MiR-18b-5p对大肠癌PTEN/PI3K/Akt2信号通路的调控

目的:探讨miR-18b-5p对大肠癌PTEN/PI3K/Akt2信号转导通路的调控。方法:qRT-PCR方法检测33例大肠癌患者癌组织中miR-18b-5p表达水平,将患者临床病理特征与癌组织miR-18b-5p表达水平进行独立样本t检验和多元线性回归分析。应用microrna.org预测miR-18b-5p靶基因,miR-18b-5p类似物、抑制物转染肠癌细胞SW480及HCT116,qRT-PCR检测细胞PTEN、PI3K、Akt2 mRNA表达水平。结果:在大肠癌患者癌组织中,miR-18b-5p表达水平显著增高,为癌旁组织的3.6倍(P<0.01),其表达水平与肿瘤分化程度、淋巴结转移及TNM分期相关。Microrna.org预测PTEN可能是miR-18b-5p的靶基因,大肠癌细胞转染类似物后PTEN含量明显降低,其下游基因PI3K、Akt2表达增高。结论:miR-18b-5p下调抑癌基因PTEN表达,诱导PI3K/Akt2信号转导通路持续活化,促进了大肠癌的发生发展。

肺复方通过PI3K/Akt/Nrf2信号通路对A549/DDP细胞耐药性的影响

目的观察肺复方对人肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞耐药性的作用及对PI3K/Akt/Nrf2信号通路的影响。方法选用A549/DDP细胞设立不含药血清的空白对照组、肺复方组、顺铂组、联合组,流式细胞术检测各组细胞周期分布和细胞中活性氧(ROS)的变化,Western blotting和RT-PCR检测PI3K/Akt/Nrf2信号通路及下游血红素氧合酶1(HO-1)、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达变化。结果与空白对照组、顺铂组相比,联合组引起细胞G1期阻滞,增加细胞内活性氧的累积,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与空白对照组比,肺复方组和联合组能减少Nrf2核转位,下调p-Akt、HO-1、NQO1、MRP1蛋白表达和mRNA表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论肺复方能够通过调控PI3K/Akt/Nrf2信号通路增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。

汉黄芩素通过调控miR-451/PI3K/AKT/RXRA/Bcl-2信号通路改善低氧诱导的肺动脉高压

目的:评价汉黄芩素对低氧诱导的肺动脉高压(HPH)的保护作用及其相关分子机制。方法:在体内采用成年雄性野生型C57BL/6小鼠建立HPH模型,将小鼠随机分为3组:对照组(N)、低氧(H+Saline)组、低氧+汉黄芩素(H+w)组。造模3周后,使用压力传感器系统采集小鼠血流动力学指标;肺小动脉管壁直径/管总直径(WT/TT)、肺小动脉管壁面积/管总面积(WA/TA)来评估肺动脉结构重塑;基于网络药理学方法筛选汉黄芩素作用于HPH潜在靶点及分子信号通路。在体外采用小鼠肺动脉平滑肌细胞(MPASMCs),将细胞分为5组:常氧(N)组、低氧(H+PBS)组、低氧+低剂量汉黄芩素(H+40μmol/L w)组、低氧+高剂量汉黄芩素(H+80μmol/L w)组、低氧+高剂量汉黄芩素+740Y-P(H+80μmol/L w+740Y-P)组。N组在常氧(5%CO_(2),21%O_(2),74%N2,37℃)环境中培养48 h,H+PBS、H+40μmol/L w、H+80μmol/L w、H+80μmol/L w+740Y-P组在低氧(5%CO_(2),3%O_(2),92%N2,37℃)环境中培养48 h。通过CCK-8、Ed U法检测评估细胞增殖能力,Transwell和伤口愈合/划痕实验用于检测评估细胞迁移能力,Western blot检测PI3K/AKT/RXRA/Bcl-2信号通路的主要蛋白(P-PI3K、PI3K、P-AKT、AKT、RXRA、Bcl-2)的表达,并利用PI3K通路激活剂740Y-P进行功能回补实验;RT-q PCR检测汉黄芩素对miR-451表达水平的影响,Western blot检测汉黄芩素对PI3K/AKT/RXRA/Bcl-2通路上游调控因子CAB39和MIF表达的影响。结果:与对照组相比,低氧组MPASMCs的增殖、迁移能力以及小鼠右心室压力(RVSP)显著增加(P<0.05),肺动脉结构发生显著重构,经汉黄芩素干预后MPASMCs的增殖、迁移能力以及小鼠RVSP显著下降(P<0.05),肺动脉结构重塑得到显著改善。与对照组相比,低氧组中PI3K/AKT/RXRA/Bcl-2信号通路相关蛋白p-PI3K、p-AKT、RXRA、Bcl-2表达显著升高;与低氧组相比,汉黄芩素干预组中PI3K/AKT/RXRA/Bcl-2信号通路相关的蛋白表达水平显著下调(P<0.05);功能回补实验证实在缺氧条件下,激活PI3K通路能够显著削弱汉黄芩素对MPASMCs增殖抑制效应。与对照组相比,低氧组中CAB39和MIF表达水平显著上升,miR-451表达水平显著减少(P<0.05);与低氧组相比,汉黄芩素干预组中CAB39和MIF表达水平显著下降,miR-451表达水平显著上升(P<0.05);miR-451 inhibitor干预能够部分逆转汉黄芩素对MPASMCs增殖和迁移能力的抑制效应(P<0.05)。结论:汉黄芩素可能通过上调mi R-451的表达靶向调控CAB39和MIF进而抑制PI3K/AKT/RXRA/Bcl-2信号通路,抑制低氧诱导的MPASMCs的增殖和迁移、改善HPH小鼠右心室压力和肺动脉结构重塑,最终缓解肺动脉高压。

