋白表达均明显增强和抑制其生物学行为,但却很少有研究从阻断LRIG1基因的表达的角度进行论证。目的:构建针对LRIG1基因的特异性RNA干扰质粒,稳定转染人脑胶质瘤GL15细胞系,观察其对目的基因LRIG1表达的影响。方法:根据GenBank提供的LRIG1基因序列设计2条RNA干扰序列,命名为LRIG1-shRNA1和LRIG1-shRNA2,并设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为pGenesil2-negativeshRNA。合成各自的寡核苷酸链,退火后与pGenesil2质粒载体连接,转化扩增后测定序列。用不同浓度的G418作用于GL15细胞确定G418对GL15细胞的筛选浓度。将3种重组表达载体转染GL15细胞,G418筛选后挑单克隆并扩增获得稳定株。Western blot检测LRIG1蛋白的表达。结果与结论:构建的重组pGenesil2-LRIG1-shRNA质粒经限制性酶切及DNA测序分析证明其序列插入正确。转染pGenesil2-LRIG1-shRNA1(LRIG11)细胞和pGenesil2-LRIG1-shRNA2(LRIG12)细胞LRIG1蛋白表达水平较阴性对照组pGenesil2-negativeshRNA分别下降47.9%(P<0.01)和32.8%(P>0.05)。结果证实,实验成功构建了针对LRIG1基因的特异性shRNA表达载体pGenesil2-LRIG1-shRNA1,其转染GL15细胞后可抑制LRIG1的表达。

亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域1、存活蛋白在胶质瘤中的表达及对患者远期预后的影响

目的探讨亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)、存活蛋白(survivin)在胶质瘤中的表达及对患者远期预后的影响。方法选取77例胶质瘤患者,取其胶质瘤组织及相应的癌旁组织,采用免疫组化法检测LRIG1、survivin的表达情况。随访3年,记录胶质瘤患者的预后情况,胶质瘤患者预后的影响因素采用多因素Logistic回归分析。结果胶质瘤组织中LRIG1阳性表达率明显低于癌旁组织,survivin阳性表达率明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。随访3年,77例胶质瘤患者中死亡25例,生存52例。预后死亡胶质瘤患者胶质瘤组织中LRIG1阳性表达率低于生存患者,survivin阳性表达率高于生存患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Logistic回归分析结果显示,肿瘤直径≥5 cm、高级别胶质瘤、LRIG1阴性表达、survivin阳性表达均是胶质瘤患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论胶质瘤组织中LRIG1呈阴性表达,survivin呈阳性表达,且二者均是胶质瘤患者预后的独立危险因素,临床可通过检测这两种指标为胶质瘤患者的远期预后评估提供参考。

富含亮氨酸重复序列蛋白1通过上调哺乳动物雷帕霉素靶蛋白表达促进乳腺癌细胞迁移和侵袭

目的:探究富含亮氨酸重复序列蛋白1(leucine-rich repeat protein 1,LRR1)在乳腺癌细胞中的表达及对其生物学功能的影响。方法:培养人乳腺癌MDA-MB-231、HCC70细胞株和正常乳腺上皮MCF-10A细胞;采用蛋白免疫印迹法检测LRR1表达。将人乳腺癌MDA-MB-231、HCC70细胞株分为干扰对照组、LRR1干扰组、LRR1过表达组和空载体对照组,分别转染LRR1对照、干扰、过表达、空载体序列;采用Transwell实验检测乳腺癌细胞迁移和侵袭能力;采用蛋白免疫印迹法检测细胞中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m-TOR)表达。结果:与正常人乳腺上皮MCF-10A细胞相比,乳腺癌MDA-MB-231和HCC70细胞中LRR1表达水平显著增加(P均<0.01)。在人乳腺癌MDA-MB-231、HCC70细胞中,与干扰对照组相比,LRR1干扰组细胞迁移和侵袭数显著降低(P均<0.01),m-TOR表达水平明显降低(P<0.01);与空载体对照组相比,过表达LRR1组细胞迁移和侵袭数显著增加(P均<0.01),m-TOR蛋白表达水平明显增加(P均<0.01)。结论:LRR1在乳腺癌细胞中呈高表达,并可促进其迁移和侵袭。

