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SOE-PCR法构建新型PHA嵌合酶研究
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作者 赵小慧 张卉妍 胡风庆 《辽宁大学学报(自然科学版)》 CAS 2021年第3期277-282,共6页
聚羟基脂肪酸酯(Polyhydroxyalkanonate,PHA)合酶是PHA合成过程中的关键酶,其活性和底物特异性决定PHA含量和单体组成.构建嵌合酶是改变PHA单体组成的一种有效方式.利用重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension,SOE-PCR)法,以... 聚羟基脂肪酸酯(Polyhydroxyalkanonate,PHA)合酶是PHA合成过程中的关键酶,其活性和底物特异性决定PHA含量和单体组成.构建嵌合酶是改变PHA单体组成的一种有效方式.利用重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension,SOE-PCR)法,以富氧产碱菌和嗜水气单胞菌PHA合酶基因为亲本构建新的PHA嵌合酶.结果表明,带有新型嵌合酶基因的重组菌株AHRE可利用葡萄糖酸钠和果糖产生3HB.利用辛酸钠、月桂酸、油酸、辛酸钠和葡萄糖酸钠混合碳源,除3HB和3HHx外,还产生了新的单体组分3HO.辛酸钠和葡萄糖酸钠混合碳源发酵,PHA含量最高,达57.54%.辛酸钠为单一碳源时,3HO单体组成含量最高,占PHA总量1.932%,证明嵌合酶构建成功.这为今后利用基因工程技术改变菌株PHA单体组成提供了有效方法,为获得具有更好材料学特性的PHA奠定了工作基础. 展开更多
关键词 聚羟基饱和脂肪酸酯(pha) pha合酶 嵌合酶
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Effects of the potassium application rate on lipid synthesis and eating quality of two rice cultivars 被引量:1
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作者 CHEN Guang-yi PENG Li-gong +7 位作者 LI Cong-mei TU Yun-biao LAN Yan WU Chao-yue DUAN Qiang ZHANG Qiu-qiu YANG Hong LI Tian 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2023年第7期2025-2040,共16页
Lipid content has an important effect on rice eating quality,but the effects of fertilizer application rate on the lipid synthesis and eating quality of rice are not well understood.Potassium(K)has a strong influence ... Lipid content has an important effect on rice eating quality,but the effects of fertilizer application rate on the lipid synthesis and eating quality of rice are not well understood.Potassium(K)has a strong influence on rice quality and the requirement for K fertilizer in rice is greater than for nitrogen(N)and phosphorus(P)fertilizers.To investigate the effects of K fertilizer on the lipid synthesis and eating quality of rice,we used Nanjing 9108(NJ9108,japonica)and IR72(indica)rice as experimental materials and four K levels:K0(0 kg ha^(-1)),K1(90 kg ha^(-1)),K2(135 kg ha^(-1))and K3(180 kg ha^(-1)).The results showed that the lipid content,free fatty acid(FFA)content,unsaturated fatty