基于PI3K/AKT/Gsk3β/p53信号通路探究解毒益智方对Aβ25-35诱导PC12细胞神经毒性保护作用机制

目的基于PI3K/AKT/Gsk3β/p53信号通路探究解毒益智方对β淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)诱导肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞神经毒性保护作用机制。方法Aβ25-35诱导PC12细胞损伤作为阿尔茨海默病(AD)细胞模型,以解毒益智方含药血清作为治疗药物。实验分为空白组、模型组、解毒益智方(低剂量组、中剂量组及高剂量组)。用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率及毒性;蛋白免疫印记法(Western Blot,WB)检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)蛋白及p53蛋白的表达。结果40μmol/L Aβ25-35为阿尔茨海默病最佳诱导浓度;10%解毒益智方大鼠含药血清为最佳干预浓度;与空白组相比,模型组PC12细胞存活率下降,细胞密度较小,无明显触角,形态类似圆形,且PI3K、p-Akt蛋白表达下调及GSK3β、p53蛋白表达上调(P<0.05);与模型组相比,解毒益智方低、中、高剂量组细胞存活率增多,细胞悬浮死亡现象好转,以高剂量组效果显著;解毒益智方各剂量组PI3K、p-Akt蛋白表达上调及GSK3β、p53蛋白表达均下调(以高剂量组效果显著(P<0.05)。结论解毒益智方可通过调控PI3K/AKT/Gsk3β/p53信号通路,对Aβ25-35诱导PC12细胞神经毒性起保护作用。

基于PI3K/Akt/p53信号通路探讨白花蛇舌草乙酸乙酯萃取物诱导急性髓系白血病细胞凋亡的作用

目的通过评估白花蛇舌草乙酸乙酯萃取物(EAEHDW)对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/p53信号通路传导调节作用,探讨其抑制急性髓系白血病M2型(AML-M2)细胞株Kasumi-1增殖及诱导凋亡的机制。方法利用乙酸乙酯从白花蛇舌草中萃取制备得到EAEHDW,高效液相色谱串联质谱装置检测样品纯度。设置空白组,将浓度分别为0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL、0.08 mg/mL、0.10 mg/mL的EAEHDW加入对数生长期的Kasumi-1细胞株,采用MTT法检测不同浓度EAEHDW作用不同时间后Kasumi-1细胞存活率,采用Annexin V/PI流式细胞术检测不同浓度EAEHDW作用24 h后Kasumi-1细胞凋亡情况,采用Western blot法检测不同浓度EAEHDW(0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL)作用24 h后Kasumi-1细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)家族蛋白及PI3K/Akt/p53信号传导通路蛋白表达情况。结果不同浓度的EAEHDW干预后,细胞存活率较空白组明显降低,细胞凋亡率较空白组明显升高,且细胞存活率随着作用时间的延长和药物浓度的增加而下降越明显,细胞凋亡率随着药物浓度的增加而升高越明显,差异均有统计学意义(P均<0.05);不同浓度的EAEHDW作用于Kasumi-1细胞后,细胞中多聚ADP核糖聚合酶(PARP)、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、细胞色素C(Cyto-C)、p53蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、鼠双微染色体2(MDM2)、磷酸化MDM2(p-MDM2)蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。结论EAEHDW可明显抑制髓系白血病Kasumi-1细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与影响Caspase家族蛋白表达和抑制PI3K/Akt/p53信号通路导致p53激活有关。

