中药复方金思维含药血清调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路对拟阿尔茨海默病细胞模型tau蛋白磷酸化的影响

目的探讨中药复方金思维含药血清对拟阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)细胞模型tau蛋白磷酸化的影响及作用机制。方法采用Aβ25-35诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)建立拟AD细胞模型,CCK-8法筛选金思维含药血清、PI3K/AKT/GSK-3β通路抑制剂LY294002最佳作用浓度。将SH-SY5Y细胞分为正常组、模型组、金思维低剂量组、金思维中剂量组、金思维高剂量组以及LY294002组。蛋白免疫印迹法检测金思维含药血清对SH-SY5Y细胞tau蛋白磷酸化以及PI3K/AKT/GSK-3β通路相关蛋白的影响。结果20μmol/L Aβ25-35作用于SH-SY5Y细胞24 h可建立最佳拟AD细胞模型。相对于正常组,模型组P-AKT显著降低(P<0.05),P-tau显著升高(P<0.01)。相对于模型组,金思维低剂量含药血清组PI3K的表达量显著升高(P<0.05),高剂量含药血清组GSK-3β的表达量显著降低(P<0.05),中剂量和高剂量含药血清组P-tau的表达量显著降低(P<0.01、P<0.001)。加入通路抑制剂LY294002后,P-PI3K、PI3K、P-AKT、AKT、GSK-3β、P-tau蛋白的表达量较模型组差异无统计学意义(P>0.05)。结论金思维含药血清可降低拟AD细胞模型tau蛋白磷酸化水平,其机制可能与PI3K/AKT/GSK-3β通路的激活有关。

葛根素通过抑制PI3K/Akt/GSK-3β信号通路诱导人肾癌786-O细胞凋亡的研究

目的研究葛根素对人肾癌786-O细胞凋亡的影响及其机制。方法分别以DMSO(空白对照组)、不同浓度葛根素(10、20、40 mg/L)和PI3K抑制剂LY29400215 mg/L干预对数生长期人肾癌786-O细胞48 h,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(Tyr317)[p-PI3K(Tyr317)]、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(Ser473)[p-Akt(Ser473)]、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、磷酸化GSK-3β(Ser21)[p-GSK-3β(Ser21)]、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、激活型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果与空白对照组比较,葛根素10、20、40 mg/L组和LY29400215 mg/L组786-O细胞增殖抑制率升高[(17.04±2.92)%、(26.48±4.77)%、(42.79±6.81)%、(35.73±6.12)%比(3.47±0.53)%,P<0.01]、凋亡率升高[(13.72±2.38)%、(30.41±4.05)%、(55.39±6.72)%、(36.08±4.32)%比(2.64±0.51)%,P<0.01]。与空白对照组比较,葛根素20、40 mg/L组和LY29400215 mg/L组786-O细胞p-PI3K(Tyr317)、p-Akt(Ser473)、p-GSK-3β(Ser21)、Bcl-2表达下调[p-PI3K(Tyr317):(0.58±0.13)、(0.32±0.07)、(0.38±0.08)比(1.03±0.24);p-Akt(Ser473):(0.25±0.06)、(0.09±0.03)、(0.11±0.03)比(0.51±0.12);p-GSK-3β(Ser21):(0.12±0.03)、(0.07±0.02)、(0.09±0.03)比(0.58±0.13);Bcl-2:(0.31±0.08)、(0.18±0.05)、(0.21±0.07)比(0.48±0.12),P均<0.01],Caspase-9、Cleaved Caspase-3、Bax表达上调[Caspase-9:(0.37±0.08)、(0.66±0.13)、(0.58±0.11)比(0.17±0.04);Cleaved Caspase-3:(0.25±0.06)、(0.72±0.16)、(0.43±0.12)比(0.11±0.03);Bax:(0.36±0.08)、(0.62±0.12)、(0.20±0.05)比(0.08±0.02),P均<0.01],PI3K、Akt、GSK-3β磷酸化率降低[PI3K磷酸化率:(0.55±0.15)、(0.29±0.08)、(0.34±0.09)比(0.92±0.28);Akt磷酸化率:(0.24±0.07)、(0.09±0.03)、(0.11±0.04)比(0.53±0.14);GSK-3β磷酸化率:(0.14±0.04)、(0.08±0.03)、(0.10±0.04)比(0.62±0.15),P均<0.01],Bax/Bcl-2比值升高[(1.16±0.27)、(3.41±0.65)、(0.95±0.22)比(0.17±0.04),P<0.01]。与LY29400215 mg/L组比较,葛根素40 mg/L组786-O细胞增殖抑制率升高[(42.79±6.81)%比(35.73±6.12)%,P<0.05]、凋亡率升高[(55.39±6.72)%比(36.08±4.32)%,P<0.01],Cleaved Caspase-3、Bax表达上调[Cleaved Caspase-3:(0.72±0.16)比(0.43±0.12);Bax:(0.62±0.12)比(0.20±0.05),P均<0.01],Bax/Bcl-2比值升高[(3.41±0.65)比(0.95±0.22),P<0.01],两组间其他指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论葛根素具有诱导人肾癌786-O细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt/GSK-3β信号通路有关。

