PI-103对人卵巢癌细胞株SKOV3/DDP顺铂化疗效果的影响

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)双抑制剂PI-103对卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP顺铂化疗效果的影响。方法:将PI-103、顺铂及两者联合分别作用于SKOV3/DDP细胞,采用CCK-8法检测细胞生长情况,流式细胞技术检测药物单独或联合作用对细胞凋亡的影响;应用Western blot检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、核糖体蛋白(rpS6)、磷酸化rpS6(p-rpS6)以及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax蛋白表达变化。结果:PI-103能够抑制SKOV3/DDP细胞增殖,且呈浓度、时间依赖性;联合用药可以明显增加对细胞生长抑制和凋亡作用。PI-103能下调Akt和rpS6的磷酸化水平,促DDP上调Bax和下调Bcl-2的表达。结论:PI-103抑制PI3K/Akt/mTOR信号传导通路,促DDP上调促凋亡蛋白及下调抗凋亡蛋白的表达,从而抑制癌细胞生长,诱导其凋亡,增加卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP细胞对DDP的化疗效果。

PI-103在体外抗急性髓细胞白血病效应的实验研究

目的研究急性髓细胞白血病(AML)细胞PI3K-Akt-mTOR信号转导通路各基因的表达及PI-103在体外对AML细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法RT-PCR法检测AML细胞PI3K、Akt、mTOR mRNA的表达;四甲基偶氮唑蓝法检测PI-103对AML细胞的增殖作用;流式细胞仪检测PI-103对AML细胞的凋亡率和细胞周期的影响。结果①81.25%的AML患者表达PI3K基因,87.5%的患者表达mTOR基因,50%的患者同时表达此两种基因。②PI-103能明显提高PI3K-Akt-mTOR信号通路持续活化的AML细胞的增殖抑制率和凋亡率、阻滞细胞于G0/G1期(P均<0.05),且与剂量显著相关(P均<0.05)。结论大部分AML患者存在PI3K-Akt-mTOR信号转导通路的异常活化;PI-103可通过PI3K、mTOR信号通路抑制AML细胞增殖、促进其凋亡。

联合应用PI-103和AG1478抑制SH-SY5Y细胞增殖并促进其凋亡

目的观察联合应用PI-103和AG1478对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用。方法以m TOR拮抗剂PI-103、EGFR拮抗剂AG1478分别单独和联合处理SH-SY5Y细胞后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定不同浓度梯度的PI-103和AG1478对SH-SY5Y细胞增殖的影响并计算相应的半数抑制浓度(IC50),流式细胞术检测细胞凋亡,Hoechst-33528染色观察细胞凋亡的形态改变,Western blot检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白的水平变化。结果 PI-103和AG1478均能抑制SH-SY5Y细胞增殖且半数抑制浓度(IC50)分别为3.2μmol/L,215.5μmol/L。IC50浓度作用24h后,Hoechst-33528染色和流式细胞术分析显示,联合用药的细胞凋亡率远高于单一用药。Western blot检测单独用药后磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化核糖体蛋白S6激酶(p-p70s6k)表达水平降低,且联合用药后p-Akt和p-p70s6k的水平降低更明显。结论 PI-103和AG1478联合用药能提高肿瘤细胞死亡率,其抗肿瘤效果有协同效应。

PI-103对胃癌细胞BGC-823增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨PI-103对胃癌细胞BGC-823增殖、迁移及侵袭的影响及机制。方法常规培养胃癌细胞BGC-823,实验组分别加入0.1、0.5、1、1.5、2.5μM的PI-103进行干预,对照组加入等体积培养液。MTT法检测BGC-823细胞增殖情况,划痕法迁移实验观察划痕细胞愈合时间,Transwell小室侵袭试验观察其侵袭能力。结果实验组随PI-103作用剂量增加增殖抑制率明显升高,呈剂量依赖性;划痕法迁移试验显示实验组划痕愈合时间慢于对照组,侵袭细胞数量明显低于对照组,P<0.05。结论PI-103能抑制BGC-823细胞增殖,显著降低其迁移与侵袭能力,其机制可能为阻断PI3K/Akt/mTOR信号通路。