lncRNA SNHG12靶向抑制miR-495-3p进而调控PI3K/Akt信号通路对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)核仁小分子RNA宿主基因12(SNHG12)靶向抑制miR-495-3p/磷脂肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测前列腺癌组织和细胞(LNCaP、C4-2、DU145)中SNHG12、miR-495-3p相对表达水平(将其中的DU145细胞分为si-NC组、si-SNHG12组、si-SNHG12+anti-miR-NC组、si-SNHG12+anti-miR-495-3p组,4组检测);双荧光素酶报告实验检测SNHG12与miR-495-3p靶向关系;MTT法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测增殖细胞核抗原(PCNA)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白相对表达水平。结果 在前列腺癌组织和细胞(LNCaP、C4-2、DU145)中SNHG12相对表达水平明显升高,miR-495-3p相对表达水平明显降低(P<0.05);敲低SNHG12可降低DU145细胞活性、PCNA、N-cadherin蛋白相对表达水平,减少迁移及侵袭细胞数,增加E-cadherin蛋白相对表达水平(P<0.05);SNHG12可靶向负调控miR-495-3p,下调miR-495-3p可逆转敲低SNHG12对前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。与si-NC组相比,si-SNHG12组p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达水平明显降低(P<0.05);与si-SNHG12+anti-miR-NC组相比,si-SNHG12+anti-miR-495-3p组p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达水平明显增加(P<0.05)。结论 lncRNA SNHG12可能通过靶向抑制miR-495-3p/PI3K/Akt信号通路促进前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

基于PI3K/AKT/GSK3β信号通路探讨“还神至圣汤”对AD大鼠学习记忆的影响

目的:Aβ25-35淀粉酶注射SD大鼠建立老年痴呆大鼠(AD)模型,评价还神至圣汤对AD大鼠学习记忆能力的影响。方法:50只SD大鼠随机分为正常对照组,模型组、实验药物10.2、20.4、40.8 g.kg^(-1)剂量组,10只/组。除正常对照组外,其余各组大鼠海马区注射Aβ25-35淀粉酶建立AD模型。建模后第2天各组动物每日给药,连续30天,正常对照组、模型组给予等体积生理盐水,末次给药后24 h,剖取大鼠右侧海马组织,采用WB法测定海马区PI3K、AKT、P-AKT、GSK3β、P-GSK3β蛋白水平。模型建立后14天,开展Morris水迷宫实验测定AD大鼠学习记忆能力。结果:还神至圣汤各剂量组明显减少平台逃避潜伏期,提高穿越平台次数和目标象限停留时间百分比(P<0.05)。还神至圣汤20.4、40.8 g.kg^(-1)剂量组PI3K、p-Akt、p-GSK3β蛋白含量有明显增加(P<0.05,40.8 g.kg^(-1)剂量组p-GSK3β除外)。P-Akt/Akt、P-GSK3β/GSK3β比值也明显增加(P<0.05)。结论:还神至圣汤可改善由Aβ25-35淀粉样蛋白诱导的AD模型大鼠的学习记忆能力,其作用可能通过调控PI3K/AKT/GSK3β通过信号通路实现的。

METTL14通过PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路调控巨噬细胞分化对宫颈癌细胞凋亡和增殖的影响

目的探讨METTL14通过调控巨噬细胞分化抑制宫颈癌病理性发展及相关机制。方法检测宫颈癌病变样本METTL14 m RNA和蛋白,以及IL-6、iNOS、Arg-1和CD206表达变化。PMA诱导THP-1细胞转化为巨噬细胞,慢病毒过表达或抑制METTL14表达,检测IL-6、iNO、Arg-1和CD206表达变化以及PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路相关蛋白表达情况。随后加入PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路激动剂和抑制剂,检测过表达或抑制METTL14后,巨噬细胞IL-6、iNO、Arg-1和CD206表达变化,并取其上清制成条件培养基,孵育Hela细胞,检测细胞凋亡和增殖情况。结果1)宫颈癌病变组织中METTL14 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),巨噬细胞M1型标志物IL-6和iNOS表达明显降低(P<0.05),而M2型标志物Arg-1和CD206表达明显升高(P<0.05)。2)巨噬细胞过表达METTL14后,IL-6和iNOS表达明显升高(P<0.05),而Arg-1和CD206表达明显降低(P<0.05),M1/M2比例升高;抑制METTL14表达后,M1型标志物降低(P<0.05),M2型标志物升高(P<0.05),M1/M2比例降低。3)巨噬细胞中转染OE-METTL14慢病毒组PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路被抑制(P<0.05);加入PI3K/AKT激动剂后,M1型标志物降低而M2型标记物升高(P<0.05),M1/M2比例降低;OE-METTL14可逆转此趋势。Sh-METTL14慢病毒组PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路被激活(P<0.05),加入PI3K/AKT抑制剂后,M1型标志物升高而M2型标记物降低(P<0.05),M1/M2比例升高;Sh-METTL14可逆转此趋势。4)取转染OE-METTL14慢病毒后的巨噬细胞上清培养Hela细胞,可见细胞凋亡明显增多(P<0.05),增殖明显减少(P<0.05)。Sh-METTL14组的Hela细胞则表现出细胞凋亡减少(P<0.05),增殖增多(P<0.05)。结论METTL14通过PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路调控巨噬细胞分化可能有促进宫颈癌细胞凋亡,抑制增殖的作用。

