抑制PI3K/PKB通路逆转胃癌耐药的作用及其机制

目的观察抑制PI3K/PKB信号通路对胃癌耐药性的逆转作用,并探讨其可能机制。方法通过体内外实验方法检测长春新碱(vincristine,VCR)及联合LY294002(PI3K/PKB通路抑制剂)对SGC7901/VCR细胞的生长抑制作用;采用Western blot及RT-PCR分别检测细胞中PKB、磷酸化PKB的蛋白表达水平及MDR1、Bax、Bcl-2基因表达水平;流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果LY294002能明显增加SGC7901/VCR细胞对VCR的敏感性,促进VCR诱导细胞凋亡,使其耐药指数从40.45降至8.50;LY294002可明显降低耐药细胞中磷酸化PKB的蛋白表达和MDR1、Bcl-2的基因表达水平(P<0.01),促进Bax的基因表达(P<0.01);体内实验显示联合用药组的裸鼠移植瘤大小明显小于VCR组(P<0.01)。结论抑制PI3K/PKB通路可逆转胃癌耐药,其机制可能与降低耐药基因MDR1的表达以及调控相关凋亡基因Bax和Bcl-2的表达有关。

PI3K/PKB信号通路在TGF-β_1诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白中的作用

目的:研究磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白(OPN)的调控作用。方法:体外培养LX-2人肝星状细胞株,予TGF-β1(终浓度2.5、5、10、20μg/L)刺激24 h或予TGF-β1(终浓度10μg/L)刺激12 h、24 h、48 h;先经PI3K/PKB信号通路特异性抑制剂wortmannin(0.1μmol/L)预处理1 h,再予10μg/L TGF-β1刺激24 h,收集细胞,采用real-time PCR及Western blotting法检测OPN表达情况。结果:TGF-β1能够促进LX-2细胞表达OPN,在一定浓度和时间范围内,其表达量随着TGF-β1浓度和时间的增加而增加,呈剂量和时间依赖性关系;经wortmannin预处理再予TGF-β1刺激的LX-2细胞,与对照组相比,OPN表达受到明显抑制(P<0.01)。结论:TGF-β1对LX-2人肝星状细胞OPN表达具有诱导作用,此作用可能受PI3K/PKB信号通路的调控。

肉苁蓉苯乙醇总苷对压力超负荷大鼠心肌肥厚及PI3K/PKB信号通路的影响

目的探讨肉苁蓉苯乙醇总苷(CPhGs)对压力超负荷大鼠心肌肥厚的抑制作用及其可能的作用机制。方法♂SPF级SD大鼠70只,随机分为空白组(Con)、假手术组(Sham)、模型组(Mod)、阳性药对照组(Vst)、CPhGs 125、250、500 mg·kg^-1组。检测心脏超声指标、心脏体质量指数(HWI)、心肌组织病理学变化、心肌细胞面积(AMC),Elisa法检测血浆ET-1、BNP水平,Western blot法检测p-PI3K、PI3K、p-PKB、PKB蛋白表达变化。结果与Mod组相比,CPhGs不同剂量给药后,LVPWT、HWI、血浆ET-1和BNP、AMC均有不同程度下降,LVEDD、LVEF、LVFS以及心肌组织p-PI3K、p-PKB蛋白表达有不同程度的增加,其中CPhGs 250、500 mg·kg^-1组相比于Mod组各指标有明显差异(P<0.05或0.01);与Vst组相比,CPhGs 500 mg·kg^-1组各指标,没有明显差异。结论CPhGs对压力超负荷引起的大鼠心肌肥厚具有抑制作用,其作用可能与PI3K/PKB信号通路的激活有关。

PI3K/PKB信号激活在妊娠滋养细胞疾病发病机制中的作用

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号激活对妊娠滋养细胞疾病(GTD)进展及相关干细胞转录因子FoxD3、Nanog、Stat3、Oct4和Sox2表达的影响。方法:选取20例正常胎盘、38例良性转归葡萄胎(HM-regressed)和13例恶性进展葡萄胎(HM-progressed)、6例绒癌的石蜡包埋组织,采用免疫组化检测p-PKBSer473表达。实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot法检测绒癌细胞株JEG3和JAR中FoxD3、Nanog、Stat3、Oct4和Sox2 mRNA和蛋白表达。CCK8和Transwell小室检测细胞增殖、迁移/侵袭能力。结果:p-PKBSer473表达的免疫组化评分由高到低依次为绒癌、HM-progressed、HM-regressed和正常胎盘,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。PI3K抑制剂LY294002阻遏了PKB的活化,显著减弱了绒癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,降低了FoxD3、Nanog、Stat3的mRNA和蛋白表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:PI3K/PKB信号通道激活与GTD的进展和侵袭表型有关,可通过增强调控滋养细胞的干细胞特性而发挥作用。