富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域基因1过表达对膀胱癌细胞免疫相关基因的影响

目的利用基因表达谱芯片技术筛选过表达富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域基因1（LRIG1）的膀胱癌细胞与对照组膀胱癌细胞间差异表达的免疫相关基因，探讨LRIG1对膀胱癌细胞免疫功能影响的机制。方法分别提取转染LRIG1基因的膀胱癌细胞BIU87-LRIG1和未转染LRIG1基因的膀胱癌细胞BIU87的总核糖核酸（RNA），反转录成cDNA并标记后，同22K人类基因表达谱芯片杂交后筛选出与免疫相关的差异表达基因，并进一步使用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）验证。结果在21522条基因中，两组细胞间差异表达的免疫相关基因有9条，其中BIU87-LRIG1细胞中上调基因4条，下调基因5条。RT-PCR提示BIU87-LRIG1组的程序化死亡基因5（PDCD5）表达水平（1．22±0．04）较BIU87组（0．43±0．06）明显增高。结论使用基因芯片技术筛选出了LRIG1过表达可影响膀胱癌免疫功能的9种相关基因。

富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1基因过表达增强膀胱癌T24细胞对顺铂敏感性的实验研究

目的 探讨富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1 （leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains-1,LRIG1）基因过表达对膀胱癌T24细胞顺铂（cis-diaminodichloroplatinum,CDDP）敏感性的影响及其机制.方法 2012年12月至2014年2月选取膀胱癌T24细胞株,将建立并鉴定的过表达LRIG1基因的T24细胞分为3组：实验组,转染Ad-Surp-LRIGl;对照组,转染Adeno-SP-EGFP;空白组,未转染.将3组细胞分别加入CDDP,构建为CDDP/Ad-Surp-LRIG1组、CDDP/Adeno-SP-EGFP组、CDDP组,与未加入CDDP的空白组共4组进行诱导凋亡实验.采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后T24细胞中LRIG1和表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的表达水平.蛋白质印迹法检测CDDP对T24细胞的总EGFR和核磷酸化EGFR表达的影响.采用CCK-8法检测各组细胞对CDDP的敏感性.流式细胞学检测各组细胞的凋亡率.结果 实验组、对照组和空白组的LRIG1 mRNA和EGFR mRNA的表达量分别为2.79±0.15和0.65±0.05、0.76±0.09和1.98±0.07、0.66±0.05和2.05±0.04,LRIG1蛋白和EGFR蛋白分别为1.98±0.12和0.92±0.05、0.88 ±0.07和2.51 ±0.07、1.00 ±0.08和2.42±0.09,实验组与对照组和空白组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）,对照组与空白组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.CDDP组、CDDP/Adeno-SP-EGFP组和CDDP/Ad-Surp-LRIGl组的半数抑制浓度IC50值分别为（30.96±0.57）、（31.55 ±0.48）和（14.09±0.31） μg/ml,CDDP组与CDDP/Adeno-SP-EGFP组和CDDP/Ad-Surp-LRIGl组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）,CDDP/Adeno-SP-EGFP组和CDDP/Ad-Surp-LRIGl组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.CDDP/Ad-Surp-LRIGl组的细胞凋亡率[（69.77±2.14）％]高于CDDP/Adeno-SP-EGFP组[（48.15±1.53）％]、CDDP组[（46.82±1.23）％]、空白组[（3.17±0.21）％],差异均有统计学意义（P＜0.05）,CDDP组和CDDP/Adeno-SP-EGFP组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.空白组、CDDP组、CDDP/Adeno-SP-EGFP组、CDDP/Ad-Surp-LRIGl组的总EGFR和核磷酸化EGFR的表达量分别为2.52±0.11和1.76±0.08、1.22±0.05和2.75±0.15、1.25±0.05和2.82±0.13、0.32 ±0.02和1.08±0.04,CDDP组与空白组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,CDDP/Adeno-SP-EGFP组与CDDP/Ad-Surp-LRIGl组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,CDDP组与CDDP/Adeno-SP-EGFP组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 LRIG1通过下调EGFR和核磷酸化EGFR的表达促进CDDP诱导的T24细胞凋亡,提高T24细胞对CDDP的敏感性.