抑制PI3K/AKT/GSK-3β信号通路对冈田酸诱导原代星形胶质细胞衰老情况的影响

目的研究冈田酸(OA)诱导的原代星形胶质细胞中通过抑制磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成激酶(GSK)-3β信号通路对p21、p53衰老蛋白表达水平和衰老阳性细胞表达的影响,探讨OA诱导星形胶质细胞衰老情况及相关机制。方法免疫荧光鉴定原代星形胶质细胞,CCK8法筛选OA药物浓度,然后用LY294002、OA分别处理或联合处理细胞,Western印迹测定细胞中p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达水平的变化及β-半乳糖苷酶染色检测衰老阳性细胞。结果免疫荧光鉴定原代星形胶质细胞结果显示其纯度达到95%以上,CCK8法筛选出OA药物处理浓度为30 nmol/L,OA组中p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达较正常对照组显著升高(P<0.05),衰老阳性细胞数明显增加,但LY294002+OA组p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达水平较OA组明显降低,并且衰老阳性细胞数也明显减少(P<0.05)。结论通过OA处理能使星形胶质细胞发生衰老,LY294002处理能通过抑制PI3K/AKT/GSK-3β信号通路缓解细胞的衰老情况,提示高磷酸化Tau诱导星形胶质细胞衰老可能与PI3K/AKT/G3K-3β信号通路密切相关。

下调TP53INP1基于PI3K/AKT/mTOR信号通路对宫颈癌细胞凋亡、侵袭、迁移的影响

目的分析下调肿瘤蛋白P53诱导性核蛋白1(TP53INP1)基于PI3K/AKT/mTOR信号通路对宫颈癌细胞凋亡、侵袭、迁移的影响。方法按照脂质体2000说明书对细胞进行转染TP53INP1 mimics及TP53INP1 inhibitor,按照实验设计,将其分为对照组及上调组(TP53INP1 inhibitor)、下调组(TP53INP1 mimics)。荧光定量PCR法检测TP53INP1表达量,采用细胞划痕实验法检测细胞迁移能力,采用流式细胞仪检测细胞凋亡能力,采用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,Western blot法检测PI3K/AKT/mTOR通路中PI3K、AKT、mTOR表达量。结果上调组表达量高于下调组TP53INP1,差异有统计学意义(P<0.05);下调组凋亡率高于上调组,差异有统计学意义(P<0.05);下调组侵袭能力、迁移能力低于上调组,差异有统计学意义(P<0.05);下调组PI3K、AKT、mTORBax蛋白表达量低于上调组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TP53INP1在宫颈癌中呈现高表达,下调TP53INP1可抑制宫颈癌细胞侵袭、迁移,促进凋亡,其机制可能与调控PI3K/AKT/mTOR信号通路相关。

金莲花总黄酮下调miR-215-5p抑制PI3K/AKT信号通路影响AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和迁移

