桃红四物汤对慢性阻塞性肺疾病合并肺癌模型小鼠PI3 K/AKT信号通路的实验研究

目的观察桃红四物汤对慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)合并肺癌模型小鼠肺组织中磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphoinositide3-kinase,PI3 K)、丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt kinase,AKT)、p-PI3 K、p-AKT蛋白表达水平的影响,探讨桃红四物汤对COPD合并肺癌模型小鼠的影响及是否通过PI3 K/AKT信号通路参与调控。方法将80只SPF级C57/BL6小鼠按随机数字表法分为对照组、THSW组、Lewis组以及Lewis+THSW组,每组各20只。首先利用烟熏加LPS气道内滴注的方法对Lewis组、Lewis+THSW组小鼠建立小鼠COPD模型,模型验证成功后继续构建原位肺癌模型,最终建立COPD合并肺癌模型。对照组、Lewis组不做额外处理,THSW组、COPD+Lewis+THSW组每日进行灌胃给药,桃红四物汤剂量:4.5 ml/kg,1次/d,连续2周。末次经口灌胃给药后2 h,各组小鼠称重并记录;Lewis组和Lewis+THSW组小鼠的瘤体完整剥离并称重记录;免疫印迹法检测各组小鼠肺组织中PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平。结果与Lewis组比较,Lewis+THSW组的小鼠体质量有所提高,瘤重减轻,肺组织中PI3 K、AKT、p-PI3 K、p-AKT蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论桃红四物汤可能通过调控PI3 K/AKT信号通路发挥对COPD合并肺癌的治疗作用。

象皮生肌膏对肛瘘术后创面修复及PI3 K/Akt通路的影响

目的探究象皮生肌膏对大鼠肛瘘切除术后创面模型的治疗作用及其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(Phosphoinosi-tide 3-kinase/proteinkinase B,PI3 K/Akt)信号通路的相关性。方法将36只SPF级健康成年雄性SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、象皮生肌膏组、湿润烧伤膏组,每组各9只。除假手术组外均采用0号钢丝(Aciflex)制成人造肛瘘,随后进行肛瘘切除术,创面不缝合,保持开放,使之形成一个“急性、开放、渗血”的类似临床肛瘘术后创面,并予以相应药物肛周换药10 d,模型组予以灭菌注射用水换药。利用常规面积检测法比较模型组、象皮生肌膏组、湿润烧伤膏组各组大鼠肛瘘术后创面的创面愈合率;苏木精-伊红(He-matoxylin-eosin staining,HE)染色观察各组大鼠肛周组织病理情况;蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)比较各组大鼠肛周肉芽组织中白介素17(Interleukin 17,IL-17)、磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphoinositide 3-kinase,PI3 K)、蛋白激酶B(Proteinkinase B,Akt)、磷酸化PI3 K(Phospho-PI3 K,p-PI3 K)、磷酸化Akt(Phospho-AKT,p-AKT)蛋白表达水平;定量实时聚合酶链锁反应(Quantitative real time polymerase chain reaction,Q-PCR)检测各组大鼠肛周肉芽组织中IL-17、PI3 K、Akt mRNA的表达及象皮生肌膏的干预作用。结果与假手术组比较,模型组大鼠创面组织中IL-17、p-PI3 K、p-Akt蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,象皮生肌膏组、湿润烧伤膏组大鼠创面组织中IL-17、p-PI3 K、p-Akt的蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),且象皮生肌膏组大鼠创面组织中IL-17、p-PI3 K、p-Akt的蛋白表达低于湿润烧伤膏组,差异有统计学意义(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠创面组织中IL-17、PI3 K、Akt的mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,象皮生肌膏组、湿润烧伤膏组大鼠创面组织中IL-17、PI3 K、Akt的mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),且象皮生肌膏组大鼠创面组织中IL-17、PI3 K、Akt的mRNA表达明显低于湿润烧伤膏组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后7 d、10 d象皮生肌膏组、湿润烧伤膏组大鼠创面愈合率升高,差异有统计学意义(P<0.01)。病理学方面,象皮生肌膏组大鼠创面炎性细胞较少,成纤维细胞成熟且分布整齐,真皮层内胶原纤维丰富且排列整齐,可见新生血管,无明显血管扩张及出血。结论象皮生肌膏能够抑制肛瘘术后创面炎症反应,加快创面愈合进程,其可能机制与抑制PI3 K/Akt通路有关。

