PI3K-AKT-mT0R 信号通路在肝癌组织中的表达及意义

目的探讨PI3K-AKT-mTOR信号通路在肝癌组织中的表达及临床意义。方法收集原发性肝癌组织标本及癌旁组织标本70例.采用免疫组化法检测肝癌组织和癌旁组织中的p-AKT及p-mTOR阳性表达情况,并采用WB法检测肝癌组织和癌旁组织中的p-AKT及p-mTOR蛋白相对表达水平情况,分析肝癌组织中p-AKT及p-mTOR蛋白表达量与临床病理特征的关系及两者在肝癌组织中的相关性结果免疫组化结果显示,肝癌组织中p-AKT及p-mTOR阳性表达率分别为71.43%、77.14%,均明显高于癌旁组织的28.57%、62.86%(P < 0.05 )。WB法检测结果显示,肝癌组织中p-AKT及p-mTOR表达水平分别为(0.62 ±0.11 )、(0.55±0.10 ),明显高于癌旁组织的(023 ±0.07 )、( 0.33 ± 0.09 )(P < 0.05 )。中低分化、有淋巴结转移、III+IV期的肝癌组织中p-AKT及p-mTOR表达水平明显高于高分化、无淋巴结转移、I+II期的肝癌组织(P < 0.05)。肝癌组织中p-AKT与p-mTOR表达水平呈正相关(r = 0.564,P = 0.000 )。结论PI3K-AKT-mTOR信号通路在肝癌组织中存在过度表达,这可能是肝癌发生、进展及转移的一个机制,可能是肝癌防治的一个新靶点。

黄芪甲苷基于PI3K/Akt/Bcl-2信号通路对PC12细胞OGD/R损伤的保护机制研究

目的:探究黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ)对大鼠嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma 12,PC12)细胞缺氧缺糖复供(oxygen deprivation reoxygenation,OGD/R)损伤的保护作用及基于磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)及B 细胞淋巴瘤-2 蛋白(B-cell lymphoma-2,Bcl-2) PI3K/Akt/Bcl-2 信号通路的机制研究。方法:体外培养 PC12 细胞,细胞随机分为空白对照组、模型组(OGD/R),尼莫地平阳性对照组(5 μmol·L^-1)和黄芪甲苷组(1.00、0.10、0.01 μmol·L^-1),除空白组外其余各组均建立体外PC12细胞OGD/R模型。CCK-8试剂盒法检测PC12 细胞存活率;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒法测定乳酸脱氢酶的漏出量;采用Hoechst33342和碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染法检测各组细胞凋亡与坏死情况;Western blot检测各组细胞Akt、p-Akt、Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)的蛋白表达情况。结果:黄芪甲苷提高PC12 细胞OGD/R 损伤的细胞存活率,降低LDH 漏出量和细胞凋亡。黄芪甲苷浓度依赖性上调p-Akt/Akt、Bcl-2的蛋白表达和下调促凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表达。PI3K/Akt通路的抑制剂LY2940002 能抑制黄芪甲苷对OGD/R损伤的PC12细胞中凋亡相关蛋白的影响。结论:黄芪甲苷对OGD/R损伤的PC12细胞具有保护作用,且其保护作用机制可能与PI3K/Akt/Bcl-2信号通路有关。

PI3K/AKT/GSK3β信号通路参与腺苷A1R介导异丙酚对缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用

目的:探讨PI3K/AKT/GSK-3β信号通路参与异丙酚对缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用及机制。方法:健康雄性SD大鼠72只,所有大鼠参照Zea Longa法建立局灶性脑缺血再灌注损伤的模型。随机分成6组(n=12),A-假手术组,B-模型组(MCAO),C-异丙酚组,D-异丙酚+腺苷A1R拮抗剂组(DPCPX),E-异丙酚组+PI3K特异性抑制剂(LY294002),F-异丙酚+GSK-3β抑制剂组(SB216763),观察大鼠术后24 h神经功能评分情况;LDF监测插栓前后脑血流变化;采用TTC染色法检测各组大鼠的脑梗死体积;用HE染色方法观察大鼠脑组织形态学改变;免疫组织化学法检测Bcl-2阳性细胞表达;采用TUNEL检测各组大脑脑皮质缺血周围神经元凋亡细胞的百分率。结果:与A组比较,B、C、D、E及F组大鼠行为学、脑梗死体积、细胞凋亡率、Bcl-2蛋白表达量均增加(P<0.05);与C组比较,B、D、E组大鼠行为学评分,脑梗死体积及细胞凋亡率均明显增加,Bcl-2蛋白表达量均明显减少(P<0.01),F组Bcl-2蛋白表达量却增加,细胞凋亡率降低(P<0.05),行为学评分减少、梗死体积减少(P<0.05)。结论:腺苷A1R介导的异丙酚对缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用可能与PI3K/AKT/GSK-3β信号转导通路有关。