目的 探讨金莲花总黄酮对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖、迁移的影响和潜在机制。方法 不同浓度(0.2、0.4、0.8 mmol/L)的金莲花总黄酮作用于AngⅡ诱导CFs。细胞计数试剂盒检测细胞活力确定金莲花总黄酮使用浓度。Transwell实验、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞迁移、miR-215-5p表达水平。Western印迹检测磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。将miR-215-5p模拟物、抑制物分别转染CFs,检测上调或下调miR-215-5p对AngⅡ诱导的CFs增殖和迁移的影响。结果 金莲花总黄酮作用于AngⅡ诱导的CFs后,细胞活力、迁移能力、miR-215-5p、磷酸化(p)-PI3K和p-AKT蛋白表达显著降低(P<0.05)。上调miR-215-5p表达后,AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力显著升高(P<0.05)。下调miR-215-5p表达后,AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力显著降低(P<0.05)。上调miR-215-5p表达能够显著降低金莲花总黄酮对AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力及PI3K/AKT信号通路的影响(P<0.05)。结论 金莲花总黄酮能够降低AngⅡ诱导的CFs增殖和迁移,其机制可能与下调miR-215-5p表达和抑制PI3K/AKT信号通路有关。

lncRNA DLEU2/miR-455-3p/OTUD7B轴通过PI3K/AKT信号通路促进宫颈癌恶性发展

目的:探讨长链非编码RNA DLEU2(lncRNA DLEU2,DLEU2)对宫颈癌恶性发展的影响。方法:利用TCGA数据库和qRT-PCR分析DLEU2在宫颈癌组织和细胞系中的表达。采用CCK-8、Western blotting、免疫荧光、细胞划痕、Transwell和TUNEL实验检测干扰DLEU2(sh-DLEU2)对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析DLEU2和miR-455-3p的靶基因,评估miR-455-3p inhibitor/mimic对宫颈癌细胞生长和PI3K/AKT信号通路的影响。裸鼠荷瘤实验检测干扰DLEU2后对瘤体体内生长的影响。结果:宫颈癌组织和细胞系中DLEU2表达显著上调(P<0.01)。sh-DLEU2可抑制Hela和SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.001)。DLEU2与miR-455-3p相结合,OTUD7B为miR-455-3p的靶基因。miR-455-3p inhibitor促进细胞恶性发展并激活PI3K/AKT信号通路,而sh-DLEU2可逆转其作用(P<0.01);miR-455-3p mimic也可部分逆转Oe-OTUD7B对细胞的作用(P<0.01)。此外,sh-DLEU2抑制了裸鼠荷瘤组织的生长(P<0.01)。结论:DLEU2通过miR-455-3p/OTUD7B轴激活PI3K/AKT信号通路促进宫颈癌的恶性发展。

通过PI3K/Akt信号通路调控p21对放射性肺损伤的防护作用

目的探讨通过PI3K/Akt信号通路调控p21对放射性肺损伤的防护作用。方法将56只雄性C57BL/6小鼠分为对照组、10Gy组、10Gy+LY294002组、15Gy组、15Gy+LY294002组、20Gy组、20Gy+LY294002组。照射14d后取材,用HE染色法观察肺组织病理变化,用IHC法检测p21蛋白表达水平,用RT-PCR法检测p21mRNA表达水平,用WesternBlot法检测p21、PI3K、p-Akt蛋白表达水平。结果HE观察结果显示,与对照组相比,单纯照射组随着照射剂量增加,小鼠肺损伤加重;与单纯照射组相比,同剂量照射+LY294002组肺损伤减轻。IHC、RT-PCR、WesternBlot检测结果显示,与对照组相比,各单纯照射组小鼠肺组织p21、PI3K、p-Akt蛋白表达水平升高(P<0.05);与单纯照射组相比,同剂量照射+LY294002组小鼠肺组织p21、PI3K、p-Akt蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论通过抑制PI3K/Akt信号通路,降低小鼠肺组织p21表达水平,对小鼠放射性肺损伤发挥防护作用。

miR-10b-5p靶向JARID2及PTEN/Akt/PI3K信号通路调控人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力

