Cx32通过PI3K/AKT途径调控子宫内膜癌细胞恶性生物学行为

目的:观察间隙连接蛋白32(Cx32)与磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)在子宫内膜癌组织与细胞系中的表达情况,以探讨Cx32通过磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路调控子宫内膜癌发生发展的相关机制。方法:采用免疫组织化学方法和Western blotting(WB)法检测子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织以及正常子宫内膜上皮细胞系(hEEC)和两种子宫内膜癌细胞系Ishikawa(高分化)、KLE(低分化)中的Cx32和p-AKT的表达水平,分析二者的关系。采用WB、Transwell、CCK-8和划痕愈合实验检测Cx32过表达前后各组细胞中Cx32和p-AKT的表达变化情况以及对细胞增殖、侵袭与迁移能力的影响。用PI3K/AKT信号通路抑制剂处理Cx32过表达的Ishikawa和KLE细胞,采用CCK-8法检测转染前后子宫内膜癌细胞增殖活力的变化。结果:子宫内膜癌组织中Cx32的阳性表达率(62.50%)显著低于正常子宫内膜组织中Cx32的阳性表达率(100.00%);子宫内膜癌组织中p-AKT的阳性表达率(85.00%)显著高于正常子宫内膜组织中p-AKT的阳性表达率(35.00%)(P<0.05)。Cx32与p-AKT在子宫内膜癌组织中的表达呈负相关,差异有统计学意义(r=-0.325,P<0.05)。与hEEC细胞相比,Ishikawa与KLE细胞中Cx32的表达水平降低、p-AKT的表达水平升高,KLE细胞中Cx32的表达水平最低、p-AKT的表达水平最高;Ishikawa细胞的增殖、侵袭与迁移水平显著低于KLE细胞(P<0.05)。过表达Cx32后,Cx32的表达水平升高、p-AKT的表达水平降低,细胞侵袭、迁移水平显著降低(P<0.05);经过PI3K/AKT信号通路抑制剂处理的Cx32过表达的Ishikawa和KLE细胞比未经过抑制剂处理的Cx32过表达的Ishikawa和KLE的细胞活力低(P<0.05)。结论:Cx32可以通过PI3K/AKT信号通路发挥调控子宫内膜癌发生发展的作用。与正常子宫内膜组织相比,在子宫内膜癌组织中Cx32表达降低、p-AKT表达升高;在两种癌细胞中Cx32的表达均低于正常子宫内膜上皮细胞中Cx32的表达,在Ishikawa细胞中Cx32表达高于KLE细胞(P<0.05)。为进一步检验Cx32和PI3K/AKT信号通路在子宫内膜癌进展中发挥的调控作用,在Ishikawa与KLE两种癌细胞中使Cx32过表达,并用WB法测定p-AKT表达水平的变化。结果表明,在Ishikawa和KLE两种癌细胞中过表达Cx32,则p-AKT的蛋白表达水平下降,可以表明PI3K/AKT信号通路的活性降低。加入PI3K/AKT信号通路抑制剂进一步验证了Cx32可能通过PI3K/AKT信号通路对子宫内膜癌的发生发展起作用。

长链非编码RNA UCA1通过激活PI3K/Akt途径降低人宫颈癌SiHa细胞放射敏感性

目的:通过下调人宫颈癌SiHa细胞长链非编码RNA(lncRNA)尿路上皮癌胚抗原1(UCA1)表达,观察SiHa细胞放射敏感性的变化,以及PI3K/Akt信号转导通路相关蛋白表达的变化,探讨lncRNA UCA1对人宫颈癌SiHa细胞放射敏感性的调控作用及可能机制。方法:人宫颈癌SiHa细胞分成siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,体外合成lncRNA UCA1和阴性对照(NC)小干扰RNA(siRNA),采用阳性脂质体法将lncRNA UCA1和NC的siRNA转染SiHa细胞。实时荧光定量PCR法检测宫颈癌SiHa细胞中lncRNA UCA1表达,Western blot法检测Akt、p-Akt 473、p-Akt 380、bcl-2蛋白表达。3组细胞经不同剂量(0、2、4、6、8Gy)X射线照射后,CCK-8法检测细胞经8Gy的X照射后存活率,流式细胞仪检测细胞经8Gy的X照射后凋亡率,克隆形成试验检测细胞的放射敏感性。结果:与空白对照组及阴性对照组比较,siRNA干扰组细胞的lncRNA UCA1表达降低(P<0.05),Akt蛋白表达无明显变化(P>0.05),p-Akt 473、p-Akt 380、bcl-2蛋白表达均降低(P均<0.05)。经X线照射后,与空白对照组和阴性对照组比较,RNA干扰组的SiHa细胞存活率下降(P<0.05),凋亡率增加(P<0.05),细胞放射生物学参数D 0、Dq、N、SF2值均降低(P均<0.05),放射增敏比为1.328。结论:lncRNA UCA1能降低人宫颈癌SiHa细胞放射敏感性,激活PI3K/Akt信号转导途径可能是其作用机制。