PI3K/Akt/GSK-3β信号通路在6-姜酚保护PC12细胞对抗β淀粉样蛋白诱导细胞凋亡的作用

研究6-姜酚对β淀粉样蛋白(Aβ1-42)引起的PC12细胞凋亡的保护作用及其可能的分子信号通路。通过MTT检测不同浓度Aβ1-42对PC12细胞的作用及不同浓度6-姜酚对Aβ1-42诱导细胞凋亡的保护作用,采用蛋白免疫印迹法检测6-姜酚对Aβ1-42诱导的PC12细胞糖原合成激酶3β(GSK-3β)、磷酸化GSK-3β(Ser9),Akt及磷酸化Akt(Ser473)表达的影响。结果显示6-姜酚能显著减少Aβ1-42引起的细胞凋亡;PC12细胞经Aβ1-42作用48 h后,80及120μM 6-姜酚预处理组中GSK-3β及Akt的磷酸化水平则均显著高于Aβ1-42处理组的。说明6-姜酚对抗Aβ1-42引起的细胞毒性作用,可能与其激活Akt的活性、抑制GSK-3β的活性有关。

基于PI3K/Akt/GSK-3β信号通路探讨稳心丹对MIRI大鼠心肌保护作用的机制研究

目的:探讨稳心丹对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌保护作用及机制研究。方法:将SPF级SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、稳心丹组、LY294002组,每组6只。采取左冠状动脉前降支先结扎30 min,再灌注60 min。酶联免疫法检测血清中CK、LDH含量;TTC染色法计算大鼠心肌梗死面积;TUNEL法检测细胞凋亡指数;Western blot法检测p-Akt、p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组CK与LDH含量显著增高、细胞凋亡指数明显升高、p-Akt及p-GSK-3β(Ser9)水平明显降低(P<0.01)、心肌梗死面积增大(P<0.05);与模型组比较,稳心丹组CK与LDH含量显著降低、心肌梗死面积明显减少、细胞凋亡指数明显降低、p-Akt及p-GSK-3β(Ser9)蛋白水平明显升高(P<0.01);与稳心丹组比较,LY294002组CK与LDH含量明显升高、心肌梗死面积明显增多、细胞凋亡指数明显升高、p-Akt及p-GSK-3β(Ser9)蛋白水平明显降低(P<0.01)。结论:稳心丹对心肌具有保护作用,其机制与激活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路、抑制心肌细胞凋亡、减轻心肌组织损伤有关。

基于PI3K/Akt/GSK-3β信号通路探讨益智治呆方对AD模型大鼠学习记忆能力的影响及其作用机制

目的:观察益智治呆方对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力的影响,探讨其促进认知功能恢复的作用机制。方法:将50只大鼠随机分为假手术组10只和手术组40只,手术组建立AD大鼠模型后随机分为模型组、治疗组、对照组。术后第10天开始定时灌胃给药,治疗第28天行Y形迷宫检测学习记忆能力,采用免疫组织化学方法观察海马中央注射区β-淀粉样蛋白(Aβ)的表达情况;应用TUNEL试剂盒检测海马中央注射区神经细胞的凋亡情况;采用Western blotting检测PI3K、t-Akt、p-Akt、t-GSK-3β、p-GSK-3β、Bcl-2、Bax的蛋白表达水平。结果:益智治呆方、多奈哌齐均能改善AD大鼠学习记忆能力(P<0.05);与模型组比较,治疗组和对照组海马中央注射区β-淀粉样蛋白表达、凋亡细胞率明显减少(P<0.05),PI3K、p-Akt、p-GSK-3β、Bcl-2等抗凋亡蛋白表达增多(P<0.05),t-GSK-3β、Bax等促凋亡蛋白表达减少(P<0.05);治疗组上述指标与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:益智治呆方能够有效改善AD模型大鼠学习记忆能力,降低Aβ神经毒性,减少神经元细胞凋亡,其机制可能是通过PI3K/Akt/GSK-3β信号通路调控凋亡蛋白表达。