目的探讨miR-10b-5p靶向Jumonji富含AT结合结构域2(JARID2)及磷脂酶和张力蛋白同源物(PTEN)/蛋白激酶B(Akt)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路调控人乳腺癌M.D.Anderson和MB代表转移性乳腺癌-231(MDA-MB-231)细胞增殖和迁移的影响。方法培养人正常乳腺细胞密歇根癌症基金会-10A(MCF-10A)及人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用Real-time聚合酶链式反应(PCR)法检测两种细胞中miR-10b-5p表达。将MDA-MB-231细胞分为对照组(Lip2000处理后正常培养细胞)、上调拟似物组(Lip2000+miR-10b-5p拟似物mimic转染)、上调转染组(Lip2000+mimic-miR-10b-5p共转染)、下调拟似物组(Lip2000+miR-10b-5p拟似物inhibitor转染)、下调转染组(Lip2000+inhibitor-miR-10b-5p共转染)。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测各组细胞增殖情况,Transwell检测各组细胞迁移能力,Western blot法检测各组中JARID2及PTEN/Akt/PI3K信号通路蛋白表达。结果MDA-MB-231细胞中miR-10b-5p表达量高于MCF-10A细胞(P<0.05)。上调转染组增殖抑制率低于对照组,下调转染组增殖抑制率高于对照组(P<0.05);上调拟似物组和下调拟似物组增殖抑制率与对照组比较差异无统计学意义。上调转染组细胞数量少于对照组,下调转染组细胞数量多于对照组(P<0.05);上调拟似物组和下调拟似物组与对照组细胞数量比较差异无统计学意义。上调转染组JARID2、PTEN蛋白表达量均高于对照组,PI3K、Akt蛋白表达均低于对照组(P<0.05);下调转染组JARID2、PTEN蛋白表达量均低于对照组,PI3K、Akt蛋白表达均高于对照组(P<0.05)。结论miR-10b-5p可靶向JARID2及PTEN/Akt/PI3K信号通路表达,影响人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力。

PI3K/AKT/GSK3β信号通路在上皮性卵巢癌细胞增殖与耐药中的作用

卵巢癌（ovarian cancer，OC）是致死率最高的妇科恶性肿瘤，严重威胁着女性健康和生活质量。其中上皮性卵巢癌最常见，占所有病理类型的85％～90％。由于卵巢癌发病隐匿，约70％的患者在确诊时已为晚期。其致死的主要原因是转移和耐药性的出现，这是临床上治疗卵巢癌的难点，也是卵巢癌研究的热点。

布南色林通过激活PI3K/AKT/GSK3β信号通路对精神分裂症大鼠海马神经元损伤的影响

目的探究布南色林对MK-801诱导精神分裂症大鼠海马神经元损伤及PI3K/AKT/GSK3β信号通路的影响。方法采用MK-801诱导精神分裂症模型,将48只SD大鼠随机分为正常组、模型组、布南色林组(1 mg/kg布南色林)、利培酮组(0.54 mg/kg利培酮)。通过刻板行为、旷场实验和Morris水迷宫实验观察大鼠行为学,用HE染色观察大鼠海马组织病理损伤并评分,检测血清糖脂代谢指标水平,实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测海马组织磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)mRNA和蛋白表达。结果与模型组比较,布南色林组和利培酮组刻板行为评分、旷场实验总路程、逃避潜伏期及海马组织病理损伤评分降低;穿越平台原位置次数,PI3K、AKT、GSK3βmRNA,PI3K、AKT和GSK3β磷酸化水平升高(P<0.05);但布南色林组和利培酮组上述指标的比较,差异无统计学意义。正常组、模型组和布南色林组空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)及低密度脂蛋白(LDL)水平的比较,差异无统计学意义,但利培酮组FPG、HbA1c、TG及TC水平较其他三组升高(P<0.05),HDL和LDL水平差异无统计学意义。结论布南色林可能通过激活PI3K/AKT/GSK3β信号通路对精神分裂症大鼠海马神经元损伤发挥神经保护作用,改善其认知功能和学习记忆能力。