黄芪-丹参通过PI3 K/AKT介导对自发性高血压大鼠肾损伤的作用机制研究

目的探讨黄芪-丹参对自发性高血压大鼠肾损伤的作用和机制。方法将72只SPF级自发性高血压大鼠和Wistar-Kyoto(WKY)大鼠随机分为对照组(对照WKY大鼠)、模型组(自发性高血压大鼠)、黄芪-丹参低剂量组(自发性高血压大鼠,1.7 g/kg的黄芪-丹参处理)、黄芪-丹参中剂量组(自发性高血压大鼠,3.4 g/kg的黄芪-丹参处理)、黄芪-丹参高剂量组(自发性高血压大鼠,11.2 g/kg的黄芪-丹参处理)、黄芪-丹参高剂量+740Y-P组(自发性高血压大鼠,11.2 g/kg的黄芪-丹参、740Y-P处理),每组各12只。Western blot检测p-PI3 K、PI3 K、p-AKT、AKT、CollagenⅠ蛋白表达,全自动生化分析仪检测血清中血尿氮素(Hematuria nitro-gen,BUN)、血肌酐值(Blood creatinine value,SCr)含量,免疫比浊法检测尿液尿微量白蛋白(Urine microalbumin,U-mAlb),Masson染色评价肾小球胶原纤维沉积评分,TBA法检测丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量,ELISA方法测定肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)含量;生化法检测氧化应激因子含量。结果黄芪-丹参低剂量组、黄芪-丹参中剂量组、黄芪-丹参高剂量组大鼠BUN、SCr及U-mAlb均低于模型组,黄芪-丹参高剂量+740Y-P组大鼠BUN、SCr及U-mAlb均明显高于黄芪-丹参高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05),黄芪-丹参低剂量组、黄芪-丹参中剂量组、黄芪-丹参高剂量组大鼠肾组织中TNF-α、IL-6含量均低于模型组,黄芪-丹参高剂量+740Y-P组大鼠肾组织中TNF-α、IL-6含量均明显高于黄芪-丹参高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠肾组织中CollagenⅠ、CollagenⅣ、TGF-β1蛋白表达量和肾小球胶原纤维沉积评分、肾小管间质病变评分均明显高于对照组,黄芪-丹参低剂量组、黄芪-丹参中剂量组、黄芪-丹参高剂量组大鼠肾组织中CollagenⅠ、CollagenⅣ、TGF-β1蛋白表达量和肾小球胶原纤维沉积评分、肾小管间质病变评分均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。黄芪-丹参高剂量+740Y-P组大鼠肾组织中CollagenⅠ、CollagenⅣ、TGF-β1蛋白表达量和肾小球胶原纤维沉积评分、肾小管间质病变评分均明显高于黄芪-丹参高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。黄芪-丹参低剂量组、黄芪-丹参中剂量组、黄芪-丹参高剂量组大鼠肾组织中SOD、GSH-Px、T-AOC含量均明显高于模型组,而MDA含量低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。黄芪-丹参高剂量+740Y-P组大鼠肾组织中SOD、GSH-Px、T-AOC含量均明显低于黄芪-丹参高剂量组,而MDA含量高于黄芪-丹参高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠肾组织中p-PI3 K/PI3 K、p-AKT/AKT表达量均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。黄芪-丹参低剂量组、黄芪-丹参中剂量组、黄芪-丹参高剂量组大鼠肾组织中p-PI3 K/PI3 K、p-AKT/AKT表达量均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。黄芪-丹参高剂量+740Y-P组大鼠肾组织中p-PI3 K/PI3 K、p-AKT/AKT表达量均明显高于黄芪-丹参高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄芪-丹参抑制PI3 K/AKT信号,进而改善自发性高血压大鼠肾组织的损伤程度,减轻氧化损伤、炎症和纤维化进程。

二黄糖肾康对糖尿病肾病大鼠肾脏细胞凋亡及PI3 K/AKT信号转导系统的影响

目的观察二黄糖肾康对糖尿病肾病(DN)大鼠细胞凋亡及PI3 K/AKT信号转导系统的影响。方法SD大鼠单侧肾切除加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)复制DN模型,每日二黄糖肾康灌胃,8w后流式细胞术检测细胞凋亡数目及调控因子Bax、Bcl-2、Fas、Fas-L的蛋白表达,采用Western印迹方法检测细胞内磷酸化Akt蛋白质的表达。结果二黄糖肾康明显减少DN大鼠肾脏皮质细胞凋亡数目,降低Bax、Fas、Fas-L的的蛋白表达,增加Bcl-2的蛋白表达,激活PI3K/AKT信号通路。结论二黄糖肾康能有效降低肾脏细胞凋亡,激活PI3K/AKT信号通路。