PI-103对人黑色素瘤A375细胞增殖和侵袭的影响

目的观察PI-103在体外对人黑色素瘤A375细胞增殖和侵袭的影响,并探讨可能的作用机制。方法应用MTT法检测不同浓度PI-103对A375细胞增殖的影响,相差显微镜观察PI-103作用后A375细胞的形态学改变,Transwell小室侵袭实验检测0.1、0.2μmol/L的PI-103对A375细胞侵袭的影响,Western Blot法测定A375细胞MMP-2、MMP-9的表达。结果在浓度高于0.4μmol/L时,PI-103能够明显抑制A375细胞的增殖,差异有统计学意义(P<0.05),相差显微镜下可见典型凋亡细胞形态学改变。0.1、0.2μmol/L的PI-103作用后,侵袭实验穿膜细胞数明显减少(P<0.05),MMP-2、MMP-9表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PI-103可抑制A375细胞增殖和侵袭,有望成为一种潜在的抗恶性黑素瘤治疗的药物。

抑制剂PI-103对786-O细胞株PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的:探讨抑制剂PI-103对786-O细胞株PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法:本文建立PI3K抑制剂作用786-O细胞模型,CCK-8法检测PI-103的IC50值,Western blot法检测PI-103作用后细胞内pAkt蛋白表达水平。结果:786-O细胞72 h的IC50为(9.06±0.06)μmol/L,在此浓度下,细胞内p-Akt蛋白的表达水平显著降低(P<0.01)。结论:PI-103通过抑制PI3K来调控PI3K/Akt/mTOR信号通路下游分子,此信号通路在肾细胞癌发生发展中起着重要作用,为肾细胞癌的分子靶向治疗提供理论依据。

PI-103对人黑色素瘤A375细胞迁移和侵袭能力的影响及其机制研究

目的观察PI-103在体外对人黑色素瘤A375细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨可能的作用机制。方法应用MTT法检测不同浓度PI-103对A375细胞增殖的影响,Transwell小室实验检测0.1、0.2μmol/L PI-103对A375细胞迁移能力和侵袭能力的影响,Western Blot法测定细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达。结果 0.1、0.2μmol/L PI-103对A375细胞增殖的抑制作用不明显(P>0.05);在浓度高于0.4μmol/L时,PI-103能够明显抑制A375细胞的增殖(P<0.05)。0.1μmol/L PI-103作用后,迁移实验和运动实验穿膜细胞数分别为(91.73±13.80)、(63.67±8.54),与对照组比较明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);0.2μmol/L PI-103作用后,迁移实验和运动实验穿膜细胞数分别为(64.07±9.22)、(34.80±7.89),与对照组比较明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。0.1、0.2μmol/L PI-103作用后,A375细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PI-103可通过下调MMP-2、MMP-9的表达抑制A375细胞迁移和侵袭,为其应用于抗恶性黑素瘤转移治疗提供了实验依据。

PI3K/mTOR双靶点抑制剂PI-103在体外对喉鳞癌细胞的作用

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)双靶点抑制剂 PI-103 在体外对喉鳞癌细胞的作用。方法采用喉鳞癌细胞株 Hep-2 及AMC-HN-8,分别加入LY294002、Rapamycin或PI-103处理培养细胞,DMSO处理作为对照,应用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡;Transwell 小室观察肿瘤细胞迁移及侵袭能力;Western blot测定相关细胞周期、细胞凋亡及 PI3K/Akt/mTOR 信号通路相关蛋白质水平。结果LY294002、Rapamycin 、PI-103能将喉鳞癌细胞周期阻滞于S期,G2期百分含量较空白对照组显著下降,细胞周期相关蛋白Cyclin E1和 Cyclin D1水平降低。流式细胞术筛选细胞死亡率升高,凋亡相关蛋白Caspase9,Caspase3,Caspase8的表达量升高( P <0.05),然而活性凋亡蛋白active Caspase3并没有显著升高,但PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白质p-AKT和p-4EBP1表达量降低。药物组肿瘤迁移和侵袭细胞数均低于对照组。PI-103在以上事件中作用效率均显著高于LY294002和Rapamycin ( P < 0.05 )。结论PI-103 能够调节细胞周期蛋白阻滞喉鳞癌细胞周期,促进细胞死亡,抑制细胞迁移及侵袭,且效果优于单靶点抑制剂LY294002和Rapamycin,对头颈部鳞癌的临床治疗有潜在的研究价值。