lncRNA HOST2通过PI3K/Akt途径调控卵巢癌SKOV3细胞对顺铂的敏感性

目的探讨下调长链非编码RNA(lncRNA)上皮性卵巢癌转录因子2(HOST2)表达对人卵巢癌SKOV3细胞顺铂敏感性的影响及其作用机制。方法体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,取对数生长期细胞分为空白对照组、阴性对照组和siRNA干扰组,其中阴性对照组和siRNA干扰组SKOV3细胞应用Lipofectamine 2000分别转染阴性对照siRNA和lncRNA HOST2-siRNA,空白对照组未进行转染。采用qPCR法检测各组细胞lncRNA HOST2的表达;Western blot检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)信号通路相关蛋白Akt、p-Akt(S473)、pAkt(S380)及Bcl-2的表达;CCK-8法检测经不同浓度(0、20、40、60、80、100μmol/L)顺铂作用后细胞的存活情况,并计算半抑制浓度(IC50);流式细胞术检测经20μmol/L顺铂作用后的细胞凋亡率。结果与空白对照组和阴性对照组比较,siRNA干扰组细胞lncRNA HOST2表达及p-Akt(S473)、p-Akt(S380)和Bcl-2蛋白表达水平均降低(均P<0.05);3组Akt蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。空白对照组、阴性对照组和siRNA干扰组细胞存活率均随顺铂药物浓度的增加而降低,IC50分别为(59.58±5.97)、(51.42±5.22)和(39.75±5.31)μmol/L。siRNA干扰组细胞凋亡率(12.42%±1.46%)明显高于空白对照组(7.53%±1.25%)和阴性对照组(8.16%±1.31%)。结论下调lncRNA HOST2表达可增强人卵巢癌SKOV3细胞对顺铂的敏感性,其机制与抑制PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达有关。

利多卡因通过PI3K/Akt途径抑制人口腔癌细胞HN13增殖并促进其凋亡

目的:研究利多卡因对人口腔鳞癌细胞HN13增殖、凋亡的影响及机制。方法:常规条件下培养人口腔鳞癌细胞HN13,分为对照组(NC,不添加任何药物)、利多卡因低(40μmol/L)、中(400μmol/L)、高(4 000μmol/L)剂量组、阳性对照组(PC,100μmol/L顺铂),采用CCK-8法测定细胞OD值,分析不同浓度利多卡因对癌细胞增殖的影响;采用Annexin V-FITC/PI双染法结合流式细胞术检测不同浓度利多卡因对HN13细胞凋亡的影响。Western blot检测各组细胞PI3K/Akt途径中关键分子p-PI3K、p-Akt、Bcl-2等蛋白表达差异。结果:CCK-8结果显示,与对照组相比,利多卡因400μmol/L、4 000μmol/L处理组细胞存活数减少(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示400μmol/L、4 000μmol/L利多卡因处理组细胞凋亡率提高(P<0.05)。Western blot结果显示,与NC对照组相比,利多卡因处理后各组细胞中p-PI3K、p-Akt、Bcl-2表达明显降低(P<0.05),其中4 000μmol/L处理组与顺铂处理组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:与对照组相比,利多卡因通过抑制PI3K/Akt途径抑制HN13细胞增殖,促进细胞凋亡。