红景天苷对内皮祖细胞功能及其 PI3 K／Akt 通路的影响

目的:研究红景天苷对人内皮祖细胞(EPCs)功能及其对磷酸肌醇3羟基激酶(PI3K)/Akt通路的影响。方法:体外培养正常人外周血EPCs,观察红景天苷或PI3K抑制剂的干预对EPCs增殖、黏附、迁移及一氧化氮(NO)分泌量的影响。MTT法检测细胞增殖、Westem blotting检测Ah蛋白表达。结果:与对照组比较,红景天苷能促进EPCs的增殖、黏附及迁移功能(P<0.05),促进EPCs分泌NO,增加细胞内磷酸化Akt蛋白的水平。但这些作用均被PI3K抑制剂LY294002抑制(P<0.05)。结论:红景天苷通过PI3K/Akt通路调节EPCs的功能。

木犀草素对气道平滑肌细胞PI3 K/AKT通路的影响

目的观察木犀草素对小鼠气道平滑肌细胞增殖的影响及其与PI3 K/AKT通路的关系。方法分离并培养小鼠气道平滑肌细胞,α-actin免疫细胞化学染色鉴定,细胞分4组:对照组、PDGF组、PDGF+LUT组、LUT组,MTT法检测细胞增殖,Western Blot方法观察p-AKT表达的变化。结果 MTT检测发现,PDGF刺激气道平滑肌细胞后A490值较对照组明显增加(P<0.01),PDGF+LUT组A490值较PDGF组明显降低(P<0.05),LUT组A490值较对照组无明显变化;Western Blot发现,对照组p-AKT极低,PDGF组明显升高,PDGF+LUT组p-AKT较PDGF组降低。结论木犀草素能够通过抑制AKT的磷酸化水平,限制体外培养的气道平滑肌细胞的PI3 K/AKT通路激活,从而发挥抑制小鼠气道平滑肌增殖的作用。

IL-13、COX2和PI3 K/Akt信号通路与结肠癌侵袭转移的关系

目的探讨IL-13、COX2和PI3K/Akt信号通路与结肠癌侵袭转移的关系.方法以体外培养结肠癌细胞株HCT-8为研究对象,分为3组,A组经IL-13单独作用,B组无IL-13或IFN-γ作用,C组经IFN-γ单独作用.RT-PCR法检测3组细胞IL-13、COX2、PIK3CA、Akt1、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的蛋白表达水平,并通过Transwell小室侵袭实验观察比较3组细胞的侵袭能力以及划痕实验观察比较3组细胞的48 h转移能力状况.结果与B组比较,A组IL-13处理后细胞COX2的mRNA相对表达量以及IL-13、COX2、p-AKT蛋白表达水平均提高,C组IFN-γ处理后细胞IL-13、COX2的mRNA相对表达量以及IL-13、COX2、p-AKT蛋白表达水平均降低(P<0.05).与C组比较,A组IL-13处理后细胞IL-13、COX2的mRNA相对表达量以及IL-13、COX2、p-AKT蛋白表达水平均较高(P<0.05).与同组处理前比较,A组IL-13处理后细胞COX2的mRNA相对表达量以及IL-13、COX2、p-AKT蛋白表达水平均提高,C组IFN-γ处理后细胞IL-13、COX2的mRNA相对表达量以及IL-13、COX2、p-AKT蛋白表达水平均降低(P<0.05).3组中,处理后,A组48 h细胞迁移距离最长且Transwell穿膜细胞数最多,其次为B组增加,再次为C组,差异有统计学意义(P<0.05).A组IL-13作用后细胞48 h细胞迁移距离和Transwell穿膜细胞数增加,C组IFN-γ处理后48 h细胞迁移距离和Transwell穿膜细胞数减少(P<0.05).结论IL-13、COX2和PI3K/Akt信号通路均与结肠癌侵袭转移相关,其中可能机制为IL-13调控COX2和PI3K/Akt信号通路促进结肠癌侵袭转移.