外源性硫化氢对APP/PS1小鼠tau蛋白磷酸化及对PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的影响

目的探讨外源性硫化氢(H2S)对APP/PS1转基因小鼠海马区tau蛋白磷酸化及对PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的影响。方法将7月龄APP/PS1小鼠20只,随机分为模型组及硫氢化钠(NaHS)组,每组10只;另取同龄C57BL/6小鼠作为对照组,连续腹腔注射NaHS共6周,每天1次。HE染色检测脑组织病理学改变;TUNEL检测小鼠海马区神经细胞凋亡情况;Morris水迷宫检测各组小鼠的学习与记忆能力;免疫组化检测各组小鼠海马区tau、p-tau(Ser-202)、p-tau(Thr-231)及p-tau(Ser-396)蛋白表达情况;Western blot检测PI3K、Akt、GSK-3β、p-Akt及p-GSK-3β蛋白的表达。结果与模型组相比,NaHS组小鼠脑组织病理损伤明显改善;小鼠海马区神经细胞凋亡数量明显降低;小鼠逃避潜伏期明显缩短,单位时间内目标象限停留时间延长,穿台次数增加;p-tau(Ser-202)、p-tau(Thr-231)及p-tau(Ser-396)蛋白表达明显降低;同时,PI3K、p-Akt蛋白水平增加,而p-GSK-3β蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NaHS可减少神经细胞凋亡,抑制tau蛋白磷酸化,改善学习记忆能力,其机制可能与调控PI3K/Akt/GSK-3β信号通路活性有关。

Pes1通过PI3K/AKT/GSK-3β信号通路对胆汁淤积性肝病小鼠的作用

目的探讨Pescadillo同源蛋白1(Pes1)以及PI3K/AKT/GSK-3β信号通路中的蛋白在胆汁淤积性肝病小鼠中的表达及其对疾病的影响。方法利用喂食3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢-2,4,6-三甲基吡啶(DDC)的C57BL/6为实验组,正常喂饲的C57BL/6为对照组。首先测试小鼠血清中生化指标的水平。Western blot法检测小鼠肝脏Pes1和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB/AKT)/糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)信号通路中蛋白的表达,同时采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测Pes1 mRNA的表达水平。结果血清中总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(AKP)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)水平在胆汁淤积性肝病小鼠中高于对照组。Pes1 mRNA和蛋白水平在胆汁淤积性肝病小鼠中均低于正常组小鼠,PI3K/AKT/GSK-3β信号通路中的磷酸化蛋白水平在胆汁淤积性肝病小鼠均明显低于对照组小鼠。结论Pes1在胆汁淤积性肝病小鼠中低表达,降低的Pes1使PI3K/AKT/GSK-3β信号通路失活,使其信号通路中PI3K和AKT的磷酸化蛋白水平依次降低,最终下调了磷酸化GSK-3β的表达,使磷酸化GSK-3β对肝细胞凋亡的抑制、减轻细胞损伤的作用减弱,进而加重了胆汁淤积性肝病的进程。

恒古骨伤愈合剂通过PI3K/AKT/GSK-3β信号通路治疗树鼩绝经后骨质疏松的作用机制

目的探讨恒古骨伤愈合剂(OK)通过磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成酶(GSK)-3β信号通路治疗绝经后骨质疏松(PMOP)的作用。方法 12月龄雌性实验树鼩60只,随机分成正常组、PMOP模型组、PMOP模型加低剂量OK组、PMOP模型加中剂量OK组、PMOP模型加高剂量OK组及PMOP模型加阳性药对照组,每组10只。通过摘除两侧卵巢制备PMOP树鼩模型,检测各组树鼩骨密度(BMD),收集血清和骨骼,检测血清雌二醇(E2)、骨碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(OC)和Ⅰ型原胶原N-端前肽(PINP)浓度;分别采用RT-qPCR和Western印迹法检测PI3K、AKT和GSK-3β的表达水平。结果 OK能提高模型组的BMD及其血清中E2、BALP、OC和PINP浓度,并且OK还能上调PI3K的表达水平和AKT的磷酸化水平,下调GSK-3β的表达水平,疗效均具有剂量依赖性。结论 OK可以通过促进骨细胞增殖的作用缓解PMOP,这种治疗作用可能是通过调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路实现的。