PI3K/PKB信号通路在重症急性胰腺炎肺损伤发病机制中的研究进展

PI3K/PKB信号通路广泛存在于组织细胞中,参与细胞的生长、增殖、凋亡等重要生理活动。近年来研究发现该信号通路与重症急性胰腺炎急性肺损伤的发病过程密切相关。因此,本文就该通路在重症急性胰腺炎肺损伤发病机制中的研究现状作一综述。

高住低练对大鼠骨骼肌PI3K/PKB/mTOR信号通路基因表达的影响

目的:探讨高住低练对大鼠骨骼肌PI3K/PKB/mTOR信号通路基因表达的影响。方法:40只8周龄SD大鼠适应训练后,随机分为低住安静组(LC)、低住低练组(LoLo)、高住安静组(HC)和高住低练组(HiLo)。高住组每天低氧暴露12 h(氧浓度13.6%,相当于海拔3500 m),低练组进行35 m/min、1 h/d、5 d/周、共4周的跑台训练。采用实时荧光定量PCR检测大鼠腓肠肌PI3K、PKB、mTOR mRNA表达,以双因素方差分析进行统计。结果:低氧和运动均显著提高大鼠骨骼肌PI3K和PKB mRNA表达(P<0.01),但低氧和运动无显著交互作用(P>0.05);运动显著提高大鼠骨骼肌mTOR mRNA表达(P<0.01),低氧却显著降低mTOR mRNA表达(P<0.01),且低氧和运动有交互作用,显著降低mTOR mRNA表达(P<0.01)。结论:低氧和运动促进PI3K和PKB基因表达,低氧抑制而运动促进mTOR基因表达;HiLo训练促进PI3K和PKB基因表达,却抑制mTOR基因表达。不同条件下PI3K/PKB/mTOR信号通路基因表达水平不一致。

重症急性胰腺炎肺损伤患者中的PI3K/PKB信号转导通路临床表达及意义

目的:研究分析重症急性胰腺炎肺损伤患者中的PI3K/PKB信号转导通路临床表达及意义。方法:选取健康的成年大鼠30只作为主要的研究对象,随其进行随机分为三组,分别为A组、B组、C组,每组10只,应用胆胰管内递行注射法进行SAP模型的制作。在完成6小时制作之后,取出胰腺组织,完成各组指标的分析。结果:A组、B组、C组三组大鼠的相对指标均存在明显的差异,其中B组跟其他两组差异更为显著。其差异具有显著的统计学意义。A组、B组、C组三组大鼠的胰腺组织内TNF-、L-I蛋白变化以及PKB(碱的电离常数的负对数)变化差异存在明显的统计学意义。结论:重症急性胰腺炎肺损伤患者发病机制的主要原因可能是PI3K/PKB信号转导通路。

自噬和PI3K/PKB通路在七氟烷麻醉结肠癌手术患者神经认知紊乱中的作用研究

目的探讨自噬和PI3K/PKB通路在七氟烷麻醉结肠癌手术患者神经认知紊乱中的作用。方法选取2016年1月至2019年1月在郑州人民医院接受腹腔镜下结肠癌根治术治疗的100例老年结肠癌患者作为研究对象,并随机分为SEV组(麻醉通过七氟醚)和ISO组(麻醉通过异氟烷),每组50例。比较两组术前和术后1 d血清PI3K和PKB的表达水平,分析血液中LC3Ⅰ和LC3Ⅱ表达水平;记录两组简易智力状态检查(MMSE)量表评分;比较两组不良反应发生情况,并进行线性关系分析。结果与ISO组比较,SEV组术后1 d血清PI3K和PKB表达水平降低(P<0.05),而血液LC3Ⅱ表达水平明显增加(P<0.05),MMSE评分增加(P<0.05)。SEV组术后1 d认知功能障碍的发生率低于ISO组(P<0.05)。MMSE评分与PI3K和PKB表达水平呈负相关关系(r=-0.412和-0.398,P<0.001),而与LC3Ⅰ和LC3Ⅱ表达水平呈正相关关系(r=0.452和0.427,P<0.001)。结论七氟烷可以通过PI3K/PKB信号通路调节神经细胞自噬,改善结肠癌手术患者术后的认知功能。

