腺苷A_(2A)受体拮抗剂通过PI3K途径抑制小鼠瘢痕增生的实验研究

目的:探究腺苷A_(2A)受体(A_(2A)R)拮抗剂SCH58261对小鼠瘢痕增生的影响,并进一步分析该影响作用与PI3K途径的相关性。方法:实验1:将32只BALB/c雄性小鼠随机分为4组(n=8)。各组均制备瘢痕增生模型,第5~14天时,对照组和模型组均用生理盐水局部注射、高低剂量组分别给2 mg/kg、5 mg/kgA;R拮抗剂SCH58261局部注射,每日1次、连续10 d。实验2:将32只BALB/c雄性小鼠随机分为4组(n=8)。各组制备瘢痕增生模型,第5~14天,Ad-NC组局部注射Ad-NC及生理盐水,AdNC+模型组局部注射Ad-NC及生理盐水、Ad-NC+高剂量组局部注射Ad-NC及5 mg/kgSCH58261局部注射、Ad-PI3K+高剂量组局部注射Ad-PI3K及5 mg/kgSCH58261局部注射,每日1次,连续10 d。采用HE染色观察增生瘢痕的组织学特征,采用Western blot检测转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)、p-PI3K、p-AKT的表达水平。结果:实验1:模型组出现了典型的瘢痕增生,TGF-β_(1)、Col-I、Col-III、p-PI3K、p-AKT的表达水平均高于对照组;低剂量组和高剂量组瘢痕增生明显改善,TGF-β_(1)、Col-I、Col-III、p-PI3K、p-AKT的表达水平均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);实验2:过表达PI3K后,高剂量SCH58261改善瘢痕增生及抑制TGF-β_(1)、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ表达的作用发生逆转(P<0.05)。结论:腺苷A;R受体拮抗剂SCH58261能够抑制小鼠瘢痕增生,且这一作用与抑制PI3K途径有关。

Wortmannin抑制PI3K途径对白血病细胞周期特异性及BCL-2蛋白表达影响的研究

目的 探讨Wortmannin抑制PI3K途径对K5 62、NB4、HL60细胞周期特异性、BCL -2蛋白表达的影响。探明PI3K途径在K5 62、NB4、HL60细胞周期、细胞凋亡、BCL -2蛋白表达中的不同作用。方法 用PI3K特异抑制剂Wortmannin抑制PI3K途径 ,AraC诱导细胞凋亡 ,药物作用 2 4h后 ,细胞经DNA特异性荧光染色 ,用流式细胞仪 (FCM)检测细胞DNA含量、BCL -2蛋白表达 ,MulticycleVerson 4 0 0软件分析细胞DNA含量直方图及细胞周期、BCL -2蛋白表达。观察各细胞系增殖周期、细胞凋亡的变化。结果 K5 62、NB4、HL60细胞经Wortmannin、Ara -C、Wortmannin +Ara -C作用 2 4h后细胞出现DNA含量低于G1期的亚二倍体峰 (亚G1期细胞 )这一凋亡细胞的特征性改变 ,实验组细胞增殖指数 (PI)明显低于对照组 ,凋亡百分比显著增加。Wortmannin可以通过抑制PI3K通路使K5 62细胞阻滞于G1期。作用 2 4h后细胞实验组细胞BCL -2蛋白表达较对照组降低 ,说明Wortmannin可促进K5 62细胞的凋亡。结论 Wortmannin可以通过抑制PI3K通路抑制K5 62细胞的增殖。并可以通过抑制PI3K通路使K5 62细胞阻滞于G1期。Wortmannin可抑制K5 62细胞的BCL -2蛋白表达 ,促进K5 62细胞的凋亡。