藤黄健骨胶囊对膝骨关节炎鼠骨代谢指标及PI3K/Akt/Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的 探讨藤黄健骨胶囊对膝骨关节炎鼠骨代谢指标及PI3K/Akt/Nrf2/HO-1信号通路的影响。方法 采用木瓜蛋白酶构建膝骨关节炎大鼠(KOA)模型,将造模成功的40只大鼠按随机数字表法分为模型组、阳性药物组、低剂量组和高剂量组,每组各10只。未造模的10只大鼠作为对照组。建模4周后,阳性药物组、低剂量组和高剂量组分别以美洛昔康水溶液、0.09 g/kg以及0.36 g/kg藤黄健骨胶囊干预,模型组和对照组以等量生理盐水灌胃,1次/d。给药4周后,观察比较各组大鼠Mankin评分及关节肿胀程度,酶联免疫吸附(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测白介素-1β(Interleukin 1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、金属基质蛋白酶3(Metallomatrix proteinase 3,MMP3)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(Tissue metalloproteinase inhibitor 1,TIMP-1)、骨钙素(Bone gamma-carboxyglutamic-acid-containing proteins,BGP)、抗洒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphatase,TRACP)、I型胶原C端肽(Type I collagen carboxy-terminal peptide,CTX),Western blot法检测软骨组织PI3K/Akt/Nrf2/HO-1信号通路蛋白表达情况。结果 HE染色结果显示,对照组大鼠关节面、关节软骨和软骨细胞均正常;而模型组关节面呈不规则,关节软骨含少量软骨细胞或软骨细胞坏死,且关节软骨被纤维组织取代阳性药物组和高剂量组关节表面不规则,软骨细胞数量减少,而低剂量组显示软骨细胞中度坏死。与对照组比较,模型组Mankin评分、关节肿胀程度均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,阳性药物组、高剂量组、低剂量组Mankin评分、关节肿胀程度均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);且各药物组Mankin评分及关节肿胀程度比较,阳性药物组<高剂量组<低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,模型组IL-1β、TNF-α、MMP-3、TIMP-1水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,阳性药物组、高剂量组、低剂量组IL-1β、TNF-α、MMP-3、TIMP-1水平均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);且各药物组IL-1β、TNF-α、MMP-3、TIMP-1水平比较,阳性药物组<高剂量组<低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组,模型组TRACP、CTX水平均升高,BGP水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,阳性药物组、高剂量组、低剂量组TRACP、CTX水平明显降低,BGP水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);且各药物组TRACP、CTX水平比较,阳性药物组<高剂量组<低剂量组,BGP水平比较,阳性药物组>高剂量组>低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,模型组PI3K、Akt、Nrf2、HO-1蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,阳性药物组、高剂量组、低剂量组PI3K、Akt、Nrf2、HO-1蛋白水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);且各药物组PI3K、Akt、Nrf2、HO-1蛋白水平比较,阳性药物组>高剂量组>低剂量组,差异有统计学意(P<0.05)。结论 藤黄健骨胶囊可显著改善膝骨关节炎鼠骨代谢水平,缓解膝骨关节炎症状,其可能机制与激活PI3K/Akt/Nrf2/HO-1信号通路有关。

miR-361介导PI3K/Akt/Ca^(2+)通路对大鼠肥大细胞增殖情况及组胺与IL-4表达水平的影响

目的:探讨miR-361介导PI3K/AKt/Ca^(2+)通路对活化大鼠肥大细胞增殖情况及组胺与白细胞介素-4(IL-4)表达水平的影响。方法:将大鼠肥大细胞(RBL-2H3细胞)分为miR-361过表达组、miR-361抑制组、miR-361对照组和正常对照组,miR-361过表达组、miR-361抑制组、miR-361对照组细胞分别转染miR-361过表达、miR-361抑制及miR-361无义序列寡核苷酸片段,测定并比较各组细胞miR-361 mRNA、组胺、IL-4及PI3K/AKt/Ca^(2+)通路相关蛋白水平。结果:miR-361过表达组细胞miR-361 mRNA相对表达水平高于miR-361抑制组、miR-361对照组及正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CCK-8法检测结果显示,miR-361过表达组24、48、72 h细胞增值率均低于miR-361抑制组、miR-361对照组及正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ELISA法检测结果显示,miR-361过表达组细胞组胺和IL-4水平的表达水平低于miR-361抑制组、miR-361对照组及正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western印迹法检测结果显示,miR-361过表达组细胞p-AKT、AKT、p-PI3K、PI3K蛋白表达水平均高于miR-361抑制组、miR-361对照组及正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-361过表达可抑制大鼠肥大细胞的增殖,降低组胺与IL-4的表达水平,其作用机制可能与其能够提高PI3K/AKt/Ca^(2+)通路活性有关。