PI3K/PKB通路在胃癌中的表达及其与PTEN相关性研究

目的探索PI3K/PKB信号转导通路在胃癌发生发展过程中的作用及其与PTEN的相关性。方法对112例胃癌及76例正常胃粘膜组织采用免疫组织化学Envision二步法检测PI3K、PKB和PTEN蛋白、采用原位分子杂交法检测PTENmRNA。结果胃癌组PI3K及PKB表达均明显高于正常胃粘膜组(分别为χ2=9.994,P<0.05;χ2=15.823,P<0.001);随着癌浸润深度的加深(χ2=7.896,P<0.05;χ2=7.939,P<0.05)和淋巴结转移的出现(χ2=9.455,P<0.05;χ2=8.115,P<0.05)PI3K及PKB表达明显增强。而PTEN在胃癌中的表达明显低于正常胃粘膜(χ2=78.494,P<0.001);在胃癌浸润超过肌层组明显低于未超过肌层组(χ2=11.308,P<0.01);伴淋巴结转移组表达明显低于无淋巴结转移组(χ2=17.870,P<0.001)。胃癌组PTENmRNA表达明显低于正常胃粘膜组(χ2=53.959,P<0.001)。且PTEN与PI3K及PKB蛋白表达强度呈明显负相关(r=-0.354,P<0.001;r=-0.222,P<0.05)。结论PI3K/PKB信号转导通路和PTEN在胃癌发生发展过程中分别起促进和抑制作用,两者呈负相关,PI3K/PKB通路有望成为PTEN失活时治疗胃癌的靶点。

基于PI3K/PKB信号通路研究吡菲尼酮缓解肝纤维化的作用机制

目的基于磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/磷酸化蛋白激酶B(PKB)信号通路研究吡菲尼酮缓解小鼠肝纤维化程度的作用机制。方法选择65只小鼠,饲养7 d后将其中60只随机均分为模型组、健康组和吡菲尼酮组,每组20只,另留5只不入组。使用四氯化碳诱导模型组和吡菲尼酮组肝纤维化。成功建立肝纤维化模型后,吡菲尼酮组给予吡菲尼酮灌胃,模型组和健康组给予等量生理盐水灌胃。2周后处死小鼠,取肝脏组织进行苏木精-伊红(HE)、胶原纤维(Masson)染色,评估各组肝纤维化程度,并采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和免疫印迹法测定PI3K和PKB的mRNA及蛋白表达量,检测小鼠血清谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平。结果模型组与吡菲尼酮组小鼠ALT及AST水平均明显高于健康组(P<0.05);模型组小鼠ALT及AST水平均高于吡菲尼酮组(P<0.05)。模型组小鼠PI3K mRNA和蛋白表达量明显高于吡菲尼酮组及健康组(P<0.05);吡菲尼酮组PI3K mRNA和蛋白表达量高于健康组(P<0.05);模型组小鼠PKB mRNA和蛋白表达量明显高于吡菲尼酮组及健康组(P<0.05)。模型组肝纤维化3期小鼠最多(55.56%);吡菲尼酮组2期小鼠最多(66.67%)。结论吡菲尼酮具有明显缓解小鼠肝纤维化的作用,此作用与其降低小鼠肝脏内PI3K和PKB表达量机制密切相关。