骨髓间充质干细胞来源外泌体通过PI3K/Akt途径减轻过氧化氢诱导心肌细胞损伤

目的研究骨髓间充质干细胞(BMMSC)来源外泌体通过PI3K/Akt途径减轻过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导心肌细胞损伤。方法培养心肌H9c2细胞,采用0.5 mmol/L H_(2)O_(2)诱导心肌细胞损伤,给予BMMSC来源外泌体、对照溶剂二甲基亚砜或PI3K抑制剂LY294002干预,检测细胞存活率、凋亡率及Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、p-PI3K和p-Akt的表达水平。结果H_(2)O_(2)组细胞的存活率及Bcl-2、p-PI3K和p-Akt的表达水平低于对照组,凋亡率以及Bax和cleaved caspase-3的表达水平高于对照组(P<0.05);H_(2)O_(2)+外泌体组细胞的存活率及Bcl-2、p-PI3K和p-Akt的表达水平高于H_(2)O_(2)组,凋亡率以及Bax和cleaved caspase-3的表达水平低于H_(2)O_(2)组(P<0.05);LY294002+H_(2)O_(2)+外泌体组细胞的存活率以及Bcl-2、p-PI3K和p-Akt的表达水平低于溶剂对照+H_(2)O_(2)+外泌体组,凋亡率以及Bax和cleaved caspase-3的表达水平高于溶剂对照+H_(2)O_(2)+外泌体组(P<0.05)。结论BMMSC来源外泌体通过激活PI3K/Akt途径减轻H_(2)O_(2)诱导心肌细胞损伤。

达沙替尼对人脐静脉内皮细胞的损伤与PI3K/Akt途径抑制有关

目的探索达沙替尼对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移和凋亡等生物学特性的影响,为完善其临床应用提供资料。方法实验分组:达沙替尼组(达沙替尼处理浓度为50 nmol/L)、LY294002组(PI3K抑制剂,处理浓度为20μmol/L)、联合处理组(达沙替尼处理浓度为50 nmol/L、LY294002处理浓度为20μmol/L)及溶媒对照组(DMSO浓度为0.1%)。CCK8法检测细胞活性,划痕法检测细胞迁移,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blot检测Akt和p-Akt蛋白水平。结果达沙替尼(1~400 nmol/L)不仅抑制HUVEC增殖,而且诱导其凋亡、抑制其迁移、阻滞细胞周期G1-S期转化。随浓度的升高与处理时间的延长(50 nmol/L,24 h^96 h)达沙替尼对细胞增殖抑制作用和诱导凋亡作用明显,同时HUVEC的迁移能力随达沙替尼浓度(50~100 nmol/L)的升高而降低。达沙替尼和PI3K抑制剂LY294002两者单独处理时均具有细胞增殖抑制作用,两者均明显抑制Akt蛋白磷酸化水平;两者联合处理时虽然细胞增殖抑制作用增强,但对Akt蛋白磷酸化水平的影响与单独处理相比差异不明显。结论达沙替尼可通过PI3K/Akt通路促进HUVEC损伤,抑制HUVEC增殖和迁移,改变细胞形态,阻滞HUVEC G1-S期转化,诱导细胞凋亡。

MicroRNA-155通过调节CXCR4/PI3K/AKT途径影响滋养细胞的侵袭与迁移

目的:以人绒毛膜滋养层细胞系JEG-3细胞为研究对象,结合该细胞侵袭和迁移能力的变化情况,研究转染miR-155 mimics和miR-155 inhibitor之后CXCR4的表达变化及其对下游PI3K/AKT信号通路的影响作用,从而探讨miR-155参与子痫前期发生发展的分子机制。方法:设计miR-155 mimics和miR-155 inhibitor,对JEG-3进行转染,通过Transwell侵袭实验、划痕实验,观察转染后细胞的侵袭和迁移能力的变化;利用Real-time PCR检测CXCR4 mRNA的表达;利用Western blot检测CXCR4及下游p-AKT蛋白的表达水平。结果:Real-time PCR结果显示,miR-155 mimics转染组CXCR4 mRNA相对表达量(0.589±0.096)明显低于空白对照组(1.503±0.090)和阴性对照组(1.146±0.153),差异有统计学意义(P<0.05);miR-155 inhibitor转染组CXCR4 mRNA相对表达量(1.739±0.083)与两组对照组相比差异也有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示miR-155 mimics转染组CXCR4蛋白和下游p-AKT蛋白表达水平均明显降低,而miR-155 inhibitor转染组CXCR4和p-AKT蛋白水平则升高,与空白对照组和阴性对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,与空白对照组(63.46±2.37)和阴性对照组(49.29±5.81)侵袭细胞数相比,miR-155 mimics转染组侵袭细胞数(22.89±9.42)明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);同时,miR-155 inhibitor转染组侵袭细胞数(81.50±11.25)明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验结果显示,转染miR-155 mimics后,JEG-3细胞相对迁移距离(0.159±0.058)低于空白对照组(1.080±0.045)和阴性对照组(0.823±0.201),差异有统计学意义(P<0.05);而miR-155 inhibitor转染组,JEG-3细胞相对迁移距离(1.640±0.078)明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-155可能通过抑制CXCR4的表达进而抑制其下游PI3K/AKT信号通路的活化,从而影响滋养细胞的侵袭及迁移能力,最终导致子痫前期的发生发展。