健脾化痰祛瘀法对肥胖2型糖尿病模型糖脂代谢及IRS-1/PI3K/Akt2信号通路的影响

目的:探讨健脾化痰祛瘀法对肥胖2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠的糖脂代谢作用及其机制。方法:通过高脂饮食联合小剂量链佐菌素诱导的T2DM大鼠,分组对照组、模型组、健脾化痰祛瘀方低剂量组、健脾化痰祛瘀方中剂量组、健脾化痰祛瘀方高剂量组。ELISA试剂盒检测血清中促炎细胞因子、生化指标和肝脏中与糖代谢相关的关键酶的活性。qPCR检测胰岛素信号通路关键靶点的mRNA水平。采用Western blot法检测肝脏中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)和葡萄糖转运蛋白2(Glut2)的表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠血清空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平显著升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著降低。而与模型组相比,健脾化痰祛瘀方治疗显著降低了FINS、TG、TC、LDL-C和FFA水平,降低HDL-C水平。此外,与对照组相比,模型组血清CRP、IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-1β、NO水平明显升高。然而,与模型组相比,健脾化痰祛瘀方治疗后,这些促炎细胞因子明显下降。与对照组大鼠相比,模型组大鼠中PEPCK、FBPase、G6Pase和GP的活性增加,但通过健脾化痰祛瘀方治疗后这些酶的活性明显降低。此外,与对照组大鼠相比,模型组大鼠中IRS-1、p-PI3K、p-Akt2的表达增加,但通过健脾化痰祛瘀方治疗后IRS-1、p-PI3K、p-Akt2的表达明显降低。结论:健脾化痰祛瘀法可能通过激活IRS-1/PI3K/Akt2信号通路改善T2DM大鼠的糖脂代谢。

基于PTEN与JAK对PI3K/Akt信号通路的影响探讨加味小蓟饮子治疗急性放射性膀胱炎的作用机制

目的:探讨加味小蓟饮子治疗急性放射性膀胱炎的作用机制。方法:50只ICR小鼠随机分为空白组12只和造模组38只。采用X射线辐照仪造模,造模后随机取2只小鼠处死鉴定模型是否成功。将剩余造模组小鼠随机分为模型组、小蓟饮子组和加味小蓟饮子组各12只。空白组、模型组、小蓟饮子组、加味小蓟饮子组分别予0.9%氯化钠、0.9%氯化钠、小蓟饮子药液,加味小蓟饮子药液灌胃处理,每日1次,连续7 d。末次灌胃后24 h处死取材,酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)含量。Western Blot法检测小鼠膀胱丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)、E钙粘着蛋白(E-Cadherin)、内皮素-1(ET-1)、JAK激酶(JAK)、核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)、Smad蛋白2(Smad2)、Smad蛋白3(Smad3)、转化生长因子β1(TGF-β1)、尿斑蛋白3(Upk3)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白相对表达水平;实时荧光免疫定量-聚合酶链式反应法(RT-PCR)法检测小鼠膀胱微RNA-21(MicroRNA-21,miR-21)、PTEN、JAK、PI3K、AKT、Nrf2信使核糖核酸(mRNA)相对表达水平。结果:相较模型组,加味小蓟饮子组小鼠体内SOD、GSH-Px、T-AOC、AKT、E-Cadherin、JAK、Nrf2、PI3K、Upk3含量升高(P<0.05),MDA、ET-1、PTEN、Smad2、Smad3、TGF-β1、VEGF含量下降(P<0.05);与模型组和小蓟饮子组比较,加味小蓟饮子miR-21 mRNA表达升高(P<0.05)。结论:加味小蓟饮子组可能通过上调miR-21表达,同调PTEN、JAK蛋白以激活下游PI3K/AKT/Nrf2信号通路治疗急性放射性膀胱炎。