益智仁-乌药药对调控PI3K/Akt/mTOR通路介导细胞自噬保护肾小球足细胞的作用机制研究

目的研究益智仁-乌药药对通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路促进足细胞自噬治疗糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)的作用。方法60只造模成功的C57BL/KSJ-db/db(以下简称db/db)小鼠随机分为模型组、二甲双胍组、缬沙坦组、益智仁-乌药药对(低、中、高剂量)组,每组10只;另取10只C57BL/KSJ-db/m(以下简称db/m)小鼠为正常组,正常组和模型组给予生理盐水,治疗组小鼠分别给予相应药物,给药8周后检测小鼠肾脏病理学改变,足细胞自噬体数量、结构及相关蛋白表达。结果与模型组相比,益智仁-乌药药对组可显著减轻糖尿病肾病小鼠肾小球基底膜增厚情况,增加足细胞自噬体数量,显著升高自噬相关蛋白表达(P<0.05),降低PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达(P<0.05)。其中益智仁-乌药药对高剂量组各指标改善优于益智仁-乌药低、中剂量组。结论益智仁-乌药药对通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路激活,提高足细胞自噬水平,减轻足细胞损伤,发挥治疗糖尿病肾病的作用。

自拟平衡针灸通过调控PI3K-AKT信号通路及血清GABA水平对老年失眠的治疗作用

目的探讨自拟平衡针灸通过调控磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(AKT)信号通路及血清氨基丁酸(GABA)水平对老年失眠的治疗作用。方法以老年失眠患者120例作为研究对象,按照随机分组原则分为研究组及对照组,各60例。两组均采取阿普唑仑进行治疗,研究组在此基础上联合采取自拟平衡针灸进行治疗,两组均治疗4 w。比较两组治疗效果、临床改善指标、PI3K-AKT信号通路及GABA、多导睡眠监测仪指标、睡眠质量之间的差异。结果研究组治疗总有效率显著高于对照组(P<0.05)。治疗后,两组睡眠潜伏期、睡眠总时间及觉醒次数均显著改善,且研究组睡眠潜伏期、觉醒次数显著低于对照组(P<0.05),睡眠总时间显著高于对照组(P<0.05)。两组PI3K、AKT及GABA均显著改善,且研究组PI3K、AKT显著低于对照组,GABA显著高于对照组(P<0.05)。两组总睡眠时间(TST)、睡眠效率(SE),第一(TS1)、二(TS2)、三(TS3)及四期(TS4)睡眠、快速眼动睡眠时间(REM)、觉醒期时间(WASO)、睡眠潜伏期时间(SL)均显著改善,且研究组以上指标改善均显著优于对照组(P<0.05)。两组日间功能障碍、睡眠质量、睡眠时间、睡眠障碍及入睡时间均显著改善,且研究组日间功能障碍、睡眠质量、睡眠时间、睡眠障碍及入睡时间显著优于对照组(P<0.05)。结论自拟平衡针灸通过调控PI3K-AKT信号通路及血清GABA水平,有效降低局部炎性反应,优化神经系统的递质传递,有效改善患者的治疗效果。