白桦脂醇通过抑制PI3K/AKT途径抑制宫颈癌小鼠移植瘤增殖

目的:阐明白桦脂醇对宫颈癌细胞系c4-1移植瘤模型裸鼠的影响和机制。方法:皮下注射宫颈癌细胞系c4-1建立异种移植瘤模型,将移植瘤BALB/c裸鼠模型随机分为3组:对照组(DMSO)、白桦脂醇低剂量组(Betulin50)、白桦脂醇高剂量组(Betulin200),进行后续使用。白桦脂醇治疗后,检测移植瘤体积和裸鼠存活率;免疫组化检测Ki67和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平;TUNEL实验检测移植瘤细胞凋亡情况;Westernblot检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/AKT通路蛋白表达情况和磷酸化情况。结果:与对照组(DMSO)相比较,白桦脂醇低剂量组(Betulin50)、白桦脂醇高剂量组(Betulin200)肿瘤体积明显减小(P<0.01),裸鼠存活率明显增加(P<0.01),Ki67和VEGF表达水平明显下降(P<0.01),且PI3K/AKT磷酸化水平明显被抑制(P<0.01)。结论:白桦脂醇能抑制c4-1移植瘤体积,增加移植瘤裸鼠存活率,下调Ki67和VEGF表达水平和PI3K/AKT磷酸化水平。白桦脂醇可能通过抑制PI3K/AKT信号通路抑制宫颈癌细胞系c4-1移植瘤。

可替宁通过激活PI3K/Akt途径的抗凋亡作用促进非小细胞肺癌的发生

目的探讨可替宁对非小细胞肺癌细胞凋亡的作用及其作用机制。方法培养人肺腺癌源性A549细胞,在不存在或存在ly294002的情况下,用不同浓度可替宁或尼古丁对细胞进行预处理,然后加入多柔比星共培养,使用细胞增殖检测试剂盒Ⅱ(XTT)或胱天蛋白酶(caspase)-3/7活性检测试剂盒分析细胞活力,使用DNA梯状条带检测分析细胞基因组DNA断裂情况,使用蛋白质印迹法分析可替宁对A549细胞Akt磷酸化的影响。结果可替宁能以剂量依赖性方式抑制多柔比星诱导的细胞死亡,也以剂量依赖性方式抑制多柔比星诱导的caspase-3/7激活,可替宁可阻断多柔比星诱导的基因组DNA断裂,并以剂量依赖性方式增强Akt磷酸化,而ly294002抑制了可替宁诱导的Akt磷酸化,表明可替宁通过PI3K/Akt途径诱导Akt磷酸化并抑制凋亡。结论本研究阐明了可替宁能通过激活PI3K/Akt途径的抗凋亡作用促进非小细胞肺癌的发生。