基于PI3K/Akt/Nrf2信号通路探讨小蓟饮子治疗小鼠放射性膀胱炎作用机制

目的基于PI3K/Akt/Nrf2信号通路探讨小蓟饮子治疗小鼠放射性膀胱炎(RC)的作用机制。方法将30只健康雌性SPF级ICR小鼠采用随机数字表法分为11只空白组和19只造模组。空白组不予造模,造模组腹腔麻醉后暴露膀胱部位于X射线辐照仪下以6-MV X射线、2 Gy/min照射10 min建立RC小鼠模型,空白组和造模组各随机取3只处死后,在光镜下观察膀胱组织形态学改变以确定造模成功。造模成功后将造模组按随机数字表法分为模型组和中药组各8只,中药组按10 mL/(kg·d)灌胃1.68 g/mL小蓟饮子浓缩液,空白组和模型组灌胃等体积生理盐水,连续灌胃7 d。灌胃结束后使用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定小鼠眼球血氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC);实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测膀胱组织中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA相对表达水平。结果与空白组比较,模型组小鼠眼球血中SOD、T-AOC、GSH-Px含量均降低(P均<0.05),MDA含量升高(P<0.05),膀胱组织中PI3K、Akt、Nrf2、HO-1 mRNA相对表达水平均升高(P均<0.05);与模型组比较,中药组小鼠眼球血中SOD、T-AOC、GSH-Px含量均升高(P<0.01或P<0.05),MDA含量降低(P<0.05),膀胱组织中PI3K、Akt、Nrf2、HO-1 mRNA相对表达水平均升高(P均<0.01)。结论小蓟饮子可有效改善RC小鼠模型的损伤,其作用机制可能与PI3K/Akt/Nrf2信号通路调控氧化应激有关。

护巢饮调节PI3K/Akt/Nrf2/HO-1通路对早发性卵巢功能不全大鼠氧化应激的影响

目的研究护巢饮对早发性卵巢功能不全大鼠氧化应激及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(PI3K/Akt/Nrf2/HO-1)通路的调节作用。方法取12只SD大鼠作为正常组,取60只SD大鼠采用雷公藤多苷灌胃法建立早发性卵巢功能不全模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、护巢饮低剂量组、护巢饮中剂量组、护巢饮高剂量组及戊酸雌二醇组,每组12只。护巢饮低、中、高剂量组大鼠分别给予5 g/kg、10 g/kg、20 g/kg的护巢饮灌胃,戊酸雌二醇组大鼠给予0.1 mg/kg的戊酸雌二醇灌胃,均1次/d,连续15 d。ELISA法测定大鼠血清促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E 2)、抗缪勒管激素(AMH)、抑制素B(INH-B)、促黄体生成素(LH)水平及卵巢组织中活性氧(ROS)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,称量卵巢湿重、子宫湿重,计算卵巢指数、子宫指数,HE染色法观察大鼠卵巢组织病理学形态,qRT-PCR法测定卵巢组织中Nrf2、HO-1 mRNA表达量,Western blot法测定卵巢组织中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、Nrf2、HO-1蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组大鼠血清FSH、LH水平及卵巢组织中ROS、MDA含量均明显升高(P均<0.05),血清E 2、AMH、INH-B水平及卵巢组织中CAT、SOD含量和卵巢湿重、卵巢指数、子宫湿重、子宫指数均明显降低(P均<0.05),闭锁卵泡数量明显增多(P<0.05),初级卵泡、窦前卵泡、窦状卵泡数量均明显减少(P均<0.05),卵巢组织中Nrf2、HO-1 mRNA表达量和p-PI3K、p-Akt、Nrf2、HO-1蛋白表达量均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,护巢饮各组及戊酸雌二醇组血清FSH、LH水平及卵巢组织中ROS、MDA含量均明显降低(P均<0.05),血清E 2、AMH、INH-B水平及卵巢组织中CAT、SOD含量和卵巢湿重、卵巢指数、子宫湿重、子宫指数均明显升高(P均<0.05),闭锁卵泡数量明显减少(P均<0.05),初级卵泡、窦前卵泡、窦状卵泡数量均明显增多(P均<0.05),卵巢组织中Nrf2、HO-1 mRNA表达量和p-PI3K、p-Akt、Nrf2、HO-1蛋白表达量均明显升高(P均<0.05);且随着护巢饮剂量的增加,各项指标变化更明显。结论护巢饮能够调节早发性卵巢功能不全大鼠激素水平,抑制卵巢组织氧化损伤及病理改变,促进卵巢功能的恢复,其机制可能与调节PI3K/Akt/Nrf2/HO-1通路有关。