pH值域和亮氨酸丰富重复蛋白质磷酸酶蛋白1与喉鳞癌转移的相关性及作用机制研究

目的观察PHLPP1与喉鳞癌的相互作用,为寻找新的诊治靶点提供数据支撑。方法以80例喉鳞癌患者为研究对象,包括转移组30例和未转移组50例,采用免疫蛋白印记(WB)实验检测PHLPP1蛋白表达水平。并通过RNA干扰实验构建PHLPP1过表达和干扰重组慢病毒载体,分别转染至HEP-2细胞共培养,观察细胞生长、迁移与侵袭能力,采用荧光定量PCR实验和WB实验测定细胞PHLPP1和P-AKT/AKT表达水平。结果转移组PHLPP1蛋白表达水平低于未转移组,未转移组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。PHLPP1过表达组细胞生长速率、迁移和侵袭数目低于对照组,而PHLPP1沉默组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。PHLPP1过表达组P-AKT/AKT mRNA与蛋白表达水平低于对照组,而PHLPP1沉默组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PHLPP1与喉鳞癌的发生与转移密切相关,可抑制喉鳞癌细胞的增殖与侵袭能力,且其作用可能与阻碍AKT磷酸化激活有关。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1在垂体瘤中的表达及其预后意义

目的 探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1（LRIGl）在垂体瘤中的表达及意义.方法 应用免疫组织化学链菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法检测74例垂体瘤、20例正常脑组织中LRIG1的表达,分析其表达与患者预后的关系.结果 LRIG1在正常脑组织中的阳性表达率为100.0％,明显高于垂体瘤中的表达（54.1％）,差异有统计学意义（P＜0.05）.同时,LRIG1在非侵袭性垂体瘤中的阳性表达率为66.7％,明显高于在侵袭性垂体瘤中的表达（20.0％）.Kaplan-Meier生存分析表明LRIG1及垂体瘤类型与患者的预后明显相关（P＜0.05）.Cox多因素生存分析表明LRIGI可作为患者预后评估的独立因素.结论 LRIG1参与了垂体瘤的发生及发展,低表达患者预后较差.

胃腺癌组织中LRIG1蛋白的表达及意义

目的探讨富亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)在人体胃腺癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系。方法采用免疫组织化学En Vision二步法检测LRIG1蛋白在116例胃腺癌及其相应癌旁正常胃组织中的表达情况,并分析其表达与临床病理参数的关系。结果 LRIG1在胃腺癌组织中的阳性表达率(63.8%,74/116)低于癌旁正常胃组织(81.9%,95/116),差异具有统计学意义(P<0.05)。LRIG1蛋白的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期密切相关(P<0.05),而与患者年龄、性别及肿瘤大小无关(P>0.05)。结论 LRIG1在胃腺癌组织中的表达较相应癌旁正常胃组织低,而且随着肿瘤恶性程度的增加LRIG1蛋白的表达逐渐降低,可能作为抑癌基因参与了胃腺癌的发生、发展。