左归丸调控PI3K/AKT信号通路的研究进展

左归丸是滋阴补肾的代表方剂,具有滋阴益髓、温壮肾阳、填精补肾之功效。现代研究表明其主要通过调控磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路中的相关细胞因子对机体神经、生殖、内分泌及骨科疾病等方面发挥防治功能,其主要机制为通过磷酸化AKT不同位点精准调控其下游B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、BCL2-associated X的蛋白质(BCL2-Associated X,Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate-specific proteinase-3,Caspase-3)、糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase3β,GSK3β)、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、叉头转录蛋白O(forkhead box O,FOXO)等靶蛋白发挥调节细胞周期,促进细胞代谢、生长及增殖,抑制细胞凋亡,调节氧化应激、炎症反应及能量代谢,调控肿瘤细胞发生等生物学防治功能。左归丸在临床应用较为广泛,但关于左归丸对相关疾病防治的药理作用及分子机制尚未明确,今后,则需对左归丸防治疾病的分子生物学机制进行深入研究,进一步明确其临床应用价值。

肾苏Ⅱ方对局灶节段性肾小球硬化大鼠Notch-PI3K/PKB通路串话及足细胞EMT的影响

目的:观察中药肾苏Ⅱ方对局灶节段性肾小球硬化(FSGS)大鼠肾脏功能、病理、足细胞及上皮细胞向间充质细胞转分化(EMT)标志蛋白、Notch、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)通路及其串话关键位点的影响。方法:采用左肾切除+阿霉素注射法诱发SD大鼠FSGS模型,依体质量随机分为3组,模型组、贝那普利组和肾苏Ⅱ方组。另设空白对照组,每组各12只。贝那普利组予贝那普利(9.25mg·kg-1·d-1)灌胃、肾苏Ⅱ方组予肾苏Ⅱ方(9.71g·kg-1·d-1)灌胃,空白对照、模型组予等量0.9%氯化钠溶液灌胃。检测大鼠24h尿微量蛋白(24h Upro)、血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)。观察肾脏病理形态学改变,分析足细胞标志CD2相关蛋白(CD2AP)及EMT标志desmin蛋白表达,Notch、PI3K/PKB通路关键位点的notch1、Hes-1、染色体10上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(PTEN)、PKB基因及p-PKB蛋白表达。结果:与模型组相比,治疗第8周末开始,贝那普利组及肾苏Ⅱ方组FSGS大鼠24h Upro、TP、ALB均明显改善(P<0.05);至治疗第12周末,贝那普利组及肾苏Ⅱ方组大鼠光镜、电镜肾脏病理改变明显减轻;CD2AP蛋白表达恢复与desmin蛋白表达减少明显(P<0.05);Notch1、Hes-1、PTEN m RNA及p-PKB蛋白表达与模型组比较,差异也有统计学意义(P<0.05)。结论:肾苏Ⅱ方可能通过调控Notch-PI3K/PKB通路串话,阻抑足细胞EMT进程,进而延缓FSGS大鼠疾病进展。

紫草素对离体子宫内膜癌细胞株增殖及凋亡信号通路PI3K/PKB的影响

目的:探讨紫草素对离体子宫内膜癌细胞株增殖及凋亡信号通路PI3K/PKB的影响。方法:将子宫内膜癌HEC-1B细胞置于培养液中培养,选用对数期生长细胞进行实验。分别加入浓度0.4 mg·L^(-1)、0.8 mg·L^(-1)、1.2 mg·L^(-1)的含紫草素的培养液,作为紫草素低剂量组、中剂量组、高剂量组,未加任何药为对照组,观察并比较各组细胞的增殖能力、Akt磷酸化水平、Bcl-2及Bax水平、细胞凋亡率。结果:与对照组比较,紫草素中剂量组以及紫草素高剂量组的OD值、Bax水平及细胞凋亡率较高,p-Akt、Bcl-2水平较低,差异均无统计学意义(P<0.05);紫草素中剂量组与紫草素高剂量组的OD值、p-Akt水平、Bax及Bcl-2水平、细胞凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:紫草素能够通过调节凋亡信号通路PI3K/PKB,抑制离体子宫内膜癌细胞株的增殖,促进其凋亡。

胰岛素PI3K/PKB信号转导通路研究进展

糖尿病是一种以高血糖为主要症状的代谢性紊乱疾病,其重要病理机制为胰岛素分泌不足或外周组织胰岛素抵抗。因此,阐明胰岛素的作用机制对于研发降低血糖、治疗糖尿病药物具有重要意义。胰岛素磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB)信号转导通路在胰岛素作用途径中具有极其重要的作用,它参与介导胰岛素作用的葡萄糖转运、抑制脂肪分解,糖原、蛋白和脂肪的合成以及细胞分化、增殖和凋亡等。本文参阅国内外文献,综述了胰岛素在PI3K/PKB途径中的信号转导过程的最新进展。