PI3K/Akt途径在朊蛋白介导胃癌耐药中的作用研究

目的:探讨PI3K/Akt途径在朊蛋白(PrPc)介导胃癌耐药中的作用。方法:脂质体基因转染法建立高表达PrPc的胃癌细胞亚系。Western印迹检测转染细胞中Akt蛋白的表达。噻唑蓝(MTT)比色法测定单独或联用PI3K抑制剂LY294002时转染细胞对化疗药物的敏感性。流式细胞仪检测单独或联用LY294002时转染细胞内阿霉素蓄积和潴留。结果:将PrPc正义载体pcDNA-PrP转入SGC7901,成功建立PrPc高表达胃癌细胞亚系并命名为PS;空载体转染细胞命名为BS。Western-Blot显示磷酸化Akt在PS中的表达较BS及SGC7901增高,而三者的总Akt则无差别。未经LY294002处理时,在阿霉素或长春新碱的作用下,PS的存活率分别为91.4%±3.4%和89.4%±3.8%,较BS(79.2%±4.3%和75.9%±2.1%)明显增高(均),PS细胞内阿霉素蓄积量和潴留量分别为4.4±0.3和4.2±0.4,明显低于BS(8.2±0.5和8.0±0.3)(均);当联合LY294002处理后,PS在两种药物作用下的存活率均随着LY294002浓度的增加逐渐降低,并均在LY294002为30μmol/L时接近BS(均),PS细胞内阿霉素蓄积量和潴留量逐渐增高,并均在LY294002为30μmol/L时接近BS(均)。结论:PrPc介导的胃癌耐药与PI3K/Akt途径活性密切相关,抑制PI3K/Akt途径活性可逆转PrPc介导的胃癌耐药。

Gli通过PI3K/AKT途径促进食管腺癌OE33细胞上皮-间质转化

目的探讨Gli调节食管腺癌OE33细胞上皮-间质转化(EMT)的分子学机制。方法实时荧光定量PCR法观察GANT61、N-Shh、GANT61&N-Shh分别处理OE33细胞后对Gli1、Gli2、β-catenin和N-cadherin mRNA和蛋白表达的影响; Western印迹试验观察GANT61、N-Shh、GANT61&N-Shh分别处理OE33细胞后对Gli1、Gli2、p-AKT、AKT、β-catenin和N-cadherin蛋白表达的影响;侵袭实验观察GANT61、N-Shh、GANT61&N-Shh对食管腺癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果与DMSO对照组相比,GANT61可以下调食管腺癌OE33细胞的Gli1、Gli2和β-catenin和N-cadherin mRNA表达; Western印迹显示GANT61可以下调OE33细胞的Gli1、Gli2、p-AKT、β-catenin和N-cadherin蛋白表达。侵袭实验显示GANT61可以显著抑制OE33细胞的侵袭能力。应用N-Shh可以显著上调Gli1、Gli2、β-catenin和N-cadherin mRNA及蛋白表达以及p-AKT蛋白表达,同时促进肿瘤细胞的侵袭能力。结论 Gli1和Gli2表达下调可能通过PI3K/AKT途径抑制EMT,进而抑制肿瘤细胞的侵袭转移。

PI3K/AKT途径在调节侵袭性前列腺癌中的E-钙黏蛋白和桥粒芯糖蛋白2中的作用

目的本研究旨在通过检查E-钙黏蛋白和桥粒芯糖蛋白2(DSG2)的功能意义,全面了解细胞-细胞黏附在前列腺癌侵袭性中的作用和调节。方法首先在正常前列腺组织和前列腺癌组中使用免疫荧光检查E-钙黏蛋白表达。进行相关和存活分析以评估其临床意义。在体外和体内分析这种遗传改变的功能意义,后者通过使用肿瘤发生以及外渗和转移性肿瘤形成测定。结果在原发性前列腺癌患者中,E-钙黏蛋白和DSG2的表达降低与早期的生化复发显着相关。产生转基因DU145 E-钙黏蛋白敲低和组成型活性AKT过表达株系。显示E-钙黏蛋白的缺失导致体内原发性和转移性肿瘤形成受损,表明除了已知的肿瘤抑制因子之外,E-钙黏蛋白的肿瘤启动子作用。AKT的激活导致E-cadherin表达和Snail核定位的显着降低,表明PI3K/AKT信号传导途径在E-钙黏蛋白的瞬时抑制中的作用。结论这些发现通过PI3K途径的调节说明了细胞-细胞黏附在进展为侵袭性前列腺癌中的关键作用。