下调PHLPP1表达通过激活PI3K/AKT/mTOR通路改善高糖诱导的人足细胞自噬抑制和凋亡促进作用

目的研究富含亮氨酸重复序列的普列克底物蛋白同源结构域蛋白磷酸酶1(PHLPP1)在糖尿病肾病(DN)肾组织的表达及其对足细胞自噬、凋亡的影响并初步探究其相关作用机制。方法采用免疫组织化学检测DN肾组织及非糖尿病肾组织PHLPP1表达,免疫荧光组织化学染色检测肾病蛋白(nephrin)、 PHLPP1的共表达以确定PHLPP1在足细胞的定位;在正常葡萄糖(NG)及高糖(HG)培养液中培养足细胞,实时荧光定量PCR检测细胞PHLPP1 mRNA表达。采用脂质体瞬时转染技术将靶向沉默PHLPP1的小干扰RNA(si-PHLPP1)转染入足细胞,实时定量PCR检测转染效率;按足细胞处理方式的不同将细胞分为NG组(正常葡萄糖浓度的培养液进行培养的足细胞)、 HG组(高糖培养液培养的足细胞)、 HG联合si-PHLPP1组(高糖培养液培养转染si-PHLPP1后的足细胞组)、羟氯喹(HCQ)处理的HG组(用自噬抑制剂HCQ与HG培养液联合处理的足细胞)。透射电镜观察各组足细胞中自噬小体的形成, Western blot法检测微管相关蛋白1轻涟3(LC3)、 P62、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化的mTOR(p-mTOR)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、蛋白激酶B (AKT)及磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白表达,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果 PHLPP1在DN患者肾组织中高表达,且主要表达于肾小球足细胞内。HG培养液能够促进足细胞中PHLPP1 mRNA表达,并具有时间依赖性;与NG组相比, HG组、 HG联合si-PHLPP1组及HG联合HCQ组的足细胞自噬水平、 PI3K蛋白表达与mTOR的磷酸化水平均显著减低,细胞凋亡率、 c-caspase-3蛋白表达水平均显著增加,但HG联合si-PHLPP1组细胞的AKT磷酸化水平明显升高,其余两组AKT磷酸化水平显著降低;与HG组相比, HG联合si-PHLPP1组细胞的凋亡率、c-caspase-3蛋白表达均明显降低,而自噬水平, PI3K蛋白表达与mTOR和AKT蛋白的磷酸化水平均显著增加, HG联合HCQ组细胞的自噬水平明显降低,凋亡率与c-caspase-3蛋白表达均显著增加,其他指标无明显变化。结论 PHLPP1在DN肾组织显著高表达,下调足细胞PHLPP1的表达通过激活PI3K/AKT/mTOR通路促进足细胞自噬水平,减少足细胞的凋亡。

上皮性卵巢癌组织中LRRC15、SUN2表达变化及其与患者预后的关系

目的探讨富含亮氨酸重复序列15(LRRC15)、SUN结构域蛋白2(SUN2)在上皮性卵巢癌(EOC)组织中的表达变化及其与患者预后的关系。方法选取102例EOC患者手术切除癌组织(观察组),以60例因卵巢良性囊肿行手术治疗的正常卵巢组织为对照组。采用免疫组化法检测癌及正常卵巢组织中LRRC15、SUN2表达。通过Spearman秩相关分析评估LRRC15与SUN2表达的相关性,采用Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归分析LRRC15、SUN2表达与EOC患者预后的关系。结果观察组LRRC15阳性率高于对照组,SUN2阳性率低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。观察组中LRRC15与SUN2表达呈负相关(r=-0.634,P<0.05)。LRRC15在EOC患者FIGO分期Ⅲ期、淋巴结转移中的阳性率高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移癌组织,SUN2在EOC患者FIGO分期Ⅲ期、淋巴结转移中的阳性率低于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移癌组织,差异有统计学意义(P均<0.05)。LRRC15阳性组EOC患者3年总生存率低于LRRC15阴性组,SUN2阴性组EOC患者3年总生存率低于SUN2阳性组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。FIGO分期Ⅲ期、病理分级Ⅲ级、淋巴结转移、LRRC15阳性是影响EOC患者预后的危险因素,SUN2阳性是保护因素(P均<0.05)。结论EOC患者癌组织中LRRC15表达升高、SUN2表达降低,LRRC15、SUN2表达与EOC肿瘤进展有关,检测二者水平有助于评估EOC患者预后。