PI3K/Akt/GSK3β信号通路及内质网应激蛋白在大鼠难免性压疮形成中表达变化

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成激酶3β(GSK3β)信号通路及内质网(ER)分子伴侣在大鼠难免性压疮中的表达变化。方法:54只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常对照组(Con组),1个周期受压组(1c组)、3个周期受压组(3c组)、6个周期受压组(6c组)、9个周期受压组(9c组)和恢复期1 d组、3 d组、5 d组、7 d组,每组各6只。取各时间点受压部位肌肉组织,行HE染色观察组织的形态变化,SABC免疫组织化学法检测受压组织caspase-3的表达;蛋白质印迹(Western blotting)法检测受压组织中ER分子伴侣及Akt、GSK3β的变化。结果:HE染色结果显示,与Con组比较,各受压组局部肌肉组织呈现逐步退化的病理改变,在恢复组病理现象仍然存在;受压组和恢复组caspase-3蛋白表达均高于Con组,棕黄色颗粒表达主要在胞浆;Western blotting法检测受压组织中ER分子伴侣发现,其蛋白表达总体上呈上升趋势;与Con组比,受压组和恢复组p-Akt蛋白表达呈先上升后下降的趋势;与Con组比,受压组p-GSK3β蛋白表达首先表现为先上升后下降的趋势,在恢复组表达呈先下降后上升趋势。结论:难免性压疮难以愈合的原因可能与受压肌肉细胞凋亡有关;ER应激及PI3K/Akt/GSK3β信号通路可能参与了难免性压疮损伤过程。

丹皮酚通过上调miR-424-3p和抑制PI3K/AKT信号通路影响肝癌细胞的生长和迁移

目的:探讨丹皮酚对肝癌细胞活力和迁移能力的影响和分子机制。方法:分别采用不同浓度(50、100、200和400 mg/L)的丹皮酚干预人肝细胞癌Hep3B细胞。CCK-8法检测细胞活力,确定药物浓度。将Hep3B细胞分为正常对照组、丹皮酚组、miR-NC组、miR-424-3p组、丹皮酚+anti-miR-NC和丹皮酚+anti-miR-424-3p组。RT-qPCR法检测miR-424-3p表达水平;CCK-8法检测细胞活力;Transwell实验检测细胞的迁移能力;Western blot检测细胞周期素D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9及PI3K/AKT信号通路相关蛋白的水平。结果:丹皮酚干预可抑制Hep3B细胞的活力(P<0.05),并呈一定的浓度依赖性。选择200 mg/L的丹皮酚进行后续研究。丹皮酚干预可抑制Hep3B细胞MMP2和MMP9蛋白表达,抑制细胞迁移(P<0.05)。丹皮酚干预可促进Hep3B细胞miR-424-3p的表达(P<0.05)。过表达miR-424-3p可抑制Hep3B细胞cyclin D1、MMP2和MMP9的表达,抑制细胞的活力和迁移能力(P<0.05)。抑制miR-424-3p表达可逆转丹皮酚对Hep3B细胞活力和迁移能力的影响(P<0.05)。丹皮酚可抑制Hep3B细胞PI3K和AKT的磷酸化,抑制PI3K/AKT信号通路的活化(P<0.05)。抑制miR-424-3p表达可逆转丹皮酚对Hep3B细胞PI3K/AKT信号通路的影响(P<0.05)。结论:丹皮酚可上调miR-424-3p和抑制PI3K/AKT信号通路,进而抑制肝癌细胞的活力和迁移。