基于PI3K/PKB通路研究EGCG对CVB3感染致病毒性心肌炎小鼠细胞凋亡的影响

细胞凋亡是造成病毒性心肌炎(VMC)发病过程中心肌损伤的重要因素;表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对缺血再灌注引起的细胞凋亡具有抑制作用,但是否抑制VMC发病过程中的心肌细胞凋亡尚不明确。因此,本研究将分析EGCG对VMC小鼠细胞凋亡的影响及分子机制。BALB/c小鼠随机分为对照组、VMC组(腹腔注射CVB3悬液造模)、VMC+EGCG组(腹腔注射CVB3悬液造模后腹腔注射EGCG)、VMC+EGCG+LY组(腹腔注射CVB3悬液造模后腹腔注射EGCG及PI3K抑制剂LY294002)。检测血清心肌损伤标志物肌钙蛋白I(cTnI)及乳酸脱氢酶(LDH),心肌中CVB3滴度及RNA表达、HE染色、凋亡基因及p-PI3K、p-PKB表达。结果显示,与对照组比较,VMC组血清cTnI、LDH含量、心肌中CVB3滴度及RNA表达、细胞凋亡率、cleaved caspase-3表达升高,心肌中Survivin、p-PI3K、p-PKB表达降低(P<0.05);与VMC组比较,VMC+EGCG组血清cTnI、LDH含量及心肌中细胞凋亡率、cleaved caspase-3表达降低,心肌中Survivin、p-PI3K、p-PKB表达升高(P<0.05),心肌中CVB3滴度及RNA表达无明显变化(P>0.05);与VMC+EGCG组比较,VMC+EGCG+LY组血清cTnI、LDH含量、心肌中细胞凋亡率、cleaved caspase-3表达升高,心肌中Survivin、p-PI3K、p-PKB表达降低(P<0.05),心肌中CVB3滴度及RNA表达无明显变化(P>0.05)。以上结果表明EGCG对VMC小鼠心肌细胞凋亡具有抑制作用且该作用与激活PI3K/PKB通路有关。

坎离颗粒对血管紧张素II阻断骨骼肌细胞糖代谢PI3K/PKB/GLUT-4信号途径的影响及机制探讨

目的:探究坎离颗粒对小鼠骨骼肌成肌细胞(C2C12细胞)糖代谢的影响;探明坎离颗粒对血管紧张素Ⅱ阻断C2C12细胞糖代谢的影响是否通过PI3K/PKB/GLUT-4信号途径。方法:以C2C12细胞为研究对象,以胰岛素激活细胞糖代谢通路,以血管紧张素Ⅱ阻断被激活的通路,在此基础上设胰岛素组、模型对照组、坎离颗粒2、20、200μg/ml组,另设空白对照组。药物干预结束后,检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)及同工酶、乳酸、三磷酸腺苷(ATP)含量,葡萄糖运载体4(GLUT-4)、蛋白激酶B(PKB)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、丝裂原活化蛋白激酶p38(P38MAPK)蛋白及mRNA表达。结果:与空白组比较,胰岛素组对荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)摄取率显著升高;与胰岛素组比较,模型组对2-NBDG摄取率显著降低;与模型组比较,坎离颗粒三个剂量组对2-NBDG摄取率均显著升高。坎离颗粒2μg/ml组可明显降低乳酸水平。坎离颗粒20、200μg/ml组均可明显降低LDH4水平。与胰岛素组比较,模型组GLUT-4蛋白及mRNA、P-PKB、P-PI3K蛋白表达显著下调;与模型组比较,坎离颗粒可上调GLUT-4蛋白及mRNA、P-PKB、P-PI3K蛋白表达,以20、200μg/ml组最显著。结论:坎离颗粒可促进C2C12细胞糖摄取,改善糖代谢。并通过上调GLUT-4蛋白和mRNA表达、PKB、PI3K磷酸化蛋白表达,改善C2C12细胞的糖代谢,坎离颗粒对血管紧张素Ⅱ阻断骨骼肌细胞糖代谢的改善作用是通过PI3K/PKB/GLUT-4信号通路。