长链非编码RNA CASC15对肝细胞癌增殖、侵袭和迁移的影响及作用机制

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)癌症易感性基因15(Cancer susceptibility candidate 15,CASC15)在肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中的分子调控机制。方法通过生物信息学方法预测目的基因表达,并分析目的基因表达与患者生存时间的关系;收集临床HCC患者肝癌组织和癌旁组织;CCK-8、Transwell和流式细胞术实验检测HCC细胞SMMC7721和Huh-7的增殖、侵袭、迁移以及凋亡;双荧光素酶实验检测miR-144-3p与CASC15和富含亮氨酸的重复序列蛋白1(Leucine rich repeat containing protein 1,LRRC1)的靶向关系;qRT-PCR和Western blot检测mRNA和蛋白表达情况;免疫荧光实验用于蛋白定位研究;回复实验验证CASC15/miR-144-3p/LRRC1对HCC进展的影响。体内实验验证CASC15对HCC进展的影响。结果TCGA数据库与qRT-PCR检测显示HCC组织和细胞中CASC15高表达、miR-144-3p低表达、LRRC1高表达(P<0.05)。增殖、侵袭、迁移的细胞功能实验结果表明在肿瘤发展中CASC15和LRRC1起到促进作用,miR-144-3p则是抑制作用,与凋亡实验结果一致(P<0.05)。细胞功能实验表明CASC15抑制miR-144-3p功能,miR-144-3p抑制LRRC1,CASC15与miR-144-3p结合,并导致LRRC1上调。回复实验结果表明CASC15通过抑制miR-144-3p促进LRRC1的表达从而促进HCC细胞增殖、侵袭和迁移并抑制细胞凋亡。结论CASC15可能通过调节miR-144-3p/LRRC1轴,从而促进HCC进展。

右美托咪定对大鼠坐骨神经阻滞及LRRC4/SDF-1/CXCR4信号通路的影响

目的:研究右美托咪定对大鼠坐骨神经阻滞及富含亮氨酸重复序列C4蛋白(LRRC4)/基质细胞衍生因子1(SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)信号通路的影响。方法:取60只Wistar大鼠构建坐骨神经慢性结扎损伤(CCI)模型,以随机数字表法分为5组:模型组、右美托咪定(3μg/kg)组、LRRC4 siRNA质粒组、空载质粒组、右美托咪定(3μg/kg)+LRRC4 siRNA质粒组;另选12只大鼠只暴露坐骨神经,不结扎,作为假手术组。大鼠以3μg/kg的右美托咪定和LRRC4 siRNA质粒分组经留置管鞘内给药干预后,检测大鼠疼痛症状,比较机械缩足阈值和热缩足潜伏期;检测大鼠坐骨神经阻滞持续时间,比较其运动和感觉阻滞持续时间;以试剂盒测定大鼠血清炎性因子前列腺素E_(2)(PGE_(2))、白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-6(IL-6)水平和脊髓组织氧化应激因子超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平;以实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验检测大鼠脊髓组织LRRC4、SDF-1及CXCR4 mRNA表达水平;以免疫印迹法检测大鼠脊髓组织LRRC4/SDF-1/CXCR4信号通路蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠机械缩足阈值、热缩足潜伏期、脊髓组织SOD、GSH-Px、LRRC4 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),血清PGE_(2)、IL-18和IL-6水平、脊髓组织MDA水平、SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与模型组、右美托咪定+LRRC4 siRNA质粒组分别比较,右美托咪定组大鼠机械缩足阈值、热缩足潜伏期、坐骨神经运动和感觉阻滞持续时间、脊髓组织SOD、GSH-Px、LRRC4 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05),血清PGE_(2)、IL-18和IL-6水平、脊髓组织MDA水平、SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05);LRRC4 siRNA质粒组大鼠机械缩足阈值、热缩足潜伏期、脊髓组织SOD、GSH-Px、LRRC4 mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05),血清PGE_(2)、IL-18和IL-6水平、脊髓组织MDA水平、SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05);空载质粒组大鼠各指标水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:右美托咪定可通过上调LRRC4表达,抑制SDF-1/CXCR4信号激活,从而增强坐骨神经阻滞,抵抗炎症和氧化应激反应,明显减轻CCI大鼠疼痛症状。