Embelin通过PI3K/Akt信号途径抑制甲状腺癌细胞增殖

目的探讨Embelin对甲状腺癌细胞增殖的影响并探讨相关机制。方法体外培养甲状腺癌细胞,经Embelin处理后,RT-PCR和Western印迹检测XIAP m RNA和蛋白的表达水平;MTT法测定细胞生长抑制率;流式细胞仪测定细胞凋亡率和细胞周期;免疫印迹检测PI3K、Akt蛋白表达水平。结果 Embelin处理甲状腺癌细胞48 h后,XIAP m RNA和蛋白表达水平明显降低。在高剂量组中,MTT法检测其细胞生长抑制率为42.78%±4.29%,明显高于对照组(t=20.14,P<0.01);流式细胞仪检测高剂量组细胞凋亡率为37.94%±2.29%,明显高于对照组(t=42.09,P<0.01);流式细胞仪检测高剂量组细胞周期,发现其处于G1期细胞的百分比为68.23%±2.13%,明显高于对照组(t高剂量组=5.70,P<0.01);检测PI3K、Akt蛋白在高剂量组中的表达水平,发现p Akt蛋白表达水平明显低于对照组(t高剂量组=6.47,P<0.05)。结论 Embelin下调XIAP表达可抑制甲状腺癌细胞增殖,其作用机制可能与PI3K/Akt信号途径相关。

长链非编码RNA UCA1通过激活PI3K/Akt途径降低人宫颈癌SiHa细胞放射敏感性

目的:通过下调人宫颈癌SiHa细胞长链非编码RNA(lncRNA)尿路上皮癌胚抗原1(UCA1)表达,观察SiHa细胞放射敏感性的变化,以及PI3K/Akt信号转导通路相关蛋白表达的变化,探讨lncRNA UCA1对人宫颈癌SiHa细胞放射敏感性的调控作用及可能机制。方法:人宫颈癌SiHa细胞分成siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,体外合成lncRNA UCA1和阴性对照(NC)小干扰RNA(siRNA),采用阳性脂质体法将lncRNA UCA1和NC的siRNA转染SiHa细胞。实时荧光定量PCR法检测宫颈癌SiHa细胞中lncRNA UCA1表达,Western blot法检测Akt、p-Akt 473、p-Akt 380、bcl-2蛋白表达。3组细胞经不同剂量(0、2、4、6、8Gy)X射线照射后,CCK-8法检测细胞经8Gy的X照射后存活率,流式细胞仪检测细胞经8Gy的X照射后凋亡率,克隆形成试验检测细胞的放射敏感性。结果:与空白对照组及阴性对照组比较,siRNA干扰组细胞的lncRNA UCA1表达降低(P<0.05),Akt蛋白表达无明显变化(P>0.05),p-Akt 473、p-Akt 380、bcl-2蛋白表达均降低(P均<0.05)。经X线照射后,与空白对照组和阴性对照组比较,RNA干扰组的SiHa细胞存活率下降(P<0.05),凋亡率增加(P<0.05),细胞放射生物学参数D 0、Dq、N、SF2值均降低(P均<0.05),放射增敏比为1.328。结论:lncRNA UCA1能降低人宫颈癌SiHa细胞放射敏感性,激活PI3K/Akt信号转导途径可能是其作用机制。

lncRNA HOST2通过PI3K/Akt途径调控卵巢癌SKOV3细胞对顺铂的敏感性

目的探讨下调长链非编码RNA(lncRNA)上皮性卵巢癌转录因子2(HOST2)表达对人卵巢癌SKOV3细胞顺铂敏感性的影响及其作用机制。方法体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,取对数生长期细胞分为空白对照组、阴性对照组和siRNA干扰组,其中阴性对照组和siRNA干扰组SKOV3细胞应用Lipofectamine 2000分别转染阴性对照siRNA和lncRNA HOST2-siRNA,空白对照组未进行转染。采用qPCR法检测各组细胞lncRNA HOST2的表达;Western blot检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)信号通路相关蛋白Akt、p-Akt(S473)、pAkt(S380)及Bcl-2的表达;CCK-8法检测经不同浓度(0、20、40、60、80、100μmol/L)顺铂作用后细胞的存活情况,并计算半抑制浓度(IC50);流式细胞术检测经20μmol/L顺铂作用后的细胞凋亡率。结果与空白对照组和阴性对照组比较,siRNA干扰组细胞lncRNA HOST2表达及p-Akt(S473)、p-Akt(S380)和Bcl-2蛋白表达水平均降低(均P<0.05);3组Akt蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。空白对照组、阴性对照组和siRNA干扰组细胞存活率均随顺铂药物浓度的增加而降低,IC50分别为(59.58±5.97)、(51.42±5.22)和(39.75±5.31)μmol/L。siRNA干扰组细胞凋亡率(12.42%±1.46%)明显高于空白对照组(7.53%±1.25%)和阴性对照组(8.16%±1.31%)。结论下调lncRNA HOST2表达可增强人卵巢癌SKOV3细胞对顺铂的敏感性,其机制与抑制PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达有关。