CK2α通过PI3K/Akt/GSK-3β信号通路调控肺腺癌A549细胞的侵袭及迁移

背景与目的肺癌已成为全球癌症死亡的首要原因,而侵袭和转移是导致肿瘤死亡的主要原因之一,蛋白激酶CK2是一种高度保守信使非依赖性丝氨酸苏氨酸蛋白激酶,其在各种肿瘤中高表达。本研究旨在探讨下调CK2α基因表达对肺腺癌A549细胞侵袭迁移的影响以及可能的机制。方法构建p SilencerTM4.1-sh CK2α-e GFP慢病毒表达载体,建立稳定干扰CK2α表达的A549细胞株。利用Transwell和Boyden小室实验检测干扰CK2α表达前后A549细胞的侵袭及迁移的能力。Western blot检测PI3K/Akt信号通路和上皮-间充质转化(mesenchymal-to-epithelial transition,EMT)相关蛋白的表达。结果与对照组相比,干扰CK2α表达后肺腺癌A549细胞的侵袭及迁移能力明显下降,p-PTEN、Akt、p-Akt473、p-Akt308、p-PDK1、p-c-Raf、p-GSK-3β蛋白明显下调,PTEN蛋白表达水平显著上调。上皮-间充质转化的相关蛋白E-cadherin蛋白表达水平显著上调,而Vimentin、β-catenin、Snail蛋白表达水平显著下调,与侵袭转移相关蛋白的MMP2、MMP9表达水平显著下调。结论 CK2α可能通过PI3K/Akt/GSK-3β/Snail信号通路来调控上皮-间充质转化参与肺腺癌A549细胞的侵袭及迁移。

人参皂苷Rh2调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路诱导人结肠癌细胞凋亡

目的探究人参皂苷Rh2(ginsenoside Rh2,Rh2)诱导人结肠癌细胞SW480凋亡作用机制。方法 CCK-8法检测Rh2对SW480细胞增殖的影响;流式细胞术(Flow cyto Metry,FCM)检测Rh2对SW480细胞凋亡的影响;Hoechst33258染色观察Rh2对SW480细胞凋亡形态学的影响;Western blot检测经Rh2诱导SW480细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53、cleaved caspase-3,PI3K/AKT/GSK-3β信号通路相关蛋白PI3K、AKT、P-AKT、GSK-3β、P-GSK-3β表达量变化;LY294002、Rh2单独及联合诱导SW480细胞后,蛋白PI3K、AKT、P-AKT、GSK-3β、P-GSK-3β表达量变化。结果CCK-8结果显示Rh2呈时间浓度依赖抑制SW480细胞增殖。FCM结果显示细胞早期凋亡率由正常对照组的(0.70±0.09)%增至(11.06±1.04)%(P<0.05)。Hoechst33258结果显示,Rh2诱导SW480细胞48h后呈现典型的凋亡形态学改变。Western blot结果显示,经Rh2诱导的SW480细胞,凋亡相关蛋白Bcl-2表达降低,Bax、p53、激活型胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)蛋白表达增加;PI3K/AKT/GSK-3β信号通路蛋白PI3K、P-AKT、P-GSK-3β表达量与对照组比较明显减少,AKT、GSK-3β表达量无明显变化;LY294002、Rh2和LY294002与Rh2联合诱导SW480细胞后,总AKT蛋白和总GSK-3β蛋白表达量基本一致,LY294002与Rh2联合用药对SW480细胞中PI3K、P-AKT和P-GSK-3β的表达抑制作用较单独用药更加明显。结论Rh2可能是通过抑制PI3K/AKT/GSK-3β通路,激活p53信号通路,激活caspase-3,破坏Bcl-2/Bax比例,诱导结肠癌细胞SW480凋亡。

低温胁迫对鱼类PI3K/AKT/GSK-3β信号通路的影响

为探讨PI3K/AKT/GSK-3β信号通路在鱼类低温胁迫中的分子机制,利用3种抗寒能力不同的鱼类:斑马鱼(Danio rerio)、罗非鱼(Oreochromis niloticus)和草鱼(Ctenopharyngodon idellus),对其进行低温胁迫(8℃),监测这3种鱼鱼鳃中PI3K/AKT/GSK-3β信号通路中蛋白表达情况。结果表明:1)在相同低温胁迫下,3种鱼运动能力为:草鱼>斑马鱼>罗非鱼;2)Western blot结果表明:在罗非鱼中,低温抑制了p-PTEN蛋白的表达;诱导了AKT、p-AKT(Ser 473)和p-GSK-3β(Ser 9)蛋白的表达。在斑马鱼和草鱼中,低温都抑制了AKT和p-AKT(Ser473)蛋白的表达;诱导了p-GSK-3β(Ser 9)蛋白的表达。尽管低温一致性诱导p-GSK-3β(Ser 9)在3种鱼中的表达,但其呈现不同的变化倍数:罗非鱼中p-GSK-3β蛋白的上升倍数显著高于其他两种鱼。低温诱导了PI3K/AKT/GSK-3β信号通路,在不同低温耐受能力的鱼中呈现出不同的表达模式,这些物种特异性的表达模式可能会影响鱼类低温下不同的耐受能力。