acid(UFA)content,malonyl-CoA(MCA)content,phosphatidic acid(PA)content,lipid synthesis-related enzyme activities and eating quality first increased and then decreased with increasing K in both cultivars.The maximum values were obtained under K2.However,the saturated fatty acid(SFA)content showed the opposite trend.No significant differences were found in pyruvate(PYR)content among the K treatments.The protein and oxaloacetic acid(OAA)contents and phosphoenolpyruvate carboxylase(PEPCase)activity of NJ9108 first decreased and then increased with increasing K,and the minimum values were obtained under K2;while IR72 showed the opposite trend and the maximum values were obtained under K1.Overall,increasing K optimized the fatty acid components and increased the lipid content and eating quality of rice by enhancing lipid synthesis-related enzyme activities and regulating substrate competition for lipid and protein synthesis.The optimal K application rate for lipid synthesis,eating quality and grain yield was 135 kg ha^(-1)for both cultivars. 展开更多
关键词 RICE potassium application rate lipid content lipid synthesis-related enzyme fatty acid components eating quality
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饲料中添加水解鱼蛋白对半滑舌鳎稚鱼生长及生理生化指标的影响 被引量:20
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作者 柳旭东 梁萌青 +4 位作者 张利民 王际英 常青 王家林 Yannis Kotzamanis 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期242-249,共8页
试验研究了饲料中添加不同水平(0%、20%、40%和60%)的水解鱼蛋白(Fish potein hdrolysate,FPH)对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther)稚鱼生长及生理生化指标的影响。28d饲养实验结束后,对试验鱼生长指标、鱼体消化酶活性、... 试验研究了饲料中添加不同水平(0%、20%、40%和60%)的水解鱼蛋白(Fish potein hdrolysate,FPH)对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther)稚鱼生长及生理生化指标的影响。28d饲养实验结束后,对试验鱼生长指标、鱼体消化酶活性、碱性磷酸酶(AKP)及肠道发育情况进行分析。结果显示:实验鱼的存活率为64.44%—78.88%,其中20%与40%添加组存活率显著高于其他两组(P<0.05);实验鱼的特定生长率(SGR)随饲料中FPH添加水平升高呈下降趋势,20%添加组特定生长率最高,显著高于其他3组(P<0.05),且60%添加组与对照组(FM)之间无显著差异(P>0.05);各试验组鱼体消化酶(脂肪酶、淀粉酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶)的比活力在14d与28d时的强弱关系不一致。鱼体碱性磷酸酶比活力大小依次为:20%组>40%组>对照组>60%组,各组间差异均显著(P<0.05);半滑舌鳎肠道微绒毛长度和黏膜厚度均以20%添加组为最优,显著优于其他3组(P<0.05)。以上结果表明,在实验条件下,饲料中FPH的添加水平为20%时,能提高半滑舌鳎稚鱼的存活率及生长性能,并增强其对营养物质的吸收能力。 展开更多