利多卡因通过PI3K/Akt途径抑制人口腔癌细胞HN13增殖并促进其凋亡

目的:研究利多卡因对人口腔鳞癌细胞HN13增殖、凋亡的影响及机制。方法:常规条件下培养人口腔鳞癌细胞HN13,分为对照组(NC,不添加任何药物)、利多卡因低(40μmol/L)、中(400μmol/L)、高(4 000μmol/L)剂量组、阳性对照组(PC,100μmol/L顺铂),采用CCK-8法测定细胞OD值,分析不同浓度利多卡因对癌细胞增殖的影响;采用Annexin V-FITC/PI双染法结合流式细胞术检测不同浓度利多卡因对HN13细胞凋亡的影响。Western blot检测各组细胞PI3K/Akt途径中关键分子p-PI3K、p-Akt、Bcl-2等蛋白表达差异。结果:CCK-8结果显示,与对照组相比,利多卡因400μmol/L、4 000μmol/L处理组细胞存活数减少(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示400μmol/L、4 000μmol/L利多卡因处理组细胞凋亡率提高(P<0.05)。Western blot结果显示,与NC对照组相比,利多卡因处理后各组细胞中p-PI3K、p-Akt、Bcl-2表达明显降低(P<0.05),其中4 000μmol/L处理组与顺铂处理组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:与对照组相比,利多卡因通过抑制PI3K/Akt途径抑制HN13细胞增殖,促进细胞凋亡。

红景天苷通过激活AMPK/PI3K/Akt/eNOS途径减轻ApoE(-/-)小鼠动脉粥样硬化

目的探究红景天苷对ApoE(-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响及所涉及的相关分子机制。方法将ApoE(-/-)小鼠分为正常饮食组(ND组),高脂肪饮食组(HFD组),AMPK激活剂组(AC组),低(L-SAL组)、高(H-SAL组)剂量红景天苷组。应用苏丹Ⅳ染色、HE染色和Masson染色行ApoE(-/-)小鼠动脉粥样硬化病变分析;应用主动脉内皮依赖性舒张功能实验检测Apo E(-/-)小鼠主动脉血管内皮舒张功能;应用免疫组织化学分析主动脉p-AMPK、p-PI3K、p-Akt、p-e NOS蛋白表达情况;应用蛋白免疫印迹分析ApoE(-/-)小鼠AMPK、PI3K、Akt、eNOS蛋白磷酸化水平。结果与ND组小鼠相比,HFD组病变区面积、斑块面积均显著增加,而胶原含量显著降低(P<0.05)。与HFD组相比,L-SAL组和H-SAL组病变区面积、斑块面积均显著降低(P<0.05),胶原含量显著增加(P<0.05),且H-SAL组与L-SAL组差异有统计学意义(P<0.05)。与ND组相比,HFD组内皮依赖性舒张功能显著降低(P<0.05)。与HFD组相比,L-SAL组和H-SAL组内皮依赖性舒张功能均显著增加(P<0.05)。与ND组相比,HFD组p-AMPKα(Thr172)、p-PI3K、p-Akt、p-eNOS(Ser1177)MOD值均显著降低(P<0.05)。与HFD组相比,AC组、L-SAL组和H-SAL组p-AMPKα(Thr172)、p-PI3K、p-Akt、p-eNOS(Ser1177)MOD值均显著增加(P<0.05)。与ND组相比,HFD组p-AMPKα(Thr172)、p-PI3K、p-Akt、p-eNOS(Ser1177)蛋白表达显著降低(P<0.05)。与HFD组相比,L-SAL组和H-SAL组p-AMPKα(Thr172)、p-PI3K、p-Akt、p-eNOS(Ser1177)蛋白表达显著增加(P<0.05)。H-SAL组与AC组各项指标相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论红景天苷能够通过激活AMPK/PI3K/Akt/e NOS信号级联,改善与e NOS活化相关的血管内皮功能,从而减轻Apo E(-/-)小鼠动脉粥样硬化病变。