H_2S在PI3K/AKT/GSK-3β信号通路中对大鼠肝纤维化的影响

目的:探讨硫化氢(sodium hydrogen,H2S)在磷酯酰肌醇3激酶(phosphoinositide-3-kinase,PI3K)/AKT/糖原合成酶激酶-3β(glycogensynthesis kinase-3β,GSK-3β)信号通路中对大鼠肝纤维化的影响.方法:选择硫氢化钠(sodium hydrogen,NaHS)作为H2S的供体,LY294002作为PI3K/AKT的特异性阻断剂.将48只♀SD大鼠随机分为6组:正常对照组(N组)8只、肝纤维化组(C组)8只、肝纤维化+DMSO溶剂对照组(D组)8只、肝纤维化+PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002组(LY组)8只、肝纤维化+NaHS组(S组)8只、肝纤维化+LY294002+NaHS组(LS组)8只,采用四氯化碳复合因素复制肝纤维化模型,干预剂以腹腔注射,1次/d,共注射12次.具体如下:(1)N组和C组:腹腔注射0.9%氯化钠注射液,剂量为6 mL/kg体质量;(2)D组:腹腔注射2‰DMSO溶液,剂量为6 mL/kg体质量;(3)LY组:腹腔注射LY294002溶液,剂量为0.3 mg/(kg?d);(4)S组:腹腔注射NaHS溶液,剂量为56μmol/(kg?d);(5)LS组,同时注射LY294002溶液和NaHS溶液,剂量同LY组和S组,将两种溶液于腹腔的两侧注入,而非同侧腹腔注射.干预结束后,宰杀大鼠留取肝脏行肝组织病理切片HE染色评价肝纤维化分期,应用Western blot法检测肝脏中GSK-3β表达.结果:NaHS干预组和肝硬化组相比,GSK-3β表达下降(P<0.01),与肝纤维化分期结果一致(P<0.01).与LY294002+NaHS干预组相比较,GSK-3β在LY294002干预组中表达增高(P<0.01);在NaHS干预组中表达下降(P<0.01),与肝纤维化分期结果一致(P<0.01).结论:H2S可以通过PI3K/AKT信号通路抑制GSK-3β表达,并延缓大鼠肝纤维化过程,阻碍肝纤维化的发展.

施今墨对药配方对2型糖尿病大鼠肝脏胰岛素抵抗及PI3K/AKT/GSK-3β信号通路的影响

目的观察施今墨对药配方混悬液灌胃对2型糖尿病大鼠肝细胞胰岛素信号转导通路PI3K/AKT/GSK-3β的影响,探讨该方改善肝胰岛素抵抗的分子机制。方法40只雄性Wistar大鼠,随机抽取6只作为正常对照组,给予普通饲料喂养;余34只采用高脂饮食、高糖饮水联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病模型。取成模大鼠24只,随机分为模型对照组和施今墨对药配方低、中、高剂量组,每组各6只。正常对照组和模型对照组均给予1.5 mL/100 g纯净水灌胃,施今墨对药配方低、中、高剂量组分别给予该方混悬液(折合生药剂量5.8 g/kg、11.6 g/kg、23.2 g/kg)灌胃。葡萄糖氧化酶法测量大鼠血糖;ELISA法检测血清胰岛素水平,利用HOMA-IR公式计算胰岛素抵抗指数(IRI);糖原测定试剂盒测量肝糖原含量;Western blotting法检测PI3K、AKT、GSK-3β总蛋白表达及其磷酸化水平。结果与正常对照组比较,模型对照组血糖水平升高,IRI增加,肝糖原含量减少,PI3K、AKT蛋白及其磷酸化水平均降低,GSK-3β蛋白表达增加、磷酸化水平降低(P均<0.05)。与模型对照组比较,施今墨对药配方低剂量组血糖水平降低,IRI降低,肝糖原含量增加,PI3K与AKT蛋白及其磷酸化水平均增加,GSK-3β蛋白表达降低、磷酸化水平增加(P均<0.05);施今墨对药配方中、高剂量组上述指标改善不明显。结论施今墨对药配方能够增强2型糖尿病大鼠肝组织PI3K/AKT/GSK-3β信号通路,从而增加肝细胞中的糖原含量,减轻胰岛素抵抗程度,降低血糖。