miR-34a通过靶向CD47激活PI3K/Akt途径抑制异丙酚诱导的幼鼠海马神经元细胞凋亡

目的研究miR-34a对异丙酚诱导的神经元细胞凋亡的影响,miR-34a、CD 47的靶向关系及在此过程中PI3K/Akt途径的作用。方法提取分离幼鼠海马神经元细胞,在不同浓度异丙酚(1、10、20、40、60、80μg·mL^(-1))处理12h,采用MTT法检测神经元细胞活力,流式细胞术法检测神经元细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测神经元细胞中miR-34a、CD 47 mRNA的表达水平;将Control组(未转染病毒)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-34a组(转染miR-34a mimics)、pcDNA 3.1组(转染pcDNA 3.1)、miR-34a+CD 47组(miR-34a mimics和pcDNA 3.1-CD 47共转染)以慢病毒法转染至幼鼠海马神经元细胞中,并用一定浓度异丙酚处理。采用MTT法检测各组细胞活力,流式细胞术法检测各组细胞凋亡情况,RT-qPCR检测各组miR-34a、CD 47 mRNA的表达水平,Western blot检测各组CD47、PI3K、Akt、p-Akt、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3蛋白的表达水平,双荧光素酶活性实验验证miR-34a对CD 47的靶向作用。结果幼鼠海马神经元细胞活力及凋亡率与异丙酚浓度均成剂量依赖性,且浓度≥20μg·mL^(-1)的异丙酚作用下,随浓度的升高,细胞活力显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),在异丙酚作用后miR-34a表达量显著降低,CD 47 mRNA表达量显著升高;转染后各组细胞与Control组相比,miR-34a组细胞活性显著升高(P<0.01),CD 47蛋白表达量显著降低(P<0.01),PI3K、p-Akt、Bcl-2表达均显著升高(P<0.01),Bax、Cleaved caspase-3表达均显著降低(P<0.01);CD 47为miR-34a靶基因。过表达CD 47会减弱miR-34a抑制异丙酚诱导的神经元细胞凋亡作用。结论miR-34a可通过靶向负调控CD 47并有效抑制异丙酚诱导的神经元细胞凋亡,其可能的作用机制为激活PI3K/Akt通路。

白藜芦醇经PI3K/Akt途径促进脑出血后大鼠轴突再生

目的探讨白藜芦醇通过PI3K/Akt途径调控AMPKα通路,促进脑出血后大鼠轴突再生的机制。方法选取220~250 g雄性SD大鼠,按随机数字表法分为假手术组、脑出血组、小剂量白藜芦醇组(20 mg/kg)、大剂量白藜芦醇组(40 mg/kg)、抑制剂组(PI3K/Akt抑制剂LY294002),采用自体血注射法对SD大鼠建立脑出血模型。评估大鼠神经功能缺损,HE染色观察脑组织病理变化,ELISA检测各组大鼠氧化应激相关指标,Western blot、免疫组化和免疫荧光检测各组大鼠神经丝蛋白200(neurofilament 200,NF200)、微管相关蛋白-2(microtubule-associated protein-2,MAP-2)、髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)、生长相关蛋白(growth-associated protein 43,GAP43)及蛋白激酶B(protein kinase B,PKB or Akt)、腺苷酸活化蛋白激酶α(AMP-activated protein kinase alpha,AMPKα)、糖原合酶激酶-3β(glycogen synthase kinase 3 beta,GSK-3β)的表达。结果脑出血后大鼠的神经功能缺损程度显著升高,HE染色可见明显病理损伤,氧化应激产物水平明显增高,使用白藜芦醇干预之后损伤程度减轻,且大剂量白藜芦醇组效果明显优于小剂量白藜芦醇组(P<0.05)。Western blot与免疫组化检测显示:与脑出血组比较,注射白藜芦醇后大鼠脑出血区域组织中NF200和MAP-2表达明显升高,且大剂量白藜芦醇组效果明显优于小剂量白藜芦醇组(P<0.05)。Western blot与免疫荧光结果显示:注射白藜芦醇后MBP表达显著高于脑出血组,大剂量白藜芦醇组效果明显优于小剂量白藜芦醇组(P<0.05),且白藜芦醇通过AMPK作用于轴突。对通路蛋白进一步进行Western blot检测,与脑出血组比较,注射白藜芦醇后大鼠脑出血区域组织中p-AMPKα、p-GSK-3β表达降低,NF200、MAP-2、MBP、GAP43和p-Akt表达升高,且大剂量白藜芦醇组效果明显优于小剂量白藜芦醇组(P<0.05),使用抑制剂后可逆转白藜芦醇干预后的效应。结论白藜芦醇可促进脑出血后大鼠的轴突再生,对神经功能的恢复有明显改善,其机制可能与通过PI3K/Akt途径抑制AMPK通路有关。