TRPM7通过PI3K/AKT/ERK信号途径影响脑胶质瘤细胞增殖、上皮-间质转化

目的探讨沉默M型顺时受体电位通道7(melastatin transient receptor potential channel 7,TRPM7)对脑胶质瘤细胞增殖、上皮-间质转化的影响及其作用机制。方法采用qRT-PCR和Western blot检测TRPM7在人正常星形胶质HA1800细胞株以及脑胶质瘤细胞株(U251、U87、U373)中的表达。将U251细胞分为U251组(未转染的U251细胞)、U251/shNC组、U251/shTRPM7组,然后采用qRT-PCR和Western blot检测TRPM7的表达,细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;细胞免疫荧光实验检测E-cadherin和Vimentin表达情况;Western blot检测PI3K/AKT/ERK信号途径相关蛋白的表达情况。结果与HA1800细胞比较,TRPM7在脑胶质瘤细胞系中高表达(P<0.05);沉默TRPM7后,U251细胞中TRPM7表达降低(P<0.001),细胞增殖、迁移和侵袭能力明显下降(P<0.01);E-cadherin表达增加(P<0.001),Vimentin表达降低(P<0.01);PI3K蛋白表达水平下调(P<0.01),AKT和ERK1/2蛋白磷酸化程度明显降低(P<0.01)。结论沉默TRPM7可抑制U251细胞增殖、迁移和侵袭能力及上皮-间质转化,其作用机制可能与激活PI3K/AKT/ERK信号途径有关。

PI3K/AKT/mTOR信号转导途径在嗜铬细胞瘤发生和发展中的作用及其联合靶向治疗

PI3K/AKT/m TOR信号途径在嗜铬细胞瘤的发生和发展中发挥着重要的作用。单独抑制其中某个靶点却会导致对于上游靶点的反馈激活以及平行信号途径的激活,导致肿瘤对针对这一信号途径抑制剂的抵抗。该文就PI3K/akt/m TOR信号通路在嗜铬细胞瘤发生和发展中的作用以及针对这一信号通路的靶向治疗,特别是多靶点多信号途径的联合靶向治疗的最新研究进展进行综述。

PTEN/PI3K信号转导途径与子宫内膜癌生物学行为的相关性

目的 :研究PTEN/PI3K信号转导途径与子宫内膜癌发生发展的关系。方法 :应用免疫组化和免疫印迹方法对 68例子宫内膜癌和癌前病变组织及 11例正常子宫内膜进行PTEN、p PKB及p Bad蛋白检测。结果 :1)PTEN蛋白的阳性表达率在正常增殖期子宫内膜组织中最高 ( 90 9% ) ,非典型增生组织中开始下降 ,在子宫内膜癌组织中明显降低 ( 4 9 1% ) ,三者之间比较 ,差异有统计学意义 ,P <0 0 1;2 )p PKB及p Bad与PTEN的阳性表达呈相反趋势 ,在非典型增生组织及内膜癌组织中p PBK及p Bad表达阳性率明显增加 ,差异均有统计学意义 ,P <0 0 1,P <0 0 5。在子宫内膜癌PTEN表达阴性组织中p PKB、p Bad蛋白染色积分均明显高于PTEN阳性组 ,P <0 0 5 ,P <0 0 1;3 )相关分析显示PTEN与p PKB及p Bad表达均呈负相关 ,r =-0 67,P <0 0 5 ;r =-0 65 ,P <0 0 5 ;4)PTEN、p Bad蛋白的阳性表达率在不同的临床分期、组织学分级及不同肌层浸润程度之间比较 ,差异均无统计学意义 ,P >0 0 5 ,而PTEN、p PKB只在临床分期间差异有统计学意义 ,P <0 0 5。结论 :PTEN/PI3K信号转导途径与子宫内膜癌的发生密切相关。伴随PTEN表达缺失 ,p PKB、p Bad阳性表达更加明显 ,提示PTEN蛋白表达可作为子宫内膜癌早期诊断指标和基因治疗靶点。