黄地安消胶囊调控IRS-1/PI3K/Akt/GSK-3β信号通路改善HepG2细胞胰岛素抵抗

目的:观察黄地安消胶囊改善HepG2细胞胰岛素抵抗的分子生物学机制。方法:MTT实验分离出黄地安消胶囊含药血清最佳作用浓度和作用时间,免疫荧光技术检测p-IRS-1、PI3K、p-Akt、p-GSK-3β的表达情况;RT-PCR技术检测细胞中IRS-1、PI3K、Akt、GSK-3β的mRNA表达,Western blot技术检测细胞中p-IRS-1、PI3K、p-Akt、p-GSK-3β的相对表达。结果:与正常组相比,模型组中IRS-1、PI3K、Akt表达降低(P<0.05);GSK-3β表达升高(P<0.05);与模型组相比,黄地安消胶囊含药血清组IRS-1、PI3K、Akt升高(P<0.05),GSK-3β表达降低(P<0.05)。结论:黄地安消胶囊可能通过调控IRS-1/PI3K/Akt/GSK-3β信号通路调节蛋白活性,促进糖原合成,降低血糖,改善胰岛素抵抗。

七叶莲花醇提物通过调节PI3K/Akt/GSK-3β信号通路减轻丙泊酚所致新生大鼠神经毒性

目的分析七叶莲花醇提物调节磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶/糖原合成酶激酶-3β(PI3K/Akt/GSK-3β)信号通路减轻丙泊酚所致新生大鼠神经毒性机制。方法清洁级健康雄性SD大鼠85只,采用随机数字表法分为5组,每组17只,对照组灌胃0.9%氯化钠溶液,阳性药组(给予丙泊酚),3种不同剂量七叶莲花醇提物组:低剂量组(3.06 g/kg)、中剂量组(6.12 g/kg)、高剂量组(12.24 g/kg),均灌胃七叶莲花醇提物,连续3 d,每天注射1次,腹腔注射戊巴比妥钠,通过肢体Ⅱ型导联监测心电图显露股动脉,置入24 G套管针抽血样,显露大鼠股静脉插入套管针泵注丙泊酚,速度为2 mg·kg^(-1)·min^(-1)。离断颈椎处死解剖分离大鼠海马组织,采用TUNEL染色检出海马神经元凋亡水平,RT-聚合链反应和蛋白质印迹法检测海马组织N-甲基-D-天冬氨酸1(NMDA1)、NMDA2B表达;RT-聚合链反应检测PI3K、Akt、GSK-3β的微小核糖核酸(mRNA)表达,蛋白质印迹法检测Akt、pAkt(ser473)、GSK-3β、PGSK-3β(ser9)蛋白表达。结果低、中、高剂量组及阳性药组海马神经元凋亡率均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。中剂量组、高剂量组及阳性药组NMDA1、NMDA2B mRNA表达与两者蛋白表达均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);低剂量组、中剂量组、高剂量组NMDA1、NMDA2B mRNA表达与两者蛋白表达高于阳性药组,差异均有统计学意义(P<0.05)。阳性药组GSK-3βmRNA表达高于对照组,高剂量组GSK-3βmRNA表达低于阳性药组,差异均有统计学意义(P<0.05)。低、中、高剂量组及阳性药组pAkt(ser473)、PGSK-3β(ser9)蛋白表达、pAkt(ser473)/Akt比值低于对照组,低、中剂量组及阳性药组PGSK-3β(ser9)/GSK-3β比值低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);高剂量组pAkt(ser473)蛋白、pAkt(ser473)/Akt比值高于阳性药组,低、中、高剂量组PGSK-3β(ser9)蛋白、PGSK-3β(ser9)/GSK-3β比值高于阳性药组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论丙泊酚会导致新生大鼠海马神经元细胞损伤,使用七叶莲花醇提物可逆转丙泊酚所致神经毒性作用,其机制与调节PI3K/Akt/GSK-3β信号通路有关。