PI-103对卵巢癌细胞生物特性和卵巢癌脂肪酸合酶表达的影响

目的探讨PI-103对卵巢癌恶性表型的调控及其对卵巢癌脂肪酸合酶(FASN)表达的影响。方法 Western blot检测卵巢癌细胞株A2780,SKOV3/DDP和SKOV3中FASN的表达(对照组);将FASN表达量最高的细胞株A2780用药物PI-103处理(实验组)。采用MTT测定细胞抑制率、平板克隆形成实验和Transwell小室实验比较实验组与对照组的细胞生物学特性,Western blot比较两组细胞的FASN、p-Akt和p-rpS6表达。结果随着时间的延长,实验组的细胞增殖能力较对照组减弱(P<0.05)、克隆形成率降低[(8.45±1.04)%vs.(15.40±0.82)%](P<0.05)、侵袭细胞数减少[(58.67±6.51)个vs.(156.33±4.04)个](P<0.05)。实验组FASN、p-Akt和p-rpS6的蛋白表达水平均低于对照组(P<0.05)。结论 PI-103可有效抑制卵巢癌A2780细胞的PI3K/AKT/mTOR信号通路中相关蛋白的表达;在体外显著抑制细胞的增殖和侵袭。

P13K／mTOR双靶点抑制剂PI-103与TRAIL联合应用对喉鳞癌Hep-2细胞的作用

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶（P13K）／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）双靶点抑制剂PI-103与肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）联合应用对喉鳞癌Hep-2细胞的作用。方法将喉癌Hep-2细胞分为7组，分别为P13K抑制剂LY294002组、mTOR抑制分子雷帕霉素组、P13K／mTOR双靶点抑制剂PI-103组、LY294002＋TRAIL组、雷帕霉素＋TRAIL组、PI-103＋TRAIL组和阴性对照组，以流式细胞仪检测各组Hep-2细胞周期及凋亡率。设立PI-103组、PI-103＋TRAIL组和阴性对照组，Transwell检测各组对Hep．2细胞迁移及侵袭能力影响，Western印迹法检测各组细胞中细胞凋亡及P13K／蛋白激酶B（AKT）／mTOR信号通路相关蛋白的表达水平。结果PI-103＋TRAIL组能够阻滞细胞周期于s期[G1：（1．80±0．30）％；G2：0．00]，相比其他各组能显著抑制细胞分裂，增强细胞凋亡[（66．78±2．93）％]（均P〈0．05）。PI-103＋TRAIL组细胞迁移数和侵袭数分别为（17．0±3．4）个和（18．4±5．4）个，PI．103组为（41．2±3．8）个和（41．6±4．7）个，联合用药组可显著降低细胞迁移及侵袭能力（均P〈0．05）。与对照组相比，PI．103处理组、PI-103＋TRAIL处理组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-9、8、3的表达量逐渐升高，细胞周期蛋白（Cyclin）D1、CyclinE1、p-AKT、磷酸化真核翻译起始因子4E结合蛋白1（p-4E—BP1）的表达量逐渐降低（均P〈0．05）。结论PI-103与TRAIL联合应用于喉鳞癌Hep-2细胞能显著增强抗瘤效果，有望应用于喉鳞癌的治疗。

PI-103增强顺铂对CI3K细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的通过评价PI-103联用顺铂对C13K细胞体外增殖、凋亡及裸鼠移植瘤生长的影响为卵巢癌的靶向治疗寻找新的药物。方法C13K细胞经PI-103和／或顺铂处理后，以MTr法检测细胞的增殖情况，以流式细胞仪检测细胞凋亡，Western印迹检测p-AKT和p-S6K1的表达情况。建立C13K细胞皮下裸鼠移植瘤模型，随机分成对照组、PI-103组、顺铂组、合并组4组，连续用药4周。观察肿瘤生长情况，计算抑瘤率。结果PI-103联合顺铂抑制C13K细胞增殖，且随时间延长抑制作用越显著，抑制效果优于单独用药。PI-103可增强顺铂在C13K细胞中引起的凋亡。经PI-103作用后的C13K细胞表达p-AKT和P-S6K1较对照组下降，PI-103联合顺铂明显抑制裸鼠C13K细胞皮下移植瘤的生长，较顺铂单药组有明显差异性。结论PI-103增强顺铂对C13K细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用。