3-羟基丁酸-3-羟基己酸共聚酯材料促进小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究

目的:观察3-羟基丁酸-3-羟基己酸共聚酯(PHBHHx)能否促进多能干细胞(m ESC)的存活、增殖以及分化,为心肌梗死的治疗提供新的治疗策略。方法:培养m ESC,传代培养至3代后与PHBHHx材料制成的生物薄膜共同培养72h,CCK-8试剂盒测定m ESC的活性及增殖,DAPI染色观察细胞,电镜观察m ESC生长。将小鼠m ESC向心肌细胞定向分化,15d后免疫荧光和流式细胞术定量测定心肌肌钙蛋白(c Tn T)。结果:CCK-8活性检测显示PHBHHx膜培养m ESC可以促进细胞更好的增殖;电镜扫描显示,m ESC在PHBHHx膜上能够粘附生长,细胞形态正常。加入干细胞分化培养基使干细胞向心肌细胞定向分化15d后,通过免疫荧光显示心肌细胞特异性标志蛋白c Tn T表达阳性;流式细胞术测得PHBHHx膜培养比传统的细胞培养方式能够促进细胞更好的分化,测得的c Tn T表达量明显增加。结论:PHBHHx膜与m ESC有较好的组织相容性,并且能够促进m ESC的增殖和分化。

小鼠诱导多能干细胞与 PHBHHx 二维膜、三维膜体外共培养制作心肌补片

目的：通过3-羟基丁酸与3-羟基己酸的共聚酯膜（ PHBHHx膜）与小鼠诱导多能干细胞（miPSCs）体外共培养，探讨其对miPSCs黏附、存活及分化的影响；寻找一种适合制作心肌补片的生物材料。方法复苏miPSCs，传代后，将miPSCs与PHBHHx二维膜和PHBHHx三维膜共培养，72 h后行扫描电镜观察细胞黏附情况。用含和不含维生素C的分化培养基对其进行诱导分化，通过免疫荧光、流式细胞术测定心肌细胞特异性蛋白cTnT的含量。结果 miPSCs可以在PHBHHx膜上良好的黏附和存活。维生素C作为一种良好的体外诱导剂，可以极大地促进miPSCs向心肌细胞分化，诱导分化21天后免疫荧光测定心肌细胞特异性蛋白cTnT表达阳性；流式细胞术测定cTnT的表达量：加维生素C诱导剂组cTnT＞未加任何诱导剂组[（47.54±1.46）％对（7.02±0.95）％，P＜0.05]。在miPSCs和PHBHHx膜共培养向心肌细胞分化过程中，添加维生素C诱导剂时，cTnT的表达量PHBHHx三维膜细胞培养分化＞PHBHHx二维膜细胞培养分化＞传统的细胞培养皿培养[（60.32±1.76）％对（53.31±1.41）对（47.54±1.46）％，P＜0.05]。结论 miPSCs与PHBHHx膜具有良好的组织相容性，可以在PHBHHx膜上黏附、存活和分化；相对于PHBHHx二维膜培养和传统的培养皿培养，三维PHBHHx膜培养在miPSCs向心肌细胞分化过程中具有更大的优势。

小鼠诱导多能干细胞与PHBHHx膜体外共培养的实验研究

目的探讨小鼠诱导多能干细胞(mi PSCs)与聚3-羟基丁酸-3-羟基己酸共聚物(PHBHHx)膜材料的体外相容性。方法复苏mi PSCs,培养传代后,分为两组,一组与PHBHHx膜材料在体外共培养,通过DAPI染色方法观察mi PSCs在膜上的粘附情况,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定mi PSCs在PHBHHx膜上的增殖,扫描电镜观察细胞与膜材料的复合情况;另一组用传统的培养皿培养mi PSCs,CCK-8测定细胞活力。结果小鼠诱导多能干细胞能够与PHBHHx膜材料良好的粘附和增殖,CCK-8实验测定细胞活力OD值结果显示PHBHHx膜显著大于传统的细胞培养皿培养(0.617±0.019 vs.0.312±0.004,P<0.05)。结论 PHBHHx与mi PSCs体外共培养制成的细胞补片表面上有细胞粘附及增殖,与传统的细胞培养皿培养相比,PHBHHx膜培养在细胞的粘附和增殖中具有很大的优势,PHBHHx可作为干细胞治疗多种疾病的支架材料之一。