杜仲绿原酸通过PI3K/AKT/Nrf-2通路增强视网膜母细胞瘤细胞系HXO-Rb44放射敏感性

目的探究杜仲绿原酸(CGA)通过调控PI3K/AKT/Nrf-2通路,对视网膜母细胞瘤细胞系HXO-Rb44放射敏感性的增强作用。方法通过不同浓度的CGA处理HXO-Rb44细胞,检测IC10,作为后续实验中CGA浓度。将细胞分为Ctrl、Radio、CGA、Radio+CGA组,Radio组给予4 MV X射线照射24 h,CGA组使用CGA处理24 h,Radio+CGA组在CGA处理24 h后再给予4 MV X射线照射24 h,流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡,蛋白质印迹检测Ki67、依赖还原型辅酶I/II醌氧化还原酶I(NQO1)、活化型半胱天冬酶(cl-caspase-3)、硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)、活化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达。进一步通过PI3K激活剂740Y-P处理细胞,检测细胞周期、凋亡、增殖和相关蛋白表达、PI3K/AKT/Nrf2通路蛋白表达。结果随着CGA浓度的增高,细胞的相对存活率降低,药物毒性呈浓度依赖性,IC10为81.59μmol/L。与Ctrl组相比,Radio和CGA组G2/M期细胞比例显著升高,细胞凋亡比率显著升高(P<0.01);与Radio组相比,Radio+CGA组G2/M期细胞比例和细胞凋亡比率进一步显著升高(P<0.01)。同时在蛋白水平上,与Ctrl组相比,Radio和CGA组Ki67、NQO1、TrxR1、p-PI3K、Nrf2蛋白表达及p-AKT/AKT比率显著降低(P<0.01);放射和CGA联合作用进一步降低以上各指标(P<0.01)。此外,PI3K激活剂可逆转放射对细胞周期、增殖、凋亡以及PI3K/AKT/Nrf2通路的作用,CGA可恢复放射引起的上述各指标的变化(P<0.01)。结论CGA可增强HXO-Rb44细胞的放射敏感性,其作用机制与抑制PI3K/AKT/Nrf2通路相关。

藤茶提取物通过PI3K/Akt/Bcl-2途径抑制人前列腺癌LNCaP细胞增殖的机制研究

目的探讨藤茶提取物对人前列腺癌细胞LNCaP细胞增殖抑制的作用机制。方法 LNCaP细胞分为对照组、藤茶提取物不同浓度组,MTT法检测细胞的增殖抑制率,计算半数抑制浓度(IC50),流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率,Western-blot法检测PI3K/Akt通路PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2蛋白的表达。结果藤茶提取物在10~50μg/mL浓度范围内对LNCaP细胞增殖抑制作用随剂量的升高而升高,IC50为28.45μg/mL;与对照组比,藤茶提取物25、50μg/mL处理组LNCaP细胞凋亡率明显升高(P<0.05,P<0.01),p-Akt、Bcl-2蛋白表达显著下调(P<0.05,P<0.01)。结论藤茶提取物对LNCaP细胞具有增殖抑制作用,其机制可能是通过抑制PI3K/Akt细胞信号通路下调Bcl-2蛋白表达从而促进凋亡。

红景天苷通过调控PI3K/AKT/Nrf2通路对高糖诱导的心肌细胞的保护作用及机制研究

目的探究红景天苷(SAL)对高糖诱导的心肌细胞的保护作用并进一步研究其可能的机制。方法体外培养H9c2细胞,分为空白组、高糖组、高糖+SAL组、高糖+SAL+LY294002(特异性PI3K抑制剂)组。空白组细胞用含有5.5 mmoL/L葡萄糖的培养液常规培养;其余三组细胞用含有33.3 mmoL/L葡萄糖的培养液培养;另外高糖+SAL组在更换为高糖培养液前2 h加入29.6 mmol/L SAL预处理,而高糖+SAL+LY294002组则在加入SAL前加入10μmol/L LY294002预处理2 h。CCK-8实验和TUNEL实验检测细胞增殖和凋亡情况。细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量用相应的酶联免疫试剂盒检测,活性氧簇(ROS)水平通过荧光法检测。蛋白免疫印迹法(western blot)检测细胞中蛋白激酶b(AKT)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、核因子促红细胞生成素2相关因子2(Nrf2)蛋白表达和磷酸化水平。结果与空白组相比,高糖组H9c2细胞的存活率降低,而细胞凋亡率、细胞内ROS合成量和MDA含量增加,细胞内SOD和GSH-Px含量减少,同时p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β和Nrf2蛋白表达上调(P均<0.05)。与高糖组相比,高糖+SAL组H9c2细胞的存活率提高,而细胞凋亡率、细胞内ROS合成量和MDA含量减少,细胞内SOD和GSH-Px含量增多,且p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β和Nrf2蛋白表达上调(P<0.05)。与高糖+SAL组相比,高糖+SAL+LY294002组上述指标均被部分或完全逆转(P<0.05)。结论SAL对高糖诱导的H9c2细胞凋亡具有一定的保护作用,可降低细胞内ROS的生成,抑制细胞凋亡,提高细胞存活能力,其作用机制之一可能与激活PI3K/AKT/Nrf2信号通路有关。