地骨皮煎煮液对多囊卵巢大鼠胰岛素信号传导途径中PI3K/PKB分子表达的影响

实验主要观察地骨皮煎煮液对多囊卵巢模型(PCOS)大鼠胰岛素信号传导途径中PI3K,PKB分子表达的影响。大鼠按Poretsky方法建立PCOS模型,造模成功后大鼠随机分为模型组、二甲双胍片组(0.45 g·kg-1)、地骨皮高、低剂量组(10,2.5 g·kg-1)。各组大鼠分别灌胃相应的药物14 d;另外设置空白对照组,给予生理盐水。给药14 d后大鼠通过阴道涂片观察发情周期,并测定体重,血清中睾酮(T)和空腹胰岛素(FINS)水平及卵巢组织PI3K,PKB的mRNA及其磷酸化蛋白水平。结果可见,与正常组比较,模型组大鼠排卵周期不规则,体重增加明显,血清T及空腹FINS水平显著提高;同时卵巢组织PI3K,PKB的mRNA及其磷酸化蛋白表达水平显著下降。地骨皮干预后能维持PCOS大鼠动情周期、降低大鼠体重增加,显著提高卵巢组织中PI3K及PKB的mRNA及其磷酸化蛋白表达水平,且呈现明显的剂量依赖关系。西药二甲双胍片也有较好的治疗作用。地骨皮能缓解PCOS大鼠体重增加,降低血清激素水平,对PCOS大鼠一定程度上具有恢复排卵作用,其机制可能与PI3K/PKB通路有关。

瓜蒌皮激活PI3K/PKB通路减轻柯萨奇病毒感染心肌细胞损伤的实验研究

柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)是引起病毒性心肌炎最常见的病毒株,感染心肌细胞后能够激活细胞凋亡、引起细胞损伤;已有研究证实,瓜蒌皮激活磷脂酰肌醇3⁃激酶(Phosphatidylinositol 3⁃kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,PKB)通路减轻缺氧/复氧引起的心肌细胞凋亡,但瓜蒌皮对CVB3感染引起心肌细胞凋亡的调节作用及机制尚不清楚。因此,本研究将观察瓜蒌皮激活PI3K/PKB通路减轻柯萨奇病毒感染心肌细胞损伤的作用。在培养心肌H9c2细胞后分组,对照组给予不含药物及病毒的培养基,CVB3组给予含有CVB3病毒液的培养基,瓜蒌皮组含有CVB3病毒液及瓜蒌皮提取物的培养基,瓜蒌皮+抑制剂组含有CVB3病毒液、瓜蒌皮提取物及抑制剂LY294002的培养基。检测培养基中乳酸脱氢酶(Lactic dehydrogenase,LDH)及磷酸肌酸激酶同工酶(Creatine phosphokinase⁃isoenzyme⁃MB,CK⁃MB)的含量、细胞活力A490、细胞凋亡率、细胞中cleaved caspase⁃9、cleaved caspase⁃3、p⁃PI3K、p⁃PKB的表达。结果显示,与对照组比较,CVB3组培养基中LDH、CK⁃MB的含量、细胞凋亡率、细胞中天冬氨酸蛋白水解酶⁃9(cleaved caspase⁃9,cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase⁃9)、cleaved caspase⁃3的表达均增加,A490及细胞中p⁃PI3K、p⁃PKB的表达均降低(P<0.05);与CVB3组比较,瓜蒌皮组培养基中LDH、CK⁃MB的含量、细胞凋亡率、细胞中cleaved caspase⁃9、cleaved caspase⁃3的表达均降低,A490及细胞中p⁃PI3K、p⁃PKB的表达均增加(P<0.05);与瓜蒌皮组比较,瓜蒌皮+抑制剂组培养基中LDH、CK⁃MB的含量、细胞凋亡率、细胞中cleaved caspase⁃9、cleaved caspase⁃3的表达均增加,A490及细胞中p⁃PI3K、p⁃PKB的表达均降低(P<0.05)。以上结果表明,瓜蒌皮提取物能够减轻CVB3感染心肌细胞的损伤及凋亡,激活PI3K/PKB通路是可能的分子机制。本研究首次发现瓜蒌皮提取物对CVB3感染心肌细胞的损伤和凋亡具有抑制作用;同时,本研究还初步阐明了瓜蒌皮提取物发挥心肌保护作用的分子机制、即激活PI3K/PKB通路。