骨髓间充质干细胞来源外泌体通过PI3K/Akt途径减轻过氧化氢诱导心肌细胞损伤

目的研究骨髓间充质干细胞(BMMSC)来源外泌体通过PI3K/Akt途径减轻过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导心肌细胞损伤。方法培养心肌H9c2细胞,采用0.5 mmol/L H_(2)O_(2)诱导心肌细胞损伤,给予BMMSC来源外泌体、对照溶剂二甲基亚砜或PI3K抑制剂LY294002干预,检测细胞存活率、凋亡率及Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、p-PI3K和p-Akt的表达水平。结果H_(2)O_(2)组细胞的存活率及Bcl-2、p-PI3K和p-Akt的表达水平低于对照组,凋亡率以及Bax和cleaved caspase-3的表达水平高于对照组(P<0.05);H_(2)O_(2)+外泌体组细胞的存活率及Bcl-2、p-PI3K和p-Akt的表达水平高于H_(2)O_(2)组,凋亡率以及Bax和cleaved caspase-3的表达水平低于H_(2)O_(2)组(P<0.05);LY294002+H_(2)O_(2)+外泌体组细胞的存活率以及Bcl-2、p-PI3K和p-Akt的表达水平低于溶剂对照+H_(2)O_(2)+外泌体组,凋亡率以及Bax和cleaved caspase-3的表达水平高于溶剂对照+H_(2)O_(2)+外泌体组(P<0.05)。结论BMMSC来源外泌体通过激活PI3K/Akt途径减轻H_(2)O_(2)诱导心肌细胞损伤。

达沙替尼对人脐静脉内皮细胞的损伤与PI3K/Akt途径抑制有关

目的探索达沙替尼对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移和凋亡等生物学特性的影响,为完善其临床应用提供资料。方法实验分组:达沙替尼组(达沙替尼处理浓度为50 nmol/L)、LY294002组(PI3K抑制剂,处理浓度为20μmol/L)、联合处理组(达沙替尼处理浓度为50 nmol/L、LY294002处理浓度为20μmol/L)及溶媒对照组(DMSO浓度为0.1%)。CCK8法检测细胞活性,划痕法检测细胞迁移,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blot检测Akt和p-Akt蛋白水平。结果达沙替尼(1~400 nmol/L)不仅抑制HUVEC增殖,而且诱导其凋亡、抑制其迁移、阻滞细胞周期G1-S期转化。随浓度的升高与处理时间的延长(50 nmol/L,24 h^96 h)达沙替尼对细胞增殖抑制作用和诱导凋亡作用明显,同时HUVEC的迁移能力随达沙替尼浓度(50~100 nmol/L)的升高而降低。达沙替尼和PI3K抑制剂LY294002两者单独处理时均具有细胞增殖抑制作用,两者均明显抑制Akt蛋白磷酸化水平;两者联合处理时虽然细胞增殖抑制作用增强,但对Akt蛋白磷酸化水平的影响与单独处理相比差异不明显。结论达沙替尼可通过PI3K/Akt通路促进HUVEC损伤,抑制HUVEC增殖和迁移,改变细胞形态,阻滞HUVEC G1-S期转化,诱导细胞凋亡。