大蒜素调控PI3K/Akt/Nrf2通路对大鼠子宫内膜异位症的影响

目的:研究大蒜素对大鼠子宫内膜异位症(EMs)的影响及其机制。方法:采用自体内膜移植的方法制备大鼠EMs模型,取30只模型大鼠随机分为模型组、大蒜素(10mg/kg)组和大蒜素(10mg/kg)+LY294002[磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂,40mg/kg]组,每组10只;另取10只大鼠设为假手术组。各组分别1次/d腹腔注射给药(假手术组和模型组给予生理盐水),疗程4周。通过卡尺测量子宫内膜异位病灶体积并行盆腔粘连评分;HE染色法行子宫内膜病理学检查;ELISA法检测异位病灶组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素γ(IFN-γ)含量,生化分析法检测丙二醛(MDA)含量和髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力;Western blot法检测异位病灶组织蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠子宫内膜异位病灶间质致密、血管明显增生、炎性细胞浸润等改变,异位病灶组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IFN-γ、MDA含量升高且MPO、SOD、CAT活力降低(P<0.01),p-Akt、Nrf2、HO-1蛋白表达下调且p-Akt/Akt降低(P<0.01),NF-κB表达上调(P<0.01)。与模型组相比,大蒜素组和大蒜素+LY294002组子宫内膜异位病灶体积和粘连评分降低(P<0.05或P<0.01),异位病灶上皮细胞脱落、间质疏松、新生血管明显减少;TNF-α、IL-1β、IL-6、IFN-γ、MDA含量降低且MPO、SOD、CAT活力升高(P<0.05或P<0.01);p-Akt、Nrf2、HO-1蛋白表达上调且p-Akt/Akt升高(P<0.01),NF-κB表达下调(P<0.01)。与大蒜素组相比,大蒜素+LY294002组异位病灶体积和粘连评分升高(P<0.01),异位病灶新生血管增多;TNF-α、IL-1β、IL-6、IFN-γ、MDA含量升高而MPO、SOD、CAT活力降低(P<0.01);p-Akt、Nrf2、HO-1蛋白表达下调且p-Akt/Akt降低(P<0.01),NF-κB表达上调(P<0.01)。结论:大蒜素对大鼠EMs具有一定的治疗作用;其机制可能与激活PI3K/Akt/Nrf2通路,进而抑制炎症反应和氧化应激有关。

姜黄素对肺腺癌A549细胞PI3K/Akt/Bcl-2信号通路的作用

目的:研究姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖率、凋亡和PI3K/Akt/Bcl-2信号通路的影响。方法:采用细胞计数法绘制肺腺癌A549细胞生长曲线,MTT法测定姜黄素对肺腺癌A549细胞抑制率。将不同浓度姜黄素作用于肺腺癌A549细胞24h后,显微镜下观察细胞形态;TUNEL法检测细胞凋亡率;免疫组化法检测PI3K/Akt/Bcl-2蛋白表达。结果:姜黄素能够抑制肺腺癌A549细胞增殖,且呈一定剂量和时间依赖性;随着药物浓度上升细胞凋亡率明显增高(P<0.05);PI3K、Akt和Bcl-2蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论:姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖具有抑制作用,其作用可能是诱导细胞凋亡及抑制PI3K/Akt/Bcl-2信号通路来实现的。

黄芪甲苷基于PI3K/Akt/Bcl-2信号通路对PC12细胞OGD/R损伤的保护机制研究

目的:探究黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ)对大鼠嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma 12,PC12)细胞缺氧缺糖复供(oxygen deprivation reoxygenation,OGD/R)损伤的保护作用及基于磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)及B 细胞淋巴瘤-2 蛋白(B-cell lymphoma-2,Bcl-2) PI3K/Akt/Bcl-2 信号通路的机制研究。方法:体外培养 PC12 细胞,细胞随机分为空白对照组、模型组(OGD/R),尼莫地平阳性对照组(5 μmol·L^-1)和黄芪甲苷组(1.00、0.10、0.01 μmol·L^-1),除空白组外其余各组均建立体外PC12细胞OGD/R模型。CCK-8试剂盒法检测PC12 细胞存活率;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒法测定乳酸脱氢酶的漏出量;采用Hoechst33342和碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染法检测各组细胞凋亡与坏死情况;Western blot检测各组细胞Akt、p-Akt、Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)的蛋白表达情况。结果:黄芪甲苷提高PC12 细胞OGD/R 损伤的细胞存活率,降低LDH 漏出量和细胞凋亡。黄芪甲苷浓度依赖性上调p-Akt/Akt、Bcl-2的蛋白表达和下调促凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表达。PI3K/Akt通路的抑制剂LY2940002 能抑制黄芪甲苷对OGD/R损伤的PC12细胞中凋亡相关蛋白的影响。结论:黄芪甲苷对OGD/R损伤的PC12细胞具有保护作用,且其保护作用机制可能与PI3K/Akt/Bcl-2信号通路有关。