高良姜素通过PI3K/Akt及p38-MAPK信号通路增强胃癌SGC-7901细胞对阿帕替尼的敏感性

目的探讨高良姜素对阿帕替尼抗胃癌作用的影响及可能机制。方法体外培养胃癌SGC-7901细胞,3-( 4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(M TT)法筛选出高良姜素和阿帕替尼抑制胃癌细胞增殖的合适浓度。将胃癌细胞分为4组:空白对照组、高良姜素组、阿帕替尼组和高良姜素+阿帕替尼组。MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;细胞划痕实验和Transwell小室实验分别检测细胞迁移和侵袭能力;Westernblot检测细胞凋亡及PI3K/Akt及p38-MAPK信号通路相关蛋白表达。结果阿帕替尼和高良姜素均显著抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,并呈浓度依赖性(P<0 .05), 20mg/L阿帕替尼和300mg/L高良姜素是最佳的干预浓度。与20mg/L阿帕替尼组相比,高良姜素+阿帕替尼组可以明显抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。流式细胞术结果显示,高良姜素+阿帕替尼组对胃癌SGC-7901细胞促凋亡作用明显优于20mg/L阿帕替尼组(P<0.05)。Westernblot结果显示,高良姜素+阿帕替尼组Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸化蛋白激酶B( p-Akt)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-p38)蛋白表达明显高于20mg/L阿帕替尼组,B淋巴细胞瘤-2( Bcl-2)蛋白明显低于20mg/L阿帕替尼组(P<0 .05)。结论高良姜素可能通过抑制PI3K/Akt和激活p38-MAPK信号通路增强阿帕替尼抗胃癌SGC-7901细胞的作用。

miR-17-5p靶向PI3K/AKT信号通路调控皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的机制

目的探讨miR-17-5p靶向磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路调控皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的机制。方法实时荧光定量(qRT)-聚合酶链式反应(PCR)检测HaCaT和A431细胞中miR-17-5p的表达。构建抑制miR-17-5p表达A431细胞株,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测PIK3R1、p-AKT、p-PI3K、细胞周期素(Cyclin)D1、Bax和Bcl-2蛋白的表达。采用双荧光素酶报告基因法和Western印迹验证miR-17-5p和PIK3R1的靶向关系。结果qRT-PCR检测结果显示A431细胞中miR-17-5p的表达显著高于HaCaT(P<0.05)。MTT法、流式细胞术和Western印迹结果证实在抑制miR-17-5p表达的A431细胞中,p-AKT、p-PI3K、CyclinD1和Bcl-2的表达明显下调,PIK3R1和Bax的表达显著上调,细胞的增殖活力减弱,凋亡率增加(均P<0.05)。PI3K/AKT信号通路激活剂胰岛素样生长因子(IGF)-1可以逆转抑制miR-17-5p表达对A431细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论miR-17-5p通过靶向下调PIK3R1激活PI3K/AKT信号通路促进皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖,抑制细胞凋亡。