人参皂苷Rg3对糖尿病视网膜病变大鼠PI3K-Akt/PKB通路和血管内皮生长因子、细胞间黏附分子-1表达的影响

目的研究人参皂苷Rg3对糖尿病视网膜病变大鼠PI3K-Akt/PKB通路和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达的影响。方法将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、人参皂苷Rg3治疗高剂量组(H-Rg3组,5.0 mg·kg^-1 Rg3)、低剂量组(L-Rg3组,0.5 mg·kg^-1 Rg3),每组各15只,构建糖尿病视网膜病变大鼠模型,共治疗28 d。检测各组大鼠视网膜组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)表达;HE染色和TUNEL染色分析病理变化;免疫组织化学检查ICAM-1和VEGF蛋白的表达;Western blot检测视网膜组织中PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达;采用LY294002抑制剂(静脉注射,0.5 mg·kg^-1)验证PI3K-Akt/PKB通路。结果与对照组相比,模型组凋亡细胞比例、视网膜组织中MDA和LDH表达均升高(均为P<0.05),SOD、PI3K和p-Akt蛋白表达均降低(均为P<0.05),VEGF、ICAM-1、Bad、cleaved-Caspase-3蛋白表达均升高(均为P<0.05)。与模型组相比,L-Rg3组和H-Rg3组凋亡细胞比例、视网膜组织中MDA和LDH表达均降低(均为P<0.05),SOD、PI3K和p-Akt蛋白表达均升高(均为P<0.05),VEGF、ICAM-1、Bad、cleaved-Caspase-3蛋白表达均降低(均为P<0.05)。与L-Rg3组相比,H-Rg3组凋亡细胞比例、视网膜组织中MDA和LDH表达均降低(均为P<0.05),SOD、PI3K和p-Akt蛋白表达均升高(均为P<0.05),VEGF、ICAM-1、Bad、cleaved-Caspase-3蛋白表达均降低(均为P<0.05)。与LY-模型组相比,LY294002组VEGF、ICAM-1、Bad和cleaved-Caspase-3蛋白表达均升高(均为P<0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。与LY-Rg3组相比,LY-Rg3+LY294002组VEGF、ICAM-1、Bad和cleaved-Caspase-3蛋白表达均升高(均为P<0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3能够通过激活PI3K-Akt/PKB信号通路,下调VEGF和ICAM-1蛋白的表达,保护糖尿病视网膜病变大鼠的视网膜组织。

肌肉素对胰岛素诱导大鼠分化的成肌细胞摄取葡萄糖过程中PI3K和AKT的干预作用

目的:研究肌肉素(musclin)对胰岛素诱导大鼠分化的成肌细胞摄取葡萄糖过程中PI3K和AKT的干预作用。方法:大鼠P3成肌细胞诱导分化后,分成不含胰岛素时的对照组(A组,25 mmol.L-1D-葡萄糖)和肌肉素处理组(B组,25 mmo.lL-1D-葡萄糖+肌肉素0.5μg.mL-1),以及含有胰岛素时的对照组(C组,25 mmol.L-1D-葡萄糖+10 mU.mL-1胰岛素)和肌肉素处理组(D组,25 mmol.L-1D-葡萄糖+10 mU.mL-1胰岛素+肌肉素0.5μg.mL-1);B和D组在加入肌肉素后继续孵育5 h,C和D组在此基础上加入胰岛素再继续孵育30 min。用3氚标记-葡萄糖(3H-G)检测葡萄糖的摄取,半定量RT-PCR检测葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT/PKB)mRNA的表达。结果:与A组比较,B组成肌细胞对葡萄糖的摄取量、PI3K mRNA及AKTmRNA的表达水平均降低约50%(P<0.01);与C组比较,D组成肌细胞对葡萄糖的摄取量、PI3K mRNA及AKTmRNA的表达水平均降低约50%(P<0.01);与B组比较,D组成肌细胞对葡萄糖的摄取量、PI3K mRNA及AKTmRNA的表达水平均上升约30%(P<0.05);但4组GLUT4 mRNA的表达水平均无统计学改变。结论:肌肉素可抑制大鼠P3成肌细胞对葡萄糖的摄取,作用机制可能与其抑制PI3K/AKT信号转导通路有关。