microRNA-124通过调控PI3K/Akt2信号通路改善七氟醚诱导的新生大鼠神经缺陷

目的探讨microRNA-124对七氟醚诱导新生大鼠神经缺陷的影响及可能机制。方法40只SD大鼠随机分为对照组(CON)、七氟醚组(SEV)、Agomir NC+SEV组、miR-124 Agomir+SEV组,每组10只。Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力;双染法检测海马神经元凋亡情况;RT-qPCR方法检测大鼠BDNF、PI3K、Akt2 mRNA的表达;Western blot检测海马组织中BDNF、PI3K、Akt2蛋白表达。结果与CON组比较,SEV组逃避潜伏期延长,目标象限时间百分比缩短,穿越平台次数减少,海马组织中BDNF、PI3K、Akt2蛋白表达降低(P<0.001),海马神经元细胞凋亡增加;与SEV组比较,miR-124 Agomir+SEV组目标象限时间百分比延长(P<0.01)、逃避潜伏期缩短(P<0.05),穿越平台次数增加(P<0.05),海马组织中BDNF、PI3K、Akt2蛋白表达升高(P<0.01),海马神经元细胞凋亡减少。结论miR-124可能通过调控PI3K/Akt2信号通路改善七氟醚诱导的大鼠神经功能缺陷。

大黄素介导IRS-2/PI3K/Akt通路干预大鼠非酒精性脂肪性肝炎的实验研究

目的探讨大黄素通过介导IRS-2/PI3 K/Akt通路对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的影响。方法随机选取25只雄性大鼠给予高脂饲料喂养12周制备NASH模型,12周后取5只大鼠进行检测,确定NASH模型制备成功,剩余20只大鼠数字表法随机分为模型组(10只)和大黄素组(10只),另取同龄10只雄性未造模大鼠作为正常对照组。大黄素组大鼠给予20 mg/kg的大黄素灌胃,正常对照组和模型组给予等量生理盐水,连续给予8周。对大鼠肝脏进行称重,计算肝指数;检测空腹血糖和空腹胰岛素,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),检测血生化指标。对肝组织进行HE染色,检测肝组织中IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白相对表达量。结果模型组大鼠肝指数、空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR、ALT、AST、TG、TC和LDL-C水平较正常对照组增高,HDL-C水平较正常对照组降低(P<0.01);大黄素组大鼠肝指数、空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR、ALT、AST、TG、TC和LDL-C水平较模型组降低,HDL-C水平较模型组增高(P<0.05)病理检测发现,模型组出现大量脂肪变性,存在炎性细胞浸润和细胞气球样变性,大黄素组病灶明显较模型组减轻。模型组大鼠IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白相对表达量较正常对照组降低(P<0.05),大黄素组大鼠IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白相对表达量较模型组增高(P<0.05)。结论大黄素可以提高IRS-2/PI3K/Akt通路的活性,改善高脂诱导的NASH大鼠肝脏脂肪沉积及胰岛素抵抗。

基于PI3K/Akt/Nrf2信号通路探讨地龙蛋白对自发性高血压大鼠的血管内皮功能保护机制

目的:观察地龙蛋白对自发性高血压大鼠(SHR)主动脉磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/核因子E2相关因子2(PI3K/Akt/Nrf2)通路相关因子表达的影响,探讨其治疗高血压血管内皮功能障碍(VED)的作用机制。方法:选取10只10周龄Wistar Kyoto(WKY)大鼠及50只SHR适应性喂养1周,WKY大鼠作为正常组,50只SHR按体质量随机分为模型组、缬沙坦组(8×10^(-3) g·kg^(-1)·d^(-1))、地龙蛋白高剂量组(0.2g·kg^(-1)·d^(-1))、地龙蛋白中剂量组(0.1g·kg^(-1)·d^(-1))、地龙蛋白低剂量组(0.05 g·kg^(-1)·d^(-1)),正常组和模型组大鼠用等体积双蒸水灌胃。药物干预期间观察各组大鼠一般情况并分别于给药前及给药后每隔1周特定时间监测大鼠血压。药物干预8周后酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组大鼠血清中血管紧张素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)、内皮素-1(ET-1)活性水平;生化试剂盒法检测一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)水平,超氧化物歧化酶(SOD)活性、亚铁离子(Fe2+)浓度;苏木素-伊红(HE)染色观察主动脉内膜变化情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测主动脉组织PI3K、Akt、Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胸主动脉中p-PI3K(Tyr467/199)、PI3K、p-Akt(Ser473)、Akt、Nrf2、HO-1、GPX4蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠体质量偏低,大鼠较烦躁易激惹,内皮损伤程度较重;模型组大鼠血压、血清Ang-Ⅱ、ET1、MDA、Fe2+均显著升高(P<0.01),NO显著下降(P<0.01),主动脉组织中p-PI3K(Tyr467/199)、PI3K、p-Akt(Ser473)、Akt、Nrf2、HO-1、GPX4蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠体质量变化不明显,大鼠相对安静,内皮损伤程度改善;各治疗组大鼠血压、血清Ang-Ⅱ、ET1、MDA、Fe2+均显著下降(P<0.01),NO明显升高(P<0.05),p-PI3K(Tyr467/199)、PI3K、p-Akt(Ser473)、Akt、Nrf2、HO-1、GPX4蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论:地龙蛋白可通过改善SHR内皮功能障碍起到降压作用,其机制可能与调控PI3K/Akt/Nrf2相关信号通路、抑制氧化应激及铁死亡相关。