PGE2/PGE2-R介导的RAS/ERK及PI3K/AKT信号途径与子宫肌瘤发病机制的研究

目的探讨前列腺素E2(PGE2)/前列腺素E2受体(PGE2-R)介导的RAS/ERK及PI3K/AKT信号途径与子宫肌瘤发病机制的关联。方法收集30例子宫肌瘤和其邻近正常的平滑肌组织,Real-time PCR检测样本PGE2-R(EP1)表达,Western blot检测PGE2和PGE2-R(EP1)的表达;培养子宫肌瘤原代细胞,分别加入PGE2-R(EP1)抑制剂sc-51322或激动剂17-PT-PGE2,分为原代细胞组、原代+sc-51322组和原代+17-PT-PGE2组;采用CCK8检测细胞增殖;RT-PCR检测增殖细胞核抗原(PCNA)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)的表达;Western blot检测PGE2、PGE2-R(EP1)、PCNA、TGF-β、IGF-1、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、p-ERK1/2的表达。结果子宫肌瘤的PGE2-R(EP1)的mRNA表达量显著高于平滑肌组织(P<0.01)。子宫肌瘤组织PGE2和PGE2-R(EP1)的蛋白表达量亦显著高于正常平滑肌组织(P<0.01)。在培养72 h后,与原代细胞组比较,原代+sc-51322组细胞增殖受到显著抑制(P<0.01),而原代+17-PT-PGE2组中细胞的增殖活性显著增加(P<0.01)。原代+sc-51322组中细胞PCNA、TGF-β、IGF-1 mRNA表达量显著低于原代细胞组,原代+17-PT-PGE2组中细胞PCNA、TGF-β、IGF-1 mRNA表达量显著高于原代细胞组。原代+sc-51322组中的细胞PGE2、PGE2-R(EP1)、PCNA、TGF-β、IGF-1、p-AKT和p-ERK1/2蛋白表达量显著低于原代细胞组,原代+17-PT-PGE2组PGE2、PGE2-R(EP1)、PCNA、TGF-β、IGF-1、p-AKT和p-ERK1/2蛋白表达量显著高于原代细胞组(P<0.01)。结论 PGE2和PGE2-R(EP1)通过介导的RAS/ERK及PI3K/AKT信号途径来参与调控子宫肌瘤发病。

可替宁通过激活PI3K/Akt途径的抗凋亡作用促进非小细胞肺癌的发生

目的探讨可替宁对非小细胞肺癌细胞凋亡的作用及其作用机制。方法培养人肺腺癌源性A549细胞,在不存在或存在ly294002的情况下,用不同浓度可替宁或尼古丁对细胞进行预处理,然后加入多柔比星共培养,使用细胞增殖检测试剂盒Ⅱ(XTT)或胱天蛋白酶(caspase)-3/7活性检测试剂盒分析细胞活力,使用DNA梯状条带检测分析细胞基因组DNA断裂情况,使用蛋白质印迹法分析可替宁对A549细胞Akt磷酸化的影响。结果可替宁能以剂量依赖性方式抑制多柔比星诱导的细胞死亡,也以剂量依赖性方式抑制多柔比星诱导的caspase-3/7激活,可替宁可阻断多柔比星诱导的基因组DNA断裂,并以剂量依赖性方式增强Akt磷酸化,而ly294002抑制了可替宁诱导的Akt磷酸化,表明可替宁通过PI3K/Akt途径诱导Akt磷酸化并抑制凋亡。结论本研究阐明了可替宁能通过激活PI3K/Akt途径的抗凋亡作用促进非小细胞肺癌的发生。