LRIG1过表达对顺铂诱导的胶质瘤细胞凋亡的影响及其机制

目的研究过表达富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(leucine-rich repeats and immunoglobulin-like do-mains-1,LRIG1)对顺铂(cisplatin,CDDP)诱导的胶质瘤细胞U251凋亡的影响及其机制。方法应用脂质体介导的基因转染技术将对照质粒(EGFP-N1)及LRIG1质粒(EGFP-N1-LRIG1)分别转染胶质瘤细胞系U251,设为对照组和LRIG1过表达组,用Real-time PCR检测转染后LRIG1表达水平;用AnnexinⅤ/7AAD双标流式细胞术检测细胞凋亡;用Western blot检测各目的蛋白表达水平。结果 LRIG1过表达组LRIG1mRNA及蛋白均较对照组明显增高;0、10、20μg/mL CDDP作用下,LRIG1过表达组细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.01);随着CDDP浓度增加,胶质瘤细胞U251磷酸化表皮生长因子受体(P-EGFR)表达增加;不同浓度CDDP作用下,LRIG1过表达组P-EGFR水平均较对照组明显降低,促凋亡蛋白Bax,Caspase-3表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低。结论 LRIG1通过下调P-EGFR水平而促进顺铂诱导的胶质瘤细胞凋亡,增强胶质瘤细胞对顺铂的敏感性。

白色念珠菌经组织蛋白酶B途径诱导小鼠腹腔巨噬细胞NLRP3炎性体表达

目的探讨含热蛋白结构域3富含亮氨酸重复序列的核苷酸结合寡聚化结构域(NLRP3)在白色念珠菌诱导的小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子产生中的作用及其激活途径。方法体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,将其分为空白对照组、CA-074Me组、白色念珠菌组、白色念珠菌+10-6mol·L-1CA-074Me组和白色念珠菌+10-5mol·L-1CA-074Me组。实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞内NLRP3 mRNA表达,Western blot检测细胞内溶酶体组织蛋白酶B(cathepsin B)和胱天蛋白酶-1(caspase-1)p20蛋白质水平,酶联免疫吸附试验测定各组细胞培养上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)水平。结果白色念珠菌组细胞内NLRP3 mRNA表达、cathepsin B和caspase-1 p20蛋白表达、细胞培养上清液中IL-1β水平均显著高于空白对照组(P<0.01)。加入10-5mol·L-1CA-074Me干预后,细胞内NLRP3mRNA表达、cathepsin B和caspase-1 p20蛋白的表达及细胞培养上清液中IL-1β水平与白色念珠菌组比较显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论白色念珠菌通过活化cathepsin B诱导巨噬细胞NLRP3的表达、caspase-1的活化和IL-1β的分泌。