基于IGF-1R/PI3K/AKT的益气固表丸对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的影响及作用机制研究

目的:益气固表丸对慢性阻塞性肺疾病(COPD)有明显的治疗作用,但具体作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨益气固表丸对脂多糖(LPS)联合烟雾暴露构建慢性阻塞性肺病模型大鼠的治疗作用机制。方法:通过大鼠气管内灌注LPS和吸入香烟烟雾构建慢性阻塞性肺病模型,同时给予模型大鼠低、中、高剂量益气固表丸治疗14 d。观察呼吸参数及肺组织病理变化。采用酶联免疫吸附试验测定支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清胰岛素样生长因子1型受体(IGF-1R)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-10水平。采用蛋白质印迹法检测大鼠肺组织样品中胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)/PI3K/AKT信号通路组分的磷酸化状态。结果:与对照组和低剂量益气组比较,大剂量益气固表丸治疗可显著改善COPD大鼠呼吸参数,减轻肺损伤和炎症,降低BALF和血清炎症介质水平。此外,高剂量益气固表丸干预的COPD大鼠肺组织标本中磷酸化IGF-1R、p-PI3K、p-AKT、p-GSK3、p-mTOR蛋白水平显著降低。结论:益气固表丸对COPD有明显的治疗作用,可能与靶向IGF-1R/PI3K/AKT信号通路有关。

中药对溃疡性结肠炎相关炎性因子和信号通路的影响探析

溃疡性结肠炎是一种以溃疡为主要症状的慢性非特异性肠道疾病,属于中医“痢疾”“肠风”“便血”等范畴。西医治疗以氨基水杨酸、糖皮质激素等为主,存在疗效不理想、复发率较高、副作用较大的问题。近年来中药治疗溃疡性结肠炎取得了较好的临床效果,有副作用小、不良反应少、复发率低的优点,可以明显改善UC患者症状,提高其生活质量。中医中药对肠黏膜的免疫调控影响也获得了较多关注,中药对与UC相关信号传导通路的干预作用逐渐成为研究热点。本文将常见与UC相关的信号传导通路进行归纳,探究青黛、大黄、姜黄对其影响,为临床和实验研究提供思路。

跑步机运动对心力衰竭大鼠PI3K/Akt/mT0R信号通路的影响

为了考察跑步机运动对心力衰竭大鼠的保护作用机制。本研究通过连续7 d腹膜内注射异丙肾上腺素(5 mg/kg)诱发大鼠实验性心力衰竭(心力衰竭组),在此基础上,跑步机运动组大鼠进行4周的跑步机运动(速度为15 m/min,每天运动45 min,每周运动5 d),以检测各组大鼠的血液动力学参数、细胞凋亡、血清抗氧化指标以及心肌组织中PI3K/Akt/mT0R信号分子的活化情况。研究结果显示,跑步机运动组的HR、+LVdp/dtmax、-LVdp/dtmax、LVSP和LVEF均显著高于心力衰竭组(p<0.05)。与心力衰竭组相比,跑步机运动组的心肌细胞凋亡率及caspase-3和Bax的表达均降低而Bcl-2的表达升高(p<0.05);SOD和CAT水平显著升高而MDA显著降低(p<0.05);心肌组织中p-PI3K、p-Akt和p-mT0R的蛋白表达水平均显著升高(p<0.05)。本研究表明跑步机运动通过激活心力衰竭大鼠心肌组织中PI3K/Akt/mT0R信号通路来抑制细胞凋亡,此外跑步机运动也提高了大鼠的抗氧化能力,从而改善了大鼠的心脏功能。