下调miR-150-5p调控PI3K/AKT信号通路抑制体外糖尿病肾病足细胞模型凋亡的机制研究

目的:探讨下调miR-150-5p调控PI3K/AKT信号通路对体外糖尿病肾病足细胞模型凋亡的影响和机制。方法:以小鼠足细胞MPC5作为研究对象,分成Control(空白对照)、Model(高糖处理)、Anti-NC(转染inhibitor control后高糖处理)、Anti-miR-150-5p组(转染miR-150-5p inhibitor后高糖处理),Realtime PCR方法测定细胞中miR-150-5p表达,MTT方法测定细胞增殖变化,PI单染法检测细胞周期变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡变化,Western blot法检测细胞中C-Caspase-3、cyclinD1、p-AKT、p-PI3K蛋白表达。PI3K/AKT抑制剂LY294002处理转染miR-150-5p inhibitor后的足细胞,给予高糖处理,检测细胞增殖、周期和凋亡变化。结果:与Control组比较,Model组细胞中miR-150-5p表达水平升高,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率升高,细胞G1期比例升高,细胞中C-Caspase-3蛋白表达水平升高,cyclinD1蛋白表达水平下降,p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K表达水平下降。与Anti-NC组比较,Anti-miR-150-5p组细胞中miR-150-5p表达水平降低,细胞增殖能力升高,细胞凋亡率降低,细胞G1期比例降低,细胞中C-Caspase-3蛋白表达水平降低,cyclinD1蛋白表达水平升高,p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K表达水平升高。PI3K/AKT抑制剂LY294002逆转miR-150-5p inhibitor对高糖条件下足细胞增殖、周期和凋亡影响。结论:下调miR-150-5p通过促进PI3K/AKT信号通路激活减少体外糖尿病肾病足细胞模型细胞凋亡。

lncRNA PCAT19靶向miR-143-3p通过信号通路PI3K/Akt对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨lncRNA PCAT19对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法实验分为miR-con组、miR-143-3p组、si-con组、si-PCAT19组、pcDNA组、pcDNA-PCAT19组、si-PCAT19+anti-miR-con组、si-PCAT19+anti-miR-143-3p组、miR-con+WT-PCAT19组、miR-con+MUT-PCAT19组、miR-143-3p+WT-PCAT19组、miR-143-3p+MUT-PCAT19组。qRT-PCR检测miR-143-3p和PCAT19的表达水平;Western印迹检测蛋白表达;MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测PCAT19和miR-143-3p的靶向关系。结果相较于正常甲状腺细胞HT-ori3,甲状腺癌细胞BCPAP、TPC-1、SW1736中PCAT19的表达水平显著升高,miR-143-3p的表达水平显著降低(P<0.05)。敲低PCAT19和高表达miR-143-3p抑制甲状腺癌细胞BCPAP增殖,促进细胞凋亡;促进裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase)-3蛋白的表达,抑制细胞周期蛋白(Cyclin)D1的表达。PCAT19靶向负调控miR-143-3p,miR-143-3p低表达可以部分逆转PCAT19低表达对BCPAP细胞增殖抑制和凋亡促进的作用。敲低PCAT19抑制p-AKT和磷脂酰肌醇3-激酶的p1102催化亚基(PI3Kp110α)的表达,miR-143-3p低表达可逆转PCAT19低表达对p-AKT和PI3Kp110α的抑制作用。结论lncRNA PCAT19可抑制甲状腺癌细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与miR-143-3p及PI3K/AKT信号通路有关。

姜黄素通过PI3K/p53信号通路调控人胃癌细胞SGC-7901的增殖、凋亡和周期

目的探讨姜黄素(Cur)对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡和周期的影响及其分子机制。方法采用不同浓度梯度Cur(0、10、20、40μmol/L)处理正常培养的SGC-7901细胞。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测在不同时间点(24、48、72 h)细胞增殖能力变化;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡状况;流式细胞术检测细胞凋亡水平及周期变化;Western blot检测PI3K/p53信号通路相关蛋白表达变化。结果 MTT结果显示,与对照组比较,Cur呈浓度依赖性抑制SGC-7901细胞增殖;细胞荧光染色结果显示Cur处理组的细胞亮蓝色荧光强度减弱;流式细胞术结果显示,与对照组比较,不同浓度Cur处理组细胞凋亡率增加(P<0.05,P<0.01),G0/G1期细胞出现阻滞(P<0.01);Western blot结果显示,与对照组比较,不同浓度Cur组细胞PI3K蛋白表达量、Akt磷酸化水平均降低(P<0.01),而p21和p53蛋白表达量升高(P<0.05,P<0.01)。结论 Cur能抑制SGC-7901细胞的增殖效应,通过诱导细胞发生G0/G1期阻滞进而促进其凋亡进程,这可能与其对PI3K/p53信号通路的调控密切相关。