重楼皂苷Ⅰ预防给药对心肌缺血再灌注损伤大鼠调节PI3K/AKT信号通路的作用研究

目的 从磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路探讨重楼皂苷I预防给药对心肌缺血再灌注损伤(MI/IR)大鼠的干预机制。方法 将购买的72只SPF级SD大鼠按照随机数字法分为假手术组、模型组、阿司匹林组、重楼皂苷I低、中和高剂量组,每组12只。分组后即给予相应药物干预2周,2周后构建MI/IR模型。模型构建成功24 h后先采用动物彩色多普勒超声仪检测心脏功能,后处死大鼠收集相关组织采用HE染色观察心肌病理学、TTC法检测心肌梗死面积,试剂盒检测心功能指标[乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)和谷草转氨酶(AST),抗氧化指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)],TUNNEL染色检测心肌细胞凋亡特点,Western blot检测心肌PI3K、AKT、B细胞淋巴瘤/因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)蛋白表达。结果 假手术组心肌纤维排列整齐、无水肿,模型组有心肌纤维断裂,重楼皂苷I低、中、高剂量组和阿司匹林组明显改善心肌纤维断裂情况。与假手术组相比,模型组大鼠心肌梗死面积、LVEDP、LDH、CK-MB、AST和MDA明显升高(P<0.05),LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax、SOD和GSH明显降低(P<0.05);相较于模型组,阿司匹林组和重楼皂苷I低、中、高剂量组干预后,心肌梗死面积、LVEDP、LDH、CK-MB、AST和MDA明显降低(P<0.05),LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax、SOD和GSH则明显升高(P<0.05)。Tunnel染色可见,假手术组几乎没有心肌细胞凋亡,而模型组呈现出明显的大量的细胞凋亡;与模型组相比,阿司匹林组和重楼皂苷I低、中、高剂量组凋亡情况明显好转。此外,与假手术组相比,模型组大鼠心肌PI3K、AKT和Bcl-2蛋白表达均明显降低,Bax明显升高(均P<0.05);相较于模型组,重楼皂苷I低、中、高剂量组以及阿司匹林组PI3K、AKT和Bcl-2蛋白表达均明显升高,Bax蛋白表达明显降低(均P<0.05)。结论 重楼皂苷I对心肌缺血再灌注损伤有一定的预防作用,其作用机理可能与其能够调节PI3K/AKT信号通路有关。

(Pyr1)Apelin-13对布比卡因诱导停搏乳鼠心肌细胞PI3K/Akt通路的干预

目的:探讨Apelin/APJ系统在逆转布比卡因心肌毒性中的作用及机制。方法:提取乳鼠心肌细胞进行原代培养,随机分为4组:空白培养基组(DMSO组)、布比卡因1 mmol/L(Bup组)、(Pyr1)Apelin-132μmol/L组(Apl组)和布比卡因1 mmol/L+(Pyr1)Apelin-132μmol/L组(BAp组)。记录各组细胞基础自主搏动次数后,按照相应分组给药处理6 h。处理完毕后时间记为T0,记录T0至T12不同时间的细胞搏动次数;电镜下观察T12时心肌细胞线粒体形态;比色法检测T12时细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)含量;ELISA检测T12时心肌细胞中Apelin-13浓度;Western blot检测T12时心肌细胞中APJ、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白的表达。结果:T0时Bup组全部心肌细胞停止搏动。与DMSO组比较,Bup组细胞搏动次数显著减少(P<0.05),线粒体肿胀空泡化,培养液LDH含量明显上升(P<0.05),心肌细胞中Apelin-13、APJ、p-PI3K和p-Akt蛋白表达均下调(P<0.05)。与Bup组比较,BAp组细胞搏动次数显著增加(P<0.05),线粒体结构明显改善,培养液LDH含量明显下降(P<0.05),心肌细胞中Apelin-13,APJ、p-PI3K和p-Akt蛋白表达均上调(P<0.05)。结论:(Pyr1)Apelin-13可逆转布比卡因诱导的心肌细胞停搏,机制也许与激活PI3K/Akt蛋白磷酸化有关。

Yes相关蛋白(YAP)通过激活PI3K/AKT通路促进皮肤鳞状细胞癌细胞侵袭和迁移

目的探讨Yes相关蛋白(YAP)在皮肤鳞状细胞癌(cSCC)中表达及与cSCC侵袭和迁移中的作用。方法通过免疫组织化学染色法检测cSCC、鲍温病(BD)、癌旁正常皮肤组织中YAP的表达水平,并分析与临床病理参数之间的关系;利用慢病毒转染构建YAP基因敲低的A431稳定细胞株,利用四甲基罗丹明标记的鬼笔环肽检测A431细胞微丝分布和数量,Transwell TM实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测A431细胞的迁移能力;免疫荧光细胞化学染色法观察敲低YAP后上皮间质转化(EMT)相关标志物上皮钙黏素(E-cadherin)、锌指转录因子Snail的表达;Western blot法检测E-cadherin、Snail、β-catenin、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、核糖体蛋白S6(S6)、磷酸化S6(p-S6)、4E结合蛋白1(4EBP1)、磷酸化的4EBP1(p-4EBP1)的表达。结果YAP在cSCC和BD中表达显著高于癌旁正常皮肤组织;cSCC中YAP高表达与肿瘤大小、分化程度、侵袭程度密切相关,与患者的性别、年龄、发病部位、形态类型、是否神经脉管侵犯不相关;敲低A431细胞中YAP后,肿瘤细胞的侵袭、迁移能力降低,细胞微丝变细、伪足变少;E-cadherin表达增加,Snail和β-catenin蛋白表达降低,p-AKT、p-S6及p-4EBP1蛋白表达降低。结论YAP在cSCC中高表达,YAP激活PI3K/AKT信号通路促进cSCC的侵袭、迁移及EMT过程。