克唑替尼通过PI3K/AKT/mTOR途径抑制肺癌HCC78细胞系迁移的研究

目的基于PI3K/AKT/mTOR途径探索克唑替尼抑制肺癌细胞系HCC78细胞迁移的分子机制。方法采用MTT法检测细胞增殖抑制情况;Transwell迁移实验检测细胞迁移能力变化;ELISA实验检测细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)分泌变化;细胞免疫组化检测HCC78细胞Snail2含量变化;qPCR检测HCC78细胞E-Cadherin、N-Cadherin的mRNA表达情况;Western bloting检测HCC78细胞对PI3K、AKT、mTOR及p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的含量影响。结果克唑替尼可抑制HCC78细胞的增殖,具有时间-浓度依赖性,对HCC78细胞分泌MMP-2、MMP-9的能力具有显著的抑制作用(P<0.05),克唑替尼可抑制HCC78细胞中Snail2的激活,抑制其转录活性,降低HCC78细胞E-Cadherin、N-Cadherin mRNA表达及HCC78细胞内PI3K、AKT、mTOR的磷酸化含量(P<0.05),但并不影响PI3K、AKT、mTOR总蛋白含量。结论克唑替尼可抑制Snail2的表达激活,导致HCC78细胞中E-Cadherin表达上升,N-Cadherin表达下降,并下调HCC78细胞分泌MMP-2和MMP-9的能力,从而抑制HCC78细胞增殖和迁移,而引起上述蛋白表达变化的可能机制是克唑替尼可有效抑制PI3K/AKT/mTOR通路。

PI3K/AKT途径在调节侵袭性前列腺癌中的E-钙黏蛋白和桥粒芯糖蛋白2中的作用

目的本研究旨在通过检查E-钙黏蛋白和桥粒芯糖蛋白2(DSG2)的功能意义,全面了解细胞-细胞黏附在前列腺癌侵袭性中的作用和调节。方法首先在正常前列腺组织和前列腺癌组中使用免疫荧光检查E-钙黏蛋白表达。进行相关和存活分析以评估其临床意义。在体外和体内分析这种遗传改变的功能意义,后者通过使用肿瘤发生以及外渗和转移性肿瘤形成测定。结果在原发性前列腺癌患者中,E-钙黏蛋白和DSG2的表达降低与早期的生化复发显着相关。产生转基因DU145 E-钙黏蛋白敲低和组成型活性AKT过表达株系。显示E-钙黏蛋白的缺失导致体内原发性和转移性肿瘤形成受损,表明除了已知的肿瘤抑制因子之外,E-钙黏蛋白的肿瘤启动子作用。AKT的激活导致E-cadherin表达和Snail核定位的显着降低,表明PI3K/AKT信号传导途径在E-钙黏蛋白的瞬时抑制中的作用。结论这些发现通过PI3K途径的调节说明了细胞-细胞黏附在进展为侵袭性前列腺癌中的关键作用。

miR-34a通过靶向CD47激活PI3K/Akt途径抑制异丙酚诱导的幼鼠海马神经元细胞凋亡

目的研究miR-34a对异丙酚诱导的神经元细胞凋亡的影响,miR-34a、CD 47的靶向关系及在此过程中PI3K/Akt途径的作用。方法提取分离幼鼠海马神经元细胞,在不同浓度异丙酚(1、10、20、40、60、80μg·mL^(-1))处理12h,采用MTT法检测神经元细胞活力,流式细胞术法检测神经元细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测神经元细胞中miR-34a、CD 47 mRNA的表达水平;将Control组(未转染病毒)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-34a组(转染miR-34a mimics)、pcDNA 3.1组(转染pcDNA 3.1)、miR-34a+CD 47组(miR-34a mimics和pcDNA 3.1-CD 47共转染)以慢病毒法转染至幼鼠海马神经元细胞中,并用一定浓度异丙酚处理。采用MTT法检测各组细胞活力,流式细胞术法检测各组细胞凋亡情况,RT-qPCR检测各组miR-34a、CD 47 mRNA的表达水平,Western blot检测各组CD47、PI3K、Akt、p-Akt、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3蛋白的表达水平,双荧光素酶活性实验验证miR-34a对CD 47的靶向作用。结果幼鼠海马神经元细胞活力及凋亡率与异丙酚浓度均成剂量依赖性,且浓度≥20μg·mL^(-1)的异丙酚作用下,随浓度的升高,细胞活力显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),在异丙酚作用后miR-34a表达量显著降低,CD 47 mRNA表达量显著升高;转染后各组细胞与Control组相比,miR-34a组细胞活性显著升高(P<0.01),CD 47蛋白表达量显著降低(P<0.01),PI3K、p-Akt、Bcl-2表达均显著升高(P<0.01),Bax、Cleaved caspase-3表达均显著降低(P<0.01);CD 47为miR-34a靶基因。过表达CD 47会减弱miR-34a抑制异丙酚诱导的神经元细胞凋亡作用。结论miR-34a可通过靶向负调控CD 47并有效抑制异丙酚诱导的神经元细胞凋亡,其可能的作用机制为激活PI3K/Akt通路。

