调控HER4-PI3K/AKt轴对骨肉瘤恶性生物学行为和干性表达的影响

目的探讨HER4基因操控对骨肉瘤细胞的恶性生物学特征和干细胞样特点的影响以及可能的机制。方法用Qrt-PCR、western blotting方法分析HER4 mRNA以及蛋白水平。MTT法和集落形成法被用来评价MG-63细胞活性和增殖能力。短发夹RNA(shRNA)干扰预处理、菌落形成、迁移、侵袭和western blotting实验确定HER-4调节骨肉瘤细胞增殖和侵袭/迁移的机制。采用球形成实验和CD133+细胞群检测HER-4诱导的干细胞样特征。结果HER4在骨肉瘤细胞中过表达。Sh-HER4表现出明显的细胞活力、集落形成和侵袭/迁移抑制能力。此外,HER4的敲除显著降低了CD133阳性细胞的球形大小和比例,以及干细胞标志物的表达。从机制上看,HER4通过失活PI3K/AKT通路促进骨肉瘤进展。结论综上所述,这些结果表明HER4是骨肉瘤进展和干细胞调节的一个新靶点,可能对开发治疗骨肉瘤的方法有价值。

基于PI3K/AKT/mTOR信号轴探讨桂枝芍药知母汤干预类风湿关节炎大鼠自噬的作用机制

目的:研究桂枝芍药知母汤(GSZD)调控PI3K/AKT/mTOR信号轴干预类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大鼠自噬治疗RA的作用机制。方法:将60只大鼠随机分为正常组、模型组、GSZD低、中、高剂量和雷帕霉素组,除正常组外,其余各组均给予牛Ⅱ型胶原蛋白皮下注射建立RA模型,并给予相应药物干预4周。定期监测大鼠足垫厚度并进行关节炎症指数(arthritis index,AI)评分。4周后,取膝关节滑膜组织,采用HE染色观察病理形态变化;透射电镜观察滑膜细胞超微结构变化;qRT-PCR和Western blot分别检测Beclin1、LC3、p62、PI3K、AKT、mTOR mRNA及蛋白表达。结果:GSZD可有效减轻RA大鼠的足垫厚度、AI评分;透射电镜结果显示RA大鼠滑膜细胞自噬减弱,GSZD治疗后细胞自噬溶酶体和自噬小体数量增加;qRT-PCR和Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠滑膜组织Beclin1 mRNA及蛋白、LC3 mRNA及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达显著降低(P<0.01),p62、PI3K、AKT、mTOR mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,GSZD高剂量组和雷帕霉素组大鼠滑膜组织Beclin1 mRNA及蛋白、LC3 mRNA及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达显著升高(P<0.05,P<0.01),p62、PI3K、AKT、mTOR mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:GSZD可改善RA大鼠足垫厚度和病理形态,其治疗机制可能与下调PI3K/AKT/mTOR通路,促进自噬有关。

胡椒碱对DMH/DSS诱导实验性结肠癌变的影响及其机制

目的探讨胡椒碱对1,2-二甲基肼(DMH)/右旋糖酐硫酸钠(DSS)诱导实验性结肠癌肿瘤细胞生长和增殖的影响及其具体机制。方法将36只小鼠分为对照组、模型组和胡椒碱组,每组12只。对照组给予生理盐水灌胃;模型组和胡椒碱组通过DMH/DSS复合法建立实验性结肠癌模型后分别给予生理盐水和胡椒碱3.6 mg/(kg·d)灌胃。观察肿瘤负荷和体积,HE染色法观察小鼠结肠的组织学变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RAS/PI3K/AKT相关通路蛋白的表达。结果模型组体重增加值及cleaved PARP、cleaved caspase-3表达水平均显著低于对照组(均P<0.05),Bcl-2、Bax、pan-RAS、p-MEK、p-ERK、PI3K、p-AKT、NF-κBp65、c-Myc、cyclin D1蛋白表达水平均显著高于对照组(均P<0.05)。胡椒碱组体重增加值及cleaved PARP、cleaved caspase-3表达水平均显著高于模型组(均P<0.05);Bcl-2、Bax、pan-RAS、p-MEK、p-ERK、PI3K、p-AKT、NF-κBp65、c-Myc、cyclin D1蛋白表达水平均显著低于模型组(均P<0.05)。结论胡椒碱对DMH/DSS诱导的实验性结肠癌发生具有抑制作用,其抑制作用可能涉及到RAS/PI3K/AKT信号轴。