基于PI3K/Akt通路研究蛇伤胶囊调节血小板活化功能治疗竹叶青蛇伤凝血障碍机制

目的基于PI3K/Akt通路研究蛇伤胶囊调节血小板活化功能治疗竹叶青蛇伤凝血障碍机制。方法24只新西兰大白兔被随机分为正常对照组、模型组、蛇伤胶囊组,每组8只雌雄各半,根据前期研究方法模型组和蛇伤胶囊组以兔耳缘静脉注射0.75 mg/kg竹叶青蛇毒液,建立竹叶青蛇伤兔模型,正常对照组注射等量生理盐水。注射后6 h后予正常对照组和模型组以10 ml/(kg·d)生理盐水灌胃,蛇伤胶囊组予10 ml/(kg·d)蛇伤胶囊所配药液灌胃。以上3组连续灌胃1周后兔耳缘静脉采血5 ml,血小板分离提取后Western blot检测各组血小板细胞PTEN、PI3K、Akt蛋白表达,qPCR检测各组血小板活化指标CD62P mRNA表达。结果与正常对照组相比,模型组血小板细胞PTEN蛋白表达增加(P<0.01),PI3K、Akt蛋白及CD62P mRNA表达减少(P<0.01);与模型组相比,蛇伤胶囊组血小板细胞PTEN蛋白表达减少(P<0.01),PI3K、Akt蛋白及CD62P mRNA表达增加(P<0.01)。结论蛇伤胶囊可通过上调PI3K/Akt通路,改善竹叶青蛇伤导致的血小板活化功能受抑制,从而治疗竹叶青蛇伤凝血障碍。

黄芪影响缺氧微环境中骨髓间充质干细胞增殖活性的PI3K-AKT信号通路分析

基于PI3K/AKT信号通路研究黄芪对缺氧环境中骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的细胞活性的影响。分别以黄芪冻干粉溶液低、中、高剂量(100、200和300μg·mL^(-1))干预低氧浓度(10%)环境中成骨分化培养的BMSCs,通过高内涵实时成像系统观察BMSCs动态增殖情况及分化代数;进行无标记示踪模拟细胞运动轨迹,分析各组细胞运动速度、位移距离和路程的情况;通过激光共聚焦显微镜观察细胞线粒体膜电位,通过免疫荧光和RT-PCR检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白和基因表达水平的变化。结果显示:与对照组相比,10%低氧浓度条件下BMSCs增殖减慢、分化代数减少,运动速度减慢,位移距离和路程减少,线粒体膜电位活性降低,p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低,PI3K和AKT基因表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.01);与低氧组相比,黄芪冻干粉溶液干预后,能显著维持缺氧环境中BMSCs增殖和分化活性,运动活力升高,线粒体膜电位活性提高,p-JAK2、p-STAT3蛋白和PI3K、AKT基因表达升高,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。黄芪可能通过激活PI3K/AKT信号通路维持缺氧条件下BMSCs的增殖活性。

基于PI3K/Akt/p53信号通路探讨白花蛇舌草乙酸乙酯萃取物诱导急性髓系白血病细胞凋亡的作用

目的通过评估白花蛇舌草乙酸乙酯萃取物(EAEHDW)对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/p53信号通路传导调节作用,探讨其抑制急性髓系白血病M2型(AML-M2)细胞株Kasumi-1增殖及诱导凋亡的机制。方法利用乙酸乙酯从白花蛇舌草中萃取制备得到EAEHDW,高效液相色谱串联质谱装置检测样品纯度。设置空白组,将浓度分别为0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL、0.08 mg/mL、0.10 mg/mL的EAEHDW加入对数生长期的Kasumi-1细胞株,采用MTT法检测不同浓度EAEHDW作用不同时间后Kasumi-1细胞存活率,采用Annexin V/PI流式细胞术检测不同浓度EAEHDW作用24 h后Kasumi-1细胞凋亡情况,采用Western blot法检测不同浓度EAEHDW(0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL)作用24 h后Kasumi-1细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)家族蛋白及PI3K/Akt/p53信号传导通路蛋白表达情况。结果不同浓度的EAEHDW干预后,细胞存活率较空白组明显降低,细胞凋亡率较空白组明显升高,且细胞存活率随着作用时间的延长和药物浓度的增加而下降越明显,细胞凋亡率随着药物浓度的增加而升高越明显,差异均有统计学意义(P均<0.05);不同浓度的EAEHDW作用于Kasumi-1细胞后,细胞中多聚ADP核糖聚合酶(PARP)、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、细胞色素C(Cyto-C)、p53蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、鼠双微染色体2(MDM2)、磷酸化MDM2(p-MDM2)蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。结论EAEHDW可明显抑制髓系白血病Kasumi-1细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与影响Caspase家族蛋白表达和抑制PI3K/Akt/p53信号通路导致p53激活有关。

