滨麦草与百萨偃麦草PHR1基因的克隆及序列分析

充分挖掘植物自身磷高效利用的生物学潜力,提高农作物对土壤难溶性磷的吸收和利用效率,对于培育磷高效利用的作物新品种、减少肥料投入和保护生态环境具有十分重要的意义。PHR1基因是植物磷信号调控网络的重要低磷应答转录因子,本研究利用同源克隆的方法,分别从小麦近缘植物滨麦草和百萨偃麦草中克隆获得了其PHR1基因序列。滨麦草Lm PHR1和百萨偃麦草Tb PHR1基因的ORF均为1 356 bp,编码451个氨基酸;与已报道的小偃54A1、B1、D1的PHR1基因高度同源,一致性达到98.63%;对两基因的氨基酸序列进行预测,结果表明它们均具有MYB-DNA结合结构域和一个预测的CC(Coiled coil)结构域;利用Clustal X软件对已报道的水稻、小麦等PHR1基因进行聚类分析并构建系统进化树,结果显示,Tb PHR1基因与二穗短柄草、水稻、玉米、拟南芥的PHR1基因在进化关系上更近一些,而Lm PHR1基因与其他植物的PHR1基因进化关系较远。

大豆磷高效基因GmPHR1和GmPAP4共转化及新种质创制

磷对大豆生长发育至关重要,土壤有效磷缺乏严重影响其产量和品质。目前已有学者通过转基因手段将磷高效相关基因转入大豆,并获得转基因新材料,但多数集中于单基因转化,而双基因共转化研究甚少。本研究在前期获得转磷高效相关基因Gm PHR1、Gm PAP4大豆新材料基础上,利用农杆菌介导与常规杂交技术进行双基因共转化,结果发现,采用这2种方案均可实现双基因共转化,获得了经PCR及DNA测序分析验证正确的转Gm PHR1与Gm PAP4双基因新材料"JD12-PHR1-PAP4"。

基于pH信号通路的白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌生物膜作用机制的研究

该文基于pH信号通路探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB)对白念珠菌生物膜的影响。以扫描电镜观察pH突变株生物膜形态结构; CLSM测量pH突变株生物膜厚度;酶标仪检测pH突变株生物膜活性;流式细胞仪检测pH突变株生物膜损伤; qRT-PCR法检测pH突变株生物膜相关基因的表达。结果显示,对生物膜结构,PHR1基因缺失造成结构缺陷,PHR1回补则基质较多; BAEB干预对该2株无明显影响。RIM101基因缺失或回补无明显结构损伤,但BAEB干预后,这2种菌株生物膜均被明显抑制。对生物膜厚度,PHR1基因缺失或PHR1回补的厚度降低;BAEB干预后,该2株厚度变化不明显。而RIM101基因缺失或回补对生物膜厚度影响不大;加入BAEB后,该2株生物膜厚度明显变薄。对生物膜活性,PHR1基因缺失、PHR1回补和RIM101基因缺失均造成活性降低,RIM101回补无明显变化;BAEB干预后,PHR1基因缺失、PHR1回补、RIM101缺失与RIM101回补的生物膜活性与干预前相比显著降低。对生物膜损伤程度,PHR1基因缺失、PHR1回补和RIM101基因缺失、RIM101回补均出现不同程度损伤;加入BAEB干预后,PHR1缺失或PHR1回补的损伤率差异并不大,但RIM101缺失或RIM101回补的损伤率显著升高。对基因表达水平,除HSP90基因上调外,PHR1缺失、PHR1回补、RIM101缺失、RIM101回补的ALS3,SUN41,HWP1,UME6和PGA10基因均出现了不同倍数的下调趋势。该研究表明,pH信号通路中PHR1和RIM101基因突变能提高菌株对于抗真菌药物BAEB的敏感性,从而抑制白念珠菌生物膜形成及相关基因的表达。