关键词 水解鱼蛋白 半滑舌鳎稚鱼 消化酶 碱性磷酸酶 肠道组织
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红法夫酵母与环状芽孢杆菌混合培养破壁提取虾青素的研究 被引量:3
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作者 蹇华丽 梁世中 宋光均 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期6-9,共4页
环状芽孢杆菌能以红法夫酵母细胞壁为唯一碳源进行发酵产胞壁溶解酶,将红法夫酵母与环状芽孢杆菌混合培养,可使环状芽孢杆菌在生长的同时产酶并逐渐溶解酵母细胞壁,从而提取虾青素。通过对红法夫酵母与环状芽孢杆菌两阶段混合培养条件... 环状芽孢杆菌能以红法夫酵母细胞壁为唯一碳源进行发酵产胞壁溶解酶,将红法夫酵母与环状芽孢杆菌混合培养,可使环状芽孢杆菌在生长的同时产酶并逐渐溶解酵母细胞壁,从而提取虾青素。通过对红法夫酵母与环状芽孢杆菌两阶段混合培养条件的优化,总结出红法夫酵母产虾青素及酶法破壁提取的适宜工艺为:培养基初始糖浓度为30g/L,环状芽孢杆菌的最佳接种时间为红法夫酵母培养60~72h,接种量为10mL/L(1010个细胞/mL),接种后最适培养温度为30℃,pH为6.5,总发酵时间为120h,在此条件下,红法夫酵母虾青素产量可达到8960.2μg/L,虾青素最终提取率可达到96.8%。 展开更多
关键词 红法夫酵母 虾青素 环状芽孢杆菌 胞壁溶解酶 提取
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伤寒免疫学诊断方法的研究现状
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作者 鲍行豪 《科技通报》 1991年第6期354-359,共6页
对近年伤寒免疫学诊断方法结合作者的研究工作进行了评价。伤寒免疫学诊断可分检测早期病人体液中抗原及测定患者血清中抗体两个方面。检测抗原以SPA-CoA与ELISA(包括Dot-ELISA)较为敏感和特异,而DRLAT则有简便的优点。测定抗体以PHA最... 对近年伤寒免疫学诊断方法结合作者的研究工作进行了评价。伤寒免疫学诊断可分检测早期病人体液中抗原及测定患者血清中抗体两个方面。检测抗原以SPA-CoA与ELISA(包括Dot-ELISA)较为敏感和特异,而DRLAT则有简便的优点。测定抗体以PHA最为简便与快速。使用LPS-PHA可作伤寒的早期快速诊断,而Vi-PHA可作伤寒病后带菌者的初筛。ELISA有较PHA更高的敏感性,其中LPS-IgM-ELISA亦可作伤寒病人的早期诊断,而LPS-IgG-ELISA可用于该病的追溯诊断和血清流行病学调查。Vi-ELISA还可作伤寒病后带菌者初筛。不同条件实验室可根据取得试剂情况选择使用。 展开更多
关键词 伤寒 免疫诊断 抗原 抗体 血清
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3MP组分可控的共聚酯P(3MP-co-3HB)体外合成及产物性质分析
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作者 李雪 王明 +3 位作者 宋林鑫 张思宇 周爽姿 韩雪容 《生物技术》 CAS 2023年第6期689-696,共8页
[目的]以3-巯基丙酸(3MP)作为第二组分,利用设计的单相反应体系实现共聚酯P(3MP-co-3HB)中3MP组分的可控合成,并分析3MP组分掺入对聚羟基丁酸酯(PHB)性质的影响。[方法]根据设计的P(3MP-co-3HB)体外合成途径,利用体外重组表达纯化的乙... [目的]以3-巯基丙酸(3MP)作为第二组分,利用设计的单相反应体系实现共聚酯P(3MP-co-3HB)中3MP组分的可控合成,并分析3MP组分掺入对聚羟基丁酸酯(PHB)性质的影响。[方法]根据设计的P(3MP-co-3HB)体外合成途径,利用体外重组表达纯化的乙酰辅酶A合成酶(ACSPt)、CoA转移酶(PCT_(Cp))、PHA合酶(PhaCRe)作为催化剂,以不同摩尔比的(R)-3-羟基丁酸[(R)-3HB]和3MP作为底物,合成共聚物P(3MP-co-3HB)s。利用1H-NMR、GPC、DSC和TG等测试手段分析产物的结构与热性质。[结果]产物的1H-NMR结果表明,3MP∶3HB的摩尔比为0∶1、1∶3和1∶1时,分别合成PHB、P(55.4 mol%3MP-co-3HB)和P(70 mol%3MP-co-3HB),产量分别为2.00 g/L、0.72 g/L和0.26 g/L。产物的GPC结果表明,随着3MP摩尔组分的增加,共聚物的Mn由40.10 kDa增加至45.40 kDa,Mw由91.00 kDa增加至102.80 kDa,PDI在2.25~2.27范围。DSC、TG测试结果表明,P(55.4 mol%3MP-co-3HB)和P(70 mol%3MP-co-3HB)的Tm、Td分别为134.90℃、112.50℃和239.70℃、271.40℃。[结论]利用设计的OPRS可合成含高3MP摩尔比例的P(3MP-co-3HB)s,其3MP组分在0 mol%~70 mol%范围内可控。含有3MP组分的共聚酯能很好地改善PHB的加工性能。 展开更多