姜黄素调节AKT/PI3K活性抑制人膀胱癌T24细胞的增殖和迁移

研究姜黄素对膀胱癌T24细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制。培养膀胱癌T24细胞,然后采用不同浓度的姜黄素进行干预。使用CCK8法检测姜黄素处理后T24细胞的存活率,Transwell实验检测其侵袭力。采用western blot检测处理前后T24细胞中基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9的表达水平以及蛋白激酶B(AKT)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)磷酸化。CCK8结果表明姜黄素能够以浓度和时间依懒性抑制T24细胞的增殖。Transwell结果显示姜黄素能降低膀胱癌T24细胞的迁移能力。姜黄素也能降低T24细胞p-AKT和p-PI3K磷酸化以及MMP2和MMP9蛋白的表达,并且呈浓度依赖性。以上结果表明姜黄素通过抑制AKT/PI3K信号通路降低MMP2和MMP9的表达,从而抑制膀胱癌T24细胞的增殖和迁移。

PI3K/AKT通路在低氧环境下对结肠癌细胞HIF-1α及糖酵解的作用

目的探讨缺氧环境培养下,阻断磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(serine-threoninekinase,AKT)信号途径后结肠癌细胞中缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)及糖酵解相关蛋白葡萄糖转运蛋白(glucose transporter 1,GLUT-l)和乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDH-A)的表达,分析PI3K/AKT信号通路与结肠癌细胞糖酵解之间的关系。方法选择人结肠癌SW480细胞予以缺氧环境培养,分为4组:缺氧对照组、PI3K抑制剂组、AKT抑制剂组、PI3K+AKT抑制剂组,培养时间为24h。采用RT-PCR和Western blot法检测各组结肠癌细胞HIF-1α及糖酵解相关基因(GLUT-1,LDH-A)的表达。比色法测定各组结肠癌细胞培养上清液中的乳酸浓度。结果与缺氧对照组相比较,PI3K抑制剂组和AKT抑制剂组结肠癌细胞中HIF-1α、GLUT-1、LDH-A表达下降(均P<0.05),结肠癌细胞上清液中乳酸浓度降低(P<0.05)。PI3K+AKT抑制剂组与缺氧对照组及单项抑制剂组相比,各项指标下降明显(P<0.01)。结论阻断PI3K/AKT信号途径,结肠癌细胞中HIF-1α表达下调,并可导致糖酵解相关基因GLUT-1、LDH-A的表达下降,提示PI3K/AKT信号途径参与了结肠癌细胞的糖酵解过程。

落新妇苷通过激活PI3K/AKT信号通路和抑制P38MAPK信号通路减轻H2O2诱导的PC12细胞损伤

目的研究落新妇苷对H 2O 2诱导的氧化应激损伤的PC12细胞影响。方法将PC12细胞分为5组:对照组、H 2O 2组及不同浓度(1μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)落新妇苷组。采用CCK8实验检测各组细胞的活力;Annexin V-FITC/PI细胞凋亡实验检测各组细胞凋亡率;Western blot检测PI3K、AKT、Caspase3和P38蛋白及其磷酸化激活蛋白的表达水平。结果与H 2O 2组相比,落新妇苷组细胞的活力显著提高,细胞凋亡率明显降低,活化的凋亡相关蛋白Cleaved Caspase3表达水平降低,PI3K/AKT途径相关蛋白p-PI3K和p-AKT的表达水平升高,P38 MAPK途径重要蛋白p-P38的表达水平降低。结论落新妇苷对H 2O 2诱导的氧化应激损伤的PC12细胞有明显保护作用;这种保护作用可能是通过激活PI3K/AKT信号通路及抑制P38MAPK信号通路实现的。