胡桃醌通过PI3K/AKT途径促进前列腺癌LNCaP细胞氧化应激

目的探讨胡桃醌对人前列腺癌LNCa P细胞的杀伤活性与其诱导氧化应激反应的相关性及机制。方法采用0、6.25、12.5、25、50和100μmol/L胡桃醌作用前列腺癌LNCa P细胞,MTT法检测不同剂量胡桃醌对LNCa P细胞生长抑制影响;胡桃醌联合抗氧化剂NAC作用细胞后,DCFHDA作为荧光探针,用荧光酶标法检测活性氧(ROS);胡桃醌联合PI3K/AKT通路抑制LY294002作用细胞后,Western blot法检测p-AKT、AKT和Nrf2蛋白表达变化。结果与阴性对照组比较,胡桃醌浓度在12.5μmol/L或以上显著抑制前列腺癌细胞生长(P<0.05,P<0.01)。胡桃醌能够促进细胞ROS含量(P<0.01);胡桃醌联合抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)导致ROS含量下降(P<0.05),细胞存活率升高(P<0.01)。胡桃醌抑制p-AKT的表达,NAC能够恢复胡桃醌抑制的p-AKT表达。胡桃醌能够抑制细胞核Nrf2的表达,与PI3K/AKT抑制剂LY294002联合使用进一步抑制了Nrf2的表达。结论胡桃醌能够抑制前列腺癌LNCa P细胞增殖,作用的机制可能与促进ROS产生从而抑制PI3K/AKT途径,导致Nrf2表达下降有密切关系。

人参皂苷F2通过PI3K/Akt途径改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗

该研究探讨了人参皂苷F2对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响及其机制。将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成熟后,用1μmol/L地塞米松处理48 h,建立胰岛素抵抗模型。用10μmol/L的罗格列酮(阳性对照)和25、50、100μmol/L人参皂苷F2处理胰岛素抵抗细胞12 h,检测细胞对2-NBDG的摄取。实验结束后用RT-qPCR检测各组细胞中葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)和胰岛素底物受体1(IRS-1)mRNA相对表达量,并利用Western blot检测PI3K/Akt信号通路中蛋白表达及其磷酸化水平。结果表明:与模型组相比,25、50、100μmol/L人参皂苷F2均能促进胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞对2-NBDG的摄取,分别增加了12.58%、29.07%和34.62%(p<0.05);人参皂苷F2作用12 h后,GLUT-4和IRS-1 mRNA相对表达量以及PI3K、Akt的磷酸化水平显著提高(p<0.01)。该研究表明人参皂苷F2可通过促进胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞中GLUT-4和IRS-1mRNA相对表达,增加PI3K和Akt蛋白磷酸化,从而激活PI3K/Akt信号通路,改善其糖代谢和胰岛素抵抗。

EPO通过激活PI3K/Akt途径上调HSP70的表达对低温下心衰大鼠起保护作用

目的:评价红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对低温环境下心衰大鼠的影响,探讨其可能的作用机制。方法:80只SD大鼠随机分5组,分别为对照组(CON组)、心衰低温组(HFLT组)、心衰常温组(HFNT组)、心衰低温EPO组(HFLT+EPO组)和心衰低温LY294002组(HFLT+EPO+LY组)。然后将所有大鼠放置于气候箱中(CON、HFLT、HFLT+EPO和HFLT+EPO+LY组为低温环境;HFNT组为常温)。超声心动图检测各组大鼠心功能,然后处死大鼠并留取心脏标本,TUNEL法测心肌细胞凋亡,荧光定量PCR测心肌组织中Fas和PI3K mRNA的表达,Western blot测大鼠心肌组织中热休克蛋白70(HSP70)、Akt和p-Akt的水平。结果:低温下心衰大鼠心功能明显低于常温下心衰大鼠,HFLT+EPO组大鼠心功能较HFLT组明显改善,给予LY294002干预后HFLT+EPO+LY组大鼠心功能明显低于HFLT+EPO组;HFLT组及HFNT组凋亡指数均高于CON组(P<0.01),HFLT组凋亡指数又明显高于HFNT组(P<0.05),HFLT+EPO组凋亡指数明显低于HFLT组(P<0.01)。Fas mRNA在HFLT组心肌组织中的表达明显高于HFNT组,PI3K mRNA在HFLT组和HFNT组心肌组织中的表达差异无统计学显著性,HFLT+EPO组心肌组织中Fas的mRNA表达明显低于HFLT组(P<0.01)和HFLT+EPO+LY组(P<0.05),而PI3K的mRNA表达则明显高于HFLT组和HFLT+EPO+LY组(P<0.05)。HFLT+EPO组大鼠心肌组织中p-Akt和HSP70的水平明显高于HFLT组和HFLT+EPO+LY组(P<0.05),CON、HFLT和HFNT组大鼠心肌组织中p-Akt和HSP70的蛋白水平差异无统计学显著性。所有大鼠心肌组织中Akt的水平差异无统计学显著性。结论:EPO活化PI3K/Akt后,上调内源性保护途径中HSP70的表达并抑制细胞凋亡,从而对低温下的心衰大鼠心脏起保护作用。