NVP-BKM120联合来曲唑通过PI3K/mTOR通路对乳腺癌干细胞作用的影响

目的通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路中PI3K对乳腺癌干细胞(BCSC)的作用对内分泌治疗敏感性的影响。方法采用无血清培养液悬浮培养球囊细胞的方法富集乳腺癌细胞系MCF-7中的BCSC,使用流式仪分选出ESA+CD44+CD24-/low亚群,并对其进行克隆培养。构建高表达芳香化酶的BCSC(BCSC-CYP19)和非干细胞(MCF-7-CYP19)亚克隆。通过MTT检测、划痕实验、流式细胞术、软琼脂克隆实验评价BCSC干性特征,利用Western印迹检测PI3K/mTOR通路中Akt1、PI3K、S6的蛋白表达水平,从而比较单用PI3K靶向抑制剂NVP-BKM120(BKM120)或联合来曲唑对BCSC-CYP19和MCF-7-CYP19的作用影响。结果BKM120通过剂量依赖性抑制BCSC-CYP19的生长,减少BCSC-CYP19的移动和集落形成,并显著降低PI3K、Akt1和S6的表达。BKM120联合来曲唑可抑制BCSC-CYP19的生长和增殖,使BCSC-CYP19在G0~G1期显著增加,诱导早期凋亡,下调PI3K、Akt1和S6的表达。结论PI3K/Akt/mTOR信号通路通过调节BCSC特性以影响来曲唑的耐药。PI3K抑制剂BKM120和来曲唑联合应用可抑制来曲唑耐药。

miRNA-1对胃癌细胞体外EGFR-TKI敏感性影响的实验研究

目的探讨上调或沉默miRNA-1(miR-1)表达对胃癌细胞体外表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)敏感性影响的研究。方法选择人胃癌细胞系MKN-45作为受试对象,慢病毒转染miR-1或miR-1 shRNA,分别作为miR-1组和miR-1 shRNA组,并采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测GES-1和MKN-45细胞中miR-1表达。另外设置空白对照组和阴性对照组。采用MTT法检测MKN-45细胞对不同浓度AZD9291(奥西替尼)的敏感性;流式细胞术检测1μmol/L AZD9291作用48 h后MKN-45细胞凋亡活力和细胞周期。采用Western blotting法检测各组细胞中PI3K/AKT通路相关蛋白的表达。结果qPCR证实miR-1在MKN-45细胞系中低表达。MTT法检测结果显示,与空白对照组比较,miR-1组细胞对AZD9291敏感性明显增加,而miR-1 shRNA组细胞对AZD9291敏感性明显降低。Annexin V/PI双染法和BrdU法检测,miR-1组细胞凋亡率为(44.65±5.18)%,高于空白对照组的(15.40±2.13)%和阴性对照组的(17.92±3.14)%,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-1 shRNA组细胞凋亡率为(11.20±2.48)%,低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组比较,miR-1组细胞IGF-1R、p-IGF-1R、p-AKT、p-p70S6K蛋白表达量明显降低,miR-1 shRNA组细胞IGF-1R、p-IGF-1R、p-AKT、p-p70S6K蛋白表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论上调miR-1表达可增加MKN-45胃癌细胞系对AZD9291的敏感性,其作用机制可能与抑制IGF-1R/PI3K/AKT信号通路的激活有关。

基于网络药理学探讨人参皂苷R b1肠道菌转化物治疗胃癌的作用机制

目的:基于网络药理学技术研究人参皂苷R_(b1)的肠道菌转化物-人参皂苷R_(d)及人参皂苷F_(2)治疗胃癌的作用机制,为人参皂苷的临床合理应用提供科学依据。方法:Swiss Target Prediction数据库预测人参皂苷R_(d)及人参皂苷F_(2)的靶点;以“Gastric cancer”为关键词在Disgenet、Malacards和Omim数据库中获得胃癌的靶点;将人参皂苷R_(d)及人参皂苷F_(2)的PPI网络分别与胃癌的PPI网络取交集分别获得人参皂苷R_(d)及人参皂苷F_(2)治疗胃癌的PPI网络;分别将人参皂苷R_(d)及人参皂苷F_(2)治疗胃癌的核心靶点导入到Metascape数据库中,得到GO分析结果和KEGG富集结果。结果:网络药理学结果表明人参皂苷R_(d)及人参皂苷F_(2)治疗胃癌的关键靶点分别有64个及56个。结合人参皂苷R_(d)及人参皂苷F_(2)的生物学特性,发现PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、HIF-1t信号通路及ErbB信号通路可能是上述两种人参皂苷抗胃癌作用涉及的主要通路。结论:人参皂苷R_(b1)肠道菌群转化物-人参皂苷R_(d)及人参皂苷F_(2)可能通过调节PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、HIF-1t信号通路及ErbB信号通路治疗胃癌,后续可开展相关实验加以验证。

