沉默环状RNA溴域PHD手指转录因子通过靶向miR-15a-5p对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞损伤影响的研究

目的探讨沉默环状RNA溴域PHD手指转录因子(circBPTF)对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(hRMEC)损伤的影响及其可能作用机制。方法取对数生长期hRMEC加入浓度为5.5 mmol/L葡萄糖培养基处理24 h为正常对照(Con)组,加入浓度为25 mmol/L葡萄糖培养基处理24 h为HG组。将si-NC、si-circBPTF、miR-NC、miR-15a-5p mimic、si-circBPTF和miR-15a-5p inhibitor(共转染)分别转染至hRMEC,转染成功后加入浓度为25 mmol/L葡萄糖培养基处理24 h,分别为HG+si-NC组、HG+si-circBPTF组、HG+miR-NC组、HG+miR-15a-5p mimic组、HG+si-circBPTF+miR-15a-5p inhibitor组。qRT-PCR法检测circBPTF、miR-15a-5p表达,试剂盒检测丙二醛(MDA)与超氧化物歧化酶(SOD)活性,细胞计数试剂盒8法与流式细胞术分别检测细胞活力及凋亡率,双荧光素酶报告实验检测circBPTF与miR-15a-5p的靶向关系,Western blot法检测活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达。结果与Con组比较,HG组MDA、凋亡率、circBPTF表达升高(P<0.05),SOD、细胞活力、miR-15a-5p表达降低(P<0.05)。与HG+si-NC组比较,HG+si-circBPTF组MDA、凋亡率、circBPTF表达降低(P<0.05),SOD、细胞活力、miR-15a-5p表达升高(P<0.05)。与HG+miR-NC组比较,HG+miR-15a-5p mimic组MDA、凋亡率降低(P<0.05),SOD、细胞活力、miR-15a-5p表达升高(P<0.05)。与HG+si-circBPTF组比较,HG+si-circBPTF+miR-15a-5p inhibitor组MDA、凋亡率升高(P<0.05),SOD、细胞活力、miR-15a-5p表达降低(P<0.05)。Starbase预测显示,circBPTF与miR-15a-5p存在互补序列,上调miR-15a-5p表达可抑制转染野生型载体WT-circBPTF的细胞相对荧光素酶活性(P<0.05)。结论沉默circBPTF可通过靶向调控miR-15a-5p表达促进细胞增殖及抑制细胞氧化应激、凋亡,减轻高糖诱导的hRMEC损伤。

miR-454-3p靶向BPTF表达调控肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-454-3p对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法采用RT-PCR技术检测miR-454-3p在肺癌组织以及肺癌细胞株中的表达,以表达量最低的肺癌细胞A549为后续分析对象,将miR-454-3p mimic转入A549细胞,RT-PCR验证miR-454-3p的过表达效率;采用CCK-8、迁移、侵袭等实验,观察转染组与对照组肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭情况;生物信息学预测BPTF是miR-454-3p的靶标,构建BPTF 3′UTR荧光素酶载体,通过双荧光素酶报告基因验证miR-454-3p和BPTF的靶向关系;应用Western blot法检测BPTF的表达及迁移、侵袭相关蛋白的变化。结果RT-PCR实验表明miR-454-3p在肺癌组织和细胞中表达下调,且在A549细胞中表达最低(P<0.05)。与对照组相比,过表达miR-454-3p的肺癌细胞A549增殖能力明显降低,迁移和侵袭能力均受到抑制(P<0.05)。生物信息学软件分析BPTF为miR-454-3p的潜在靶基因,过表达miR-454-3p后BPTF的表达水平明显受到抑制。同时,迁移相关蛋白MMP-2和MMP-9表达明显下调,E-cadhern表达明显上调,而E-cadherin的负性调控N-cadherin表达下降。结论miR-454-3p可能通过靶向下调BPTF的表达,抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,为肺癌的靶向治疗提供潜在靶标。

大豆PHD家族蛋白的全基因组鉴定及表达特征分析

PHD(Plant Homeodomain Finger)基因家族编码一类锌指转录因子,广泛参与植物的生长发育和逆境应答过程。通过全基因组鉴定获得了95个大豆PHD家族蛋白。通过共线性分析、进化树构建、基因结构和功能结构域鉴定、GO注释分析、不同组织间和非生物胁迫下表达分析等,获得了大豆PHD家族基因复制、家族进化、保守结构域及基因表达等信息。结果表明,大豆PHD基因在家族进化、基因结构和保守结构域上存在较大变异,可能参与Zn2+结合、DNA结合及表观遗传调控等分子过程,参与调控植物生长发育和逆境应答。这些结果为进一步研究大豆PHD家族在生长发育和逆境应答中的生物学功能提供重要线索。