藏红花素通过PI3K/Akt/GSK-3β通路诱导人乳腺癌细胞凋亡的初步研究

目的:探讨藏红花素对人乳腺癌细胞凋亡的影响及相关调控机制。方法:以人正常乳腺MCF-10A细胞和人乳腺癌MCF-7细胞为受试细胞,分别以不同浓度藏红花素0(空白对照组)、200、400、800 mg/L和LY294002(PI3K特异性抑制剂)15 mg/L干预对数生长期MCF-10A细胞和MCF-7细胞48 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、克隆形成实验分别检测各组细胞增殖抑制率、细胞克隆能力,Annexin V-FITC染色法检测细胞凋亡水平,运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)、半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶9(cysteine aspartic proteases-9,Caspase-9)、激活型半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(cleaved cysteine aspartate protease-3,Cleaved caspase-3)、B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(bcl-2 related X protein,Bax)蛋白表达。结果:与空白对照组比较,200、400、800 mg/L藏红花素组和LY294002组MCF-10A细胞增殖抑制率、克隆数目、凋亡率,差异均无统计学意义(P>0.05);400、800 mg/L藏红花素组和LY294002组MCF-7细胞增殖抑制率升高、克隆数目降低、凋亡率升高(P<0.01);p-PI3K、p-Akt、p-GSK-3β、Bcl-2表达下调且Caspase-9、Cleaved Caspase-3、Bax表达上调(P<0.01),磷酸化率p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β降低(P<0.01),Bax/Bcl-2表达比值升高(P<0.01)。与LY294002组比较,800 mg/L藏红花素组MCF-7细胞增殖抑制率升高、克隆数目降低、凋亡率升高(P<0.05或P<0.01);Caspase-9、Cleaved Caspase-3、Bax表达上调(P<0.05或P<0.01),Bax/Bcl-2比值升高(P<0.01),其他指标两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:藏红花素具有诱导人乳腺癌细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt/GSK-3β信号通路有关。

基于PI3K/Akt/GSK-3β信号通路探讨七味白术散对糖尿病脑病大鼠认知功能障碍的影响

目的:观察七味白术散对糖尿病脑病(DE)大鼠模型的治疗作用,基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)通路探究其可能存在的机制。方法:选取SPF级雄性Wistar大鼠48只,随机分为空白组8只、高脂饲料组40只。高脂饲料组大鼠喂养12周后,连续2 d腹腔注射35 mg·kg^(-1)的1%链脲佐菌素构建DE模型,空白组大鼠注射等量柠檬酸钠缓冲液。造模成功后,按血糖和体质量随机分为模型组、七味白术散低、中、高剂量组(3.15、6.3、12.6 g·kg^(-1))、联合西药组(二甲双胍+罗格列酮,0.21 g·kg^(-1)),每组各6只。给药组灌胃给予相应剂量药物,空白组和模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续给药6周。采用Morris水迷宫检测DE大鼠空间记忆能力,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测空腹胰岛素(FINS)水平并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠海马组织病理变化,ELISA检测海马组织氧化应激指标,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测海马组织PI3K、Akt、核转录因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、和白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠海马中PI3K、Akt、磷酸化(p)-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β蛋白表达情况。结果:与空白组比较,模型组大鼠FINS、HOMA-IR值均显著增高(P<0.01);找到平台原位置的路径显著增长,逃避潜伏期显著延长(P<0.01);海马组织神经细胞形态破坏;大鼠海马活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平升高和超氧化物歧化酶(SOD)活性降低(P<0.05,P<0.01);PI3K、Akt mRNA表达水平显著降低(P<0.01),NF-κB、TNF-α和IL-1βmRNA表达水平升高(P<0.05,P<0.01);PI3K、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达水平下降(P<0.05,P<0.01),GSK-3β表达显著增加(P<0.01)。与模型组比较,七味白术散中剂量组和联合西药组FINS、HOMA-IR值均显著下降(P<0.01);大鼠找到平台原位置的路径显著缩短,逃避潜伏期缩短(P<0.01);大鼠海马组织结构逐渐恢复,神经细胞形态破坏程度明显改善;大鼠海马组织中ROS、MDA含量降低和SOD水平升高(P<0.01);PI3K、Akt mRNA表达水平显著升高(P<0.01),NF-κB、TNF-α和IL-1βmRNA表达水平降低(P<0.05,P<0.01);PI3K、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达升高,GSK-3β表达显著降低(P<0.01)。结论:七味白术散可以缓解DE大鼠的胰岛素抵抗,其可能是通过激活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路来修复DE大鼠海马神经元损伤,改善DE大鼠学习认知能力。