低剂量LBH589通过PI3K/AKT途径诱导对上皮性卵巢癌细胞凋亡作用机制研究

目的:探讨低剂量LBH589通过PI3K/AKT途径诱导对上皮性卵巢癌细胞凋亡作用机制的影响。方法:以上皮性卵巢癌细胞OVCAR-3为研究对象,使用TUNEL和流式细胞术,分别检测添加(实验组)与不添加(对照组)低剂量LBH589上皮性卵巢癌细胞的细胞凋亡情况与周期变化;MTT法检测低剂量LBH589对上皮性卵巢癌细胞增殖的抑制情况;Westernblotting检测2组中PI3K和AKT表达情况以及其磷酸化的情况。结果:实验组细胞凋亡指数明显高于对照组的(3.86±1.26)%(P<0.01),上皮性卵巢癌细胞S期数量(18.27±1.66)%,明显低于对照组的(42.26±1.35)%(P<0.01),实验组12、24、36、48h抑制率分别为(12.35±0.27)%、(21.24±0.33)%、(33.54±0.26)%、(41.23±0.52)%,对照组抑制率始终为0;实验组的EOC细胞对顺铂的敏感性显著增加(P<0.01),逆转系数是对照组的3.26倍,明显抑制PI3K和AKT在卵巢癌细胞中的表达并抑制其磷酸化(P<0.01)。结论:低剂量LBH589能增加上皮性卵巢癌细胞OVCAR-3的凋亡,并可能通过PI3K/AKT通路逆转顺铂耐药。

枸杞多糖通过PI3K/AKT途径对大鼠胶质瘤细胞生物学特性影响

目的分析枸杞多糖通过PI3K/AKT途径对大鼠胶质瘤细胞生物学特性的影响。方法实验动物选择来自上海斯莱克实验动物有限公司的清洁级雄性大鼠80只,将以上大鼠按照随机原则分为4组,每组大鼠20只,分别为对照组、模型组、空白组以及对照组。空白组不做任何处理,模型组采用C6单细胞悬液进行大鼠胶质瘤模型制备,治疗组采用枸杞多糖进行处理,对照组采用饮用水进行处理。比较4组大鼠的脑胶质瘤体积、PI3K、AKT水平、凋亡情况以及周围组织的侵染情况之间的差异。结果对照组、模型组以及治疗组实验大鼠的脑胶质瘤体积之间的差异存在统计学意义(P<0.05),经两两比较发现,对照组以及模型组实验大鼠的脑胶质瘤体积之间的差异不存在统计学意义(P>0.05),治疗组实验大鼠的脑胶质瘤体积显著低于对照组以及模型组,4组实验大鼠的PI3K、AKT水平之间的差异存在统计学意义(P<0.05),经两两比较发现,对照组以及模型组实验大鼠的PI3K、AKT水平之间的差异不存在统计学意义(P>0.05),PI3K、AKT水平从高到低依次为空白组、治疗组以及模型组;验大鼠的肿瘤细胞的凋亡率以及细胞侵染数之间的差异存在统计学意义(P<0.05),经两两比较发现,对照组以及模型组实验大鼠肿瘤细胞的凋亡率以及细胞侵染数之间的差异不存在统计学意义(P>0.05),治疗组实验大鼠的肿瘤凋亡率显著高于对照组以及模型组,治疗组患者的脑胶质肿瘤细胞侵染数显著低于对照组以及模型组。结论枸杞多糖通过PI3K/AKT途径,显著降低实验大鼠的肿瘤侵染情况,提升肿瘤的凋亡率,对于疾病的治疗具有重要意义。