中医滋阴潜阳法对多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗大鼠PI3K/Akt信号通路、性激素及胰岛素相关指标的影响

目的探讨中医滋阴潜阳法对多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)伴胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)大鼠的磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路、性激素及胰岛素相关指标的影响。方法以来曲唑加高脂饲料诱导建立多囊卵巢及胰岛素抵抗双重大鼠模型。采用滋阴潜阳法配合达英-35及二甲双胍干预,用免疫荧光法测定卵巢PI3K、Akt通路信号,实时荧光定量PCR检测卵巢PI3K、Akt途径信号分子mRNA表达及PI3K、Akt、胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate 1,IRS-1)、胰岛素受体(insulin receptor,INSR)蛋白表达,性激素、胰岛素生长因子-1(insulin-like growth factor 1,IGF-1),胰岛素敏感指数(insulin sensitivity index,ISI),观察卵巢组织形态变化。结果中医滋阴潜阳法能显著增加卵巢PI3K、Akt mRNA相对表达量(P<0.05),并能显著增加卵巢PI3K、Akt蛋白表达,上调IRS-1、INSR,降低血清睾酮(testos teron,T)、促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)含量,调节ISI,增加卵巢颗粒细胞层数及黄体组织数量。结论中医滋阴潜阳法可提高PI3K/Akt通路信号表达水平,改善胰岛素抵抗及卵泡颗粒细胞功能,调节促黄体生成素/卵泡刺激素(LH/FSH)比值,控制LH异常增高,调节多囊卵巢综合征及胰岛素抵抗。

布比卡因通过PI3K/AKT/mTOR通路对膀胱癌细胞凋亡和铁死亡的影响

目的 探讨布比卡因对膀胱癌细胞凋亡和铁死亡的影响及其机制。方法 常规培养人膀胱癌细胞(T24和5637)和人尿路上皮细胞(SV-HUC-1),MTT实验检测布比卡因细胞毒性,筛选合适处理浓度,将T24和5637细胞分为对照组、0.25、0.5和1 mmol/L布比卡因组、布比卡因+铁死亡激动剂(Erastin)组、布比卡因+铁死亡抑制剂(Fer-1)组细胞和布比卡因+PI3K激动剂(740Y-P)组。采用流式细胞术检测细胞凋亡率,相应试剂盒检测Fe^(2+)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和活性氧(ROS)水平,Western blot检测Bcl-2、Bax、细胞色素C、xCT、GPX4和磷脂酰肌醇3/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)相关蛋白表达。结果 0.25、0.5、1、2、4、8、16 mmol/L布比卡因均可明显抑制T24和5637细胞的活性(P<0.001),选择仅对癌细胞有毒性的0.25、0.5和1 mmol/L布比卡因进行后续研究。与对照组比较,随着布比卡因浓度增加,T24和5637细胞凋亡率、Fe^(2+)、ROS和MDA水平逐渐升高,GSH水平逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.001);与1 mmol/L布比卡因组比较,布比卡因+Erastin组Fe^(2+)水平升高,而布比卡因+Fer-1组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组比较,布比卡因组细胞色素C蛋白表达增高,Bax/Bcl-2、xCT、GPX4表达,以及PI3K p85α/PI3K、p-AKT(Thr308)/AKT、p-AKT(Ser473)/AKT和p-mTOR(Ser2448)/mTOR比值降低,差异有统计学意义(P<0.001)。验证实验结果显示,与对照组比较,布比卡因+740Y-P组细胞活力和GSH水平升高,Fe^(2+)水平和细胞色素C蛋白表达降低(P<0.001)。结论 布比卡因可通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路激活诱导膀胱癌细胞凋亡和铁死亡。