基于PI3K/Akt/Nrf2信号通路探讨天王补心丹加减对睡眠剥夺小鼠皮肤影响的作用机制

目的:观察天王补心丹加减(MTBD)对睡眠剥夺(SD)小鼠皮肤的作用,并探讨其作用机制。方法:将60只2月龄雌性昆明种小鼠随机分为空白组、模型组、维生素C(VC,0.08 g·kg^(-1))组和MTBD低、中、高剂量(6.5、12.5、25 g·kg^(-1))组。除空白组外,其余组均复制SD小鼠模型采用多平台水环境法行每日睡眠剥夺18 h(15:00至次日9:00),连续14 d,并从第2周起叠加腹腔注射咖啡因(CAF)7.5 mg·kg^(-1),连续7 d;造模同时,空白组、模型组灌胃生理盐水(0.01 mL·g^(-1)),其余各组均灌胃相应药物治疗。实验结束后当天进行一般表现的观察记录(如小鼠体质量、精神、毛发、皮肤等);取材后,采用苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)染色法,光学显微镜下观察皮肤组织病理形态变化;测量皮肤厚度、皮肤含水率;生化试剂盒检测皮肤羟脯氨酸(HYP)含量、皮肤及血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-1β含量;蛋白免疫印迹法检测皮肤组织Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化(p)-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶(HO)-1、核转录因子(NF)-κB蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组有不同程度的变化,在一般表现上,出现了诸如体质量减轻(P<0.01),精神萎靡、毛色晦暗、皮肤皱纹形成等衰老迹象;对组织标本检测,结果显示,光学显微镜下可见皮肤变薄,真表皮连接(DEJ)扁平化,胶原纤维减少;皮肤组织的厚度和含水率降低,皮肤组织HYP含量显著减少(P<0.01),皮肤和血清SOD活性显著下降(P<0.01)及MDA含量显著增加(P<0.01);血清IL-6、TNF-α、IL-1β含量显著增加(P<0.01);皮肤ColⅠ、ColⅢ、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、Nrf2及HO-1蛋白表达明显减少(P<0.05,P<0.01),NF-κB表达增加(P<0.01)。与模型组比较,VC组和MTBD低剂量组皮肤的含水率、HYP含量、SOD活性及ColⅠ、ColⅢ、p-PI3K/PI3K蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01),血清MDA含量减少(P<0.05),此外MTBD低剂量组还检测出血清IL-6、IL-1β含量减少(P<0.05);而MTBD中、高剂量组的上述各指标均有改善(P<0.05,P<0.01)。结论:SD会加促SD模型鼠皮肤老化进程。MTBD可以改善这种现象,发挥抗炎、抗氧化作用,其作用机制可能与激活PI3K/Akt/Nrf2信号通路相关。

芦丁在BV2细胞中抗弓形虫的作用及机制分析

本研究旨在分析芦丁在BV2细胞中的体外抗弓形虫作用及其潜在机制。首先通过CCK8法、间接荧光染色法等测定芦丁的细胞毒性、弓形虫抑制率及增殖情况以探究芦丁在BV2细胞中的抗弓形虫作用;随后,将细胞分成4组,分别为:空白组(Normal)、感染对照组(T.gondii)、感染后低剂量芦丁治疗组(Rut 50)和感染后高剂量芦丁治疗组(Rut 100),进行弓形虫感染及芦丁处理试验,并用ELISA等方法检测细胞培养液上清液中抗氧化酶SOD、GSH及脂质氧化产物MDA水平,炎症因子TNF-α、IL-6及IL-1β水平,用Western blot检测BV2细胞中PI3K/AKT/Nrf2/HO-1、TLR4/NF-κB及P2X7R/NLRP3信号通路中关键蛋白表达量。结果表明,在BV2细胞中,50和100μg·mL^(-1)的芦丁具有明显的抗虫效果,可显著抑制弓形虫感染率、入侵能力和增殖(P<0.05)。50和100μg·mL^(-1)的芦丁还可显著增多上清液中的SOD、GSH含量并降低MDA含量(P<0.05),且降低TNF-α、IL-6及IL-1β水平(P<0.05),并显著上调抗氧化通路PI3K/AKT/Nrf2/HO-1、下调炎症通路TLR4/NF-κB及P2X7R/NLRP3中关键蛋白表达量(P<0.05)。结果提示,芦丁在BV2细胞中具有明显的抗弓形虫作用,这可能与其可以通过激活PI3K/AKT/Nrf2/HO-1通路从而增强细胞抗氧化能力、以及抑制TLR4/NF-κB及P2X7R/NLRP3通路从而减弱炎症反应有关。研究结果可为后续探究芦丁体内抗虫效果及分析其对弓形虫性脑损伤保护机制相关研究提供一定的理论参考,并为将芦丁开发成治疗人畜弓形虫病的潜在药物提供科学依据。