FKBP51·PHLPP·Akt信号模块对大鼠脑缺血／再灌注后Akt磷酸化及海马神经元损伤的影响

目的探讨FKBP51·PHLPP·Akt信号模块对大鼠脑缺血／再灌注（I／R）后Akt磷酸化及海马CAl区迟发性神经元损伤的影响。方法采用Pulsinelli-Brierley法制作全脑缺血损伤模型，每亚组6只动物，缺血前连续3d侧脑室注射PH结构域且富含亮氨酸重复基序的丝／苏氨酸蛋白磷酸酶2（PHdo．mainand Leucinerichrepeat Protein Phosphatases，PHLPP2）反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotides，ASODN）后缺血15rain，再灌注6h，应用免疫共沉淀及免疫印记分别检测PHLPP2、FK506连接蛋白5（FK506bindingprotein5，FKBP51）和蛋白激酶B（ProteinkinaseB，Akt）三者两两结合、检测Akt及其磷酸化的表达情况。再灌注5d，断头取脑，石蜡切片，苏木精一伊红染色，图像分析测定单位面积内染色细胞面积总和。I／R＋ASODN组分别与I／R组及I／R＋错义寡核苷酸（missense0ligodeoxynucleotides，MSODN）组比较，进行统计学分析。结果单因素方差分析结果显示：与I／R＋PHLPP2MSODN组（1．24＋0．24）比较，I／R＋PHLPP2ASODN组（1．06±0．01）PHLPP2与Akt间的两两结合水平明显受到抑制（P〈0．05）；与I／R＋PHLPP2MSODN组（1．68±0．11）比较，I／R＋PHLPP2ASODN组（1．04±0．13）FKBP51与Akt间的两两结合水平明显受到抑制（P〈0．05）；与I／R＋PHLPP2MSODN组（0．58±0．01）比较，I／R＋PHLPP2ASODN组（0．76±0．02），P-Akt表达水平明显增加（P〈0．05），而Akt总蛋白表达无明显变化（P〉0．05）；I／R5d＋PHLPP2ASODN组[（88-3±2．7）个]与I／R＋PHLPP2MSODN组[（20．1±2．5）个]比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论FKBP51·PHLPP·Akt模块可能通过Akt信号通路参与脑缺血再灌注损伤，促进海马CAl区神经元的迟发性损伤。

LRIG1在卵巢浆液性囊腺癌细胞对依托泊苷敏感性中的作用研究

目的探讨亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域基因-1(LRIG1)在卵巢浆液性囊腺癌(SKOV3)细胞株中对依托泊苷敏感性的可能机制。方法噻唑蓝比色法(MMT)检测不同浓度VP16干预下48 h的SKOV3细胞组、siRNA LRIG1转染SKOV3细胞组、SKOV3/VP16细胞组和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞组的增殖。平板克隆检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测LRIG1mRNA表达。结果半抑制浓度(IC50)分别为62.90、115.49、156.50和195.42μg/L,siRNA LRIG1转染SKOV3、SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16的耐药指数分别为1.8、2.5和3.1。SKOV3、siRNA LRIG1转染SKOV3、SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞组的克隆率(F=39.338,P=0.000),细胞的LRIG1 mRNA(F=63.095,P=0.000)和凋亡细胞(F=230.046,P=0.000)明显不同,与SKOV3比较,siRNA LRIG1转染SKOV3、SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞的克隆率增加(t=0.026、0.0710和0.125,P=0.042、0.000和0.000),细胞的LRIG1 mRNA降低(t=0.130、0.525和0.825,均P=0.000),凋亡细胞减少(t=12.350、35.506和44.412,均P=0.000),与siRNA LRIG1转染SKOV3比较,SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞的克隆率增加(t=0.044和0.099,P=0.001和0.000),LRIG1 mRNA降低(t=0.395和0.695,均P=0.000),凋亡细胞减少(t=23.156和32063,均P<0.05),与SKOV3/VP16比较,siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞的克隆率增加(t=0.055,P=0.000),细胞的LRIG1 mRNA降低(t=0.300,P=0.000),凋亡细胞减少(t=8.906,P=0.000)。结论 LRIG1 mRNA影响SKOV3细胞对药物的敏感性,沉默LRIG1的耐药细胞可抑制SKOV3细胞凋亡。