关键词 聚羟基脂肪酸酯 聚(3-巯基丙酸-共-3-羟基丁酸) pha合成相关酶 结构与性质 单相体外合成系统
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纯化腐植酸对NO_3^-胁迫下黄瓜种子萌发及生理生化特性的影响 被引量:5
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作者 谷端银 高俊杰 +1 位作者 焦娟 王秀峰 《北方园艺》 CAS 北大核心 2017年第9期1-8,共8页
以‘新泰密刺’和‘津优1号’黄瓜种子为试材,采用培养皿发芽方式,研究了添加纯化腐植酸PHA(添加浓度0、25、50、100、150mg·L^(-1))对NO_3^-胁迫下(75mmol·L^(-1))黄瓜种子萌发及幼芽抗氧化物酶活性的影响。结果表明:NO_3^-... 以‘新泰密刺’和‘津优1号’黄瓜种子为试材,采用培养皿发芽方式,研究了添加纯化腐植酸PHA(添加浓度0、25、50、100、150mg·L^(-1))对NO_3^-胁迫下(75mmol·L^(-1))黄瓜种子萌发及幼芽抗氧化物酶活性的影响。结果表明:NO_3^-胁迫使黄瓜种子发芽率、主根长、侧根长、侧根数、下胚轴长度和粗度以及幼芽鲜质量明显减少;添加PHA处理使2个黄瓜品种的上述项目值都明显增加,表明部分缓解了NO_3^-胁迫。黄瓜种子发芽过程中,由于NO_3^-胁迫,幼芽的电解质渗漏率显著增加、子叶中α-淀粉酶活力下降、胚根脱氢酶活力增加;胚根和胚轴中丙二醛(MDA)及可溶性蛋白质含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性均增加。添加PHA后,幼芽的电解质渗漏率显著减小,随PHA浓度的增加,减小的差值变小;子叶中α-淀粉酶活性和胚根脱氢酶活性增加,添加PHA浓度高时呈下降趋势;胚根和胚轴中MDA含量减少,添加PHA浓度高时又有增加趋势;可溶性蛋白质含量增加,添加PHA浓度高时显示下降趋势;SOD、POD、CAT活性均呈下降趋势。黄瓜种子发芽受到NO_3^-胁迫时,都因PHA的添加而表现出不同程度对NO_3^-胁迫的正向缓解,使幼芽趋于正常。黄瓜种子发芽在NO_3^-胁迫添加PHA后的生理生化指标的变化也表现出品种和器官不同的感受性差异。该试验表明,以PHA添加100mg·L^(-1)处理对胁迫NO_3^-下黄瓜种子效果较佳。 展开更多
关键词 纯化腐植酸 NO3-胁迫 黄瓜 种子萌发 抗氧化物酶活性
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碳源类型对反硝化除磷过程中N_2O产生的影响机制 被引量:5
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作者 郑楠 李聪 +1 位作者 谢慧君 张建 《山东大学学报(工学版)》 CAS 北大核心 2014年第5期72-77,共6页
以反硝化除磷过程中N2O的减量化为目的,分别以乙酸、乙酸和丙酸的混合物、丙酸为碳源,研究了碳源类型对系统中N2O产生的影响。结果表明:以乙酸为碳源时反硝化除磷过程中N2O的产生量最多,以乙酸和丙酸混合物为碳源时N2O产量次之,以丙酸... 以反硝化除磷过程中N2O的减量化为目的,分别以乙酸、乙酸和丙酸的混合物、丙酸为碳源,研究了碳源类型对系统中N2O产生的影响。结果表明:以乙酸为碳源时反硝化除磷过程中N2O的产生量最多,以乙酸和丙酸混合物为碳源时N2O产量次之,以丙酸为碳源时N2O产量最少。使用乙酸、乙酸与丙酸混合物和丙酸为碳源时,N2O产生量占总氮(TN)去除的比例分别为8.67%、1.48%和0.72%。不同碳源导致了系统反硝化进程的不同:以丙酸为碳源时,硝酸盐与亚硝酸盐还原速率比值最低,系统中几乎没有亚硝酸盐的积累;同时,在混合酸和丙酸系统中,聚3-羟基戊酸盐(poly-hydroxyvalerate,PHV)成为聚羟基烷酸酯(poly-β-hydroxyalkanoates,PHA)的主要成分,PHV量的增加导致N2O产量减少。因此,以丙酸作为反硝化除磷系统的外加碳源对N2O的减量化有明显优势,但该过程中系统对氮和磷的去除效果还需要进一步优化。 展开更多
关键词 反硝化除磷 N2O 碳源 反硝化酶活性 pha
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