达沙替尼基于PI3K/AKT信号通路调节乳腺癌细胞生物学行为

目的:基于PI3K/AKT信号通路探讨达沙替尼(dasatinib,DAS)对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响。方法:分别使用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法、Transwell法、流式细胞术和Western blotting法检测DAS不同浓度(0、2、6、10μmol/L)作用下MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移、细胞凋亡以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达情况。同时设置对照组(溶媒对照)、DAS组(DAS 10μmol/L)、PI3K抑制剂组(LY29400220μmol/L)、联合组(DAS 10μmol/L+LY29400220μmol/L),比较各组细胞增殖、侵袭和迁移、细胞凋亡以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达情况。结果:随着DAS作用浓度的升高,MCF-7细胞增殖抑制率和细胞凋亡率升高(P<0.05),侵袭细胞数、迁移细胞数和PI3K、p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低(P<0.05)。与对照组相比,DAS组、PI3K抑制剂组、联合组MCF-7细胞增殖抑制率和细胞凋亡率升高(P<0.05),PI3K、p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低。与PI3K抑制剂组、DAS组相比,联合组MCF-7细胞增殖抑制率和细胞凋亡率升高,PI3K、p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低(P<0.05)。结论:DAS能抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移能力,诱导细胞凋亡,其机制可能与调控PI3K/AKT信号通路有关。

生长分化因子11激活PI3K/Akt信号途径促进糖尿病小鼠ADSCs体外矿化的研究

目的探讨生长分化因子11(GDF11)对糖尿病小鼠来源的脂肪间充质干细胞(ADSCs)成骨分化的影响及信号机制。方法分离、培养糖尿病小鼠ADSCs。流式细胞术检测GDF11对ADSCs增殖的影响。成骨诱导培养后,检测碱性磷酸酶(ALP)活性,实时荧光定量PCR(qPCR)检测成骨相关基因的表达,Western blot检测PI3K、Akt的磷酸化水平。结果GDF11不影响ADSCs增殖,呈浓度依赖性地增强ALP活性,且具有饱和性;显著上调Runx2[(2.41±0.19)vs.(1.00±0.11)]、Osx[(1.41±0.21)vs.(1.00±0.10)]和ALP[(1.42±0.20)vs.(1.00±0.09)]的表达(P<0.05);明显提高PI3K[(2.84±0.19)vs.(1.00±0.11)]和Akt[(4.58±0.20)vs.(1.00±0.19)]的磷酸化水平(P<0.05)。而且,GDF11促进糖尿病小鼠ADSC s成骨分化的作用被PI3K抑制剂LY294002部分减弱。结论GDF11促进糖尿病小鼠ADSCs骨向分化,其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。

栀子苷调节PI3K/AKT/mTOR信号通路在动脉粥样硬化形成过程中对Th17/Treg功能的影响

目的:观察栀子苷对载脂蛋白E缺乏(ApoE^(-/-))小鼠Th17/调节性T(Treg)细胞失衡的影响及其作用机制。方法:将50只纯合子ApoE^(-/-)雌性小鼠随机分为对照组、模型组和栀子苷低剂量组、栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组。对照组小鼠喂养普通饲料,模型组和栀子苷组小鼠喂养高脂饲料。从第8周开始,栀子苷各剂量组每日灌胃栀子苷(25、50、100 mg/kg),连续8周。试验结束时,采用油红O染色评估主动脉及其根部动脉粥样硬化(AS)病变面积比。采用定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析主动脉组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-17A和IL-10 mRNA表达;采用流式细胞仪分析脾脏中Th17和Treg细胞百分比;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测主动脉组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达。结果:油红O染色病变显示,栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组病变百分比低于模型组(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平升高(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平降低(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠脾脏中Th17细胞百分比升高,Treg细胞百分比降低(P<0.05)。栀子苷处理恢复了AS小鼠Th17和Treg细胞的平衡。栀子苷抑制PI3K的表达及AKT和mTOR的磷酸化,MHY1485(mTOR活化剂)减弱了栀子苷对T细胞分化的影响。结论:栀子苷抗AS作用机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号引起的Treg细胞增多和Th17细胞减少有关。