达沙替尼基于PI3K/AKT信号通路调节乳腺癌细胞生物学行为

目的:基于PI3K/AKT信号通路探讨达沙替尼(dasatinib,DAS)对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响。方法:分别使用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法、Transwell法、流式细胞术和Western blotting法检测DAS不同浓度(0、2、6、10μmol/L)作用下MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移、细胞凋亡以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达情况。同时设置对照组(溶媒对照)、DAS组(DAS 10μmol/L)、PI3K抑制剂组(LY29400220μmol/L)、联合组(DAS 10μmol/L+LY29400220μmol/L),比较各组细胞增殖、侵袭和迁移、细胞凋亡以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达情况。结果:随着DAS作用浓度的升高,MCF-7细胞增殖抑制率和细胞凋亡率升高(P<0.05),侵袭细胞数、迁移细胞数和PI3K、p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低(P<0.05)。与对照组相比,DAS组、PI3K抑制剂组、联合组MCF-7细胞增殖抑制率和细胞凋亡率升高(P<0.05),PI3K、p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低。与PI3K抑制剂组、DAS组相比,联合组MCF-7细胞增殖抑制率和细胞凋亡率升高,PI3K、p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低(P<0.05)。结论:DAS能抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移能力,诱导细胞凋亡,其机制可能与调控PI3K/AKT信号通路有关。

异莲心碱通过PI3K/Akt/mTOR信号通路影响结肠癌SW480细胞增殖、凋亡和自噬

目的:探讨异莲心碱(Iso)通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法:用10、20和40μmol/L的Iso处理结肠癌SW480细胞,CCK-8法、流式细胞术和WB法分别检测Iso对细胞增殖活力、凋亡和自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62表达的影响。然后,用20μmol/L的Iso和25μmol/L的PI3K激活剂740 Y-P分别处理SW480细胞,将细胞分为对照组、740 Y-P组、Iso组和Iso+740 Y-P组,流式细胞术、WB法检测Iso和740 Y-P对各组细胞凋亡及细胞中LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62、PI3K、p-PI3K、mTOR和p-mTOR蛋白表达的影响。结果:10、20和40μmol/L的Iso处理后,SW480细胞增殖活力均显著下降(均P<0.05),细胞凋亡率均显著升高(均P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达均显著上调(均P<0.05),p26蛋白表达显著下调(P<0.05)。Iso和740 Y-P处理后,与对照组相比,740 Y-P组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达均显著下降(均P<0.05),p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著升高(均P<0.05);Iso组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高(均P<0.05),p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著下降(均P<0.05);与740 Y-P组相比,Iso+740 Y-P组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高(P<0.05),p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著下降(均P<0.05);与Iso组相比,Iso+740 Y-P组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达下降(均P<0.05),p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著升高(均P<0.05)。结论:Iso通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制结肠癌SW480细胞增殖并诱导细胞凋亡和自噬。

重楼皂苷Ⅰ预防给药对心肌缺血再灌注损伤大鼠调节PI3K/AKT信号通路的作用研究

目的 从磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路探讨重楼皂苷I预防给药对心肌缺血再灌注损伤(MI/IR)大鼠的干预机制。方法 将购买的72只SPF级SD大鼠按照随机数字法分为假手术组、模型组、阿司匹林组、重楼皂苷I低、中和高剂量组,每组12只。分组后即给予相应药物干预2周,2周后构建MI/IR模型。模型构建成功24 h后先采用动物彩色多普勒超声仪检测心脏功能,后处死大鼠收集相关组织采用HE染色观察心肌病理学、TTC法检测心肌梗死面积,试剂盒检测心功能指标[乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)和谷草转氨酶(AST),抗氧化指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)],TUNNEL染色检测心肌细胞凋亡特点,Western blot检测心肌PI3K、AKT、B细胞淋巴瘤/因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)蛋白表达。结果 假手术组心肌纤维排列整齐、无水肿,模型组有心肌纤维断裂,重楼皂苷I低、中、高剂量组和阿司匹林组明显改善心肌纤维断裂情况。与假手术组相比,模型组大鼠心肌梗死面积、LVEDP、LDH、CK-MB、AST和MDA明显升高(P<0.05),LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax、SOD和GSH明显降低(P<0.05);相较于模型组,阿司匹林组和重楼皂苷I低、中、高剂量组干预后,心肌梗死面积、LVEDP、LDH、CK-MB、AST和MDA明显降低(P<0.05),LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax、SOD和GSH则明显升高(P<0.05)。Tunnel染色可见,假手术组几乎没有心肌细胞凋亡,而模型组呈现出明显的大量的细胞凋亡;与模型组相比,阿司匹林组和重楼皂苷I低、中、高剂量组凋亡情况明显好转。此外,与假手术组相比,模型组大鼠心肌PI3K、AKT和Bcl-2蛋白表达均明显降低,Bax明显升高(均P<0.05);相较于模型组,重楼皂苷I低、中、高剂量组以及阿司匹林组PI3K、AKT和Bcl-2蛋白表达均明显升高,Bax蛋白表达明显降低(均P<0.05)。结论 重楼皂苷I对心肌缺血再灌注损伤有一定的预防作用,其作用机理可能与其能够调节PI3K/AKT信号通路有关。