缝隙连接影响氧化低密度脂蛋白诱导A7r5细胞增殖的机制

目的探讨缝隙连接(GJ)是否通过PI3K/Akt信号途径影响氧化低密度脂蛋白(Ox LDL)诱导的大鼠胸大动脉平滑肌细胞(A7r5)增殖。方法培养A7r5细胞株,将细胞分4组,即对照组、Ox LDL组、Ox LDL+二甲基亚砜(DMSO)组和Ox LDL+Akt抑制剂(MK-2206)组。用MTS法及流式细胞仪检测A7r5的增殖活性;流式细胞仪检测各组发绿色荧光的供体细胞(Q3)与双阴性受体细胞(Q4)的比值(Q3/Q4)变化,从而分析GJ功能改变;Western blot法检测细胞中Cx43、Akt、p-Akt蛋白表达。结果与对照组比较,Ox LDL组及Ox LDL+DMSO组A7r5细胞增殖活性增加,细胞周期S期细胞比率增高(P<0.05);与Ox LDL组比较,Ox LDL+MK-2206组两者均降低(P<0.05)。与对照组相比较,Ox LDL组及Ox LDL+DMSO组A7r5细胞的Q3/Q4比值增大,GJ功能增强(P<0.05);与Ox LDL组比较,Ox LDL+MK-2206组Q3/Q4比值减小,GJ功能显著降低(P<0.05)。与对照组相比较,Ox LDL组和Ox LDL+DMSO组A7r5细胞的Cx43、p-Akt蛋白表达增强(P<0.05);与Ox LDL组比较,Ox LDL+MK-2206组Cx43、p-Akt蛋白表达减弱(P<0.05)。与对照组比较,Ox LDL组、LDL+DMSO组及Ox LDL+MK-2206组A7r5细胞的Akt蛋白均变化不明显。结论 GJ可以通过PI3K/Akt信号途径影响Dx LDL诱导的A7r5细胞增殖。

STIP1基因沉默对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨磷酸化应激诱导蛋白1基因沉默(si-STIP1)对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法体外培养人成骨细胞(hFOB1.19细胞)和人骨肉瘤细胞系(U2OS、MG63和SaoS-2细胞),采用实时定量PCR和蛋白印迹法测定磷酸化应激诱导蛋白1(STIP1)在各细胞中的表达水平。si-STIP1及阴性对照(si-NC)转染U2OS细胞48 h,采用CCK-8法测定细胞增殖,Transwell实验测定细胞迁移和侵袭,采用蛋白印迹测定细胞MMP2和MMP9及IGF1R/PI3K/AKT信号通路蛋白的表达。结果与hFOB1.19细胞相比,U2OS、MG63和SaoS-2细胞的STIP1基因和蛋白表达水平均显著上调(P<0.05)。与si-NC组相比,si-STIP1组U2OS细胞的增殖活性、迁移率、侵袭率均显著降低(均P<0.05),MMP2、MMP9、p-IGF1R、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平均显著下调(P<0.05)。结论STIP1基因沉默抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移,其可能机制是通过调控IGF1R/PI3K/AKT信号通路实现。

枸杞多糖对光诱导人视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用及其机制

目的研究不同浓度枸杞多糖(Lyciutn barbarum polysaccharides,LBP)对光诱导人视网膜色素上皮(Retinal pigment epithelium,RPE)细胞(ARPE-19)凋亡的影响,并探讨其作用机制方法建立光诱导下ARPE-19细胞损伤模型,分别用不同浓度的枸杞多糖于光照前2h对体外培养的人ARPE-19细胞进行干预;运用MTT法检测细胞活力;流式细胞术(FCM)检测光照对AKPE-19细胞凋亡率的影响;通过蛋白免疫印迹(Weslern blot)法分别检测PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt(Thr308)、mTOR、p-mTOR蛋白分子表达量变化实验组分为空白对照组、光损伤模型组以及不同浓度枸杞多糖(10mg/mL,100mg/mL)干预组.结果与空白对照组比较,光损伤模型组24h、36h ARPE-19细胞活力均显著下降(P<0.01),且具有时效性,最适光损伤模型时间为24h、光照强度为(16500±200)Lux,在该条件下细胞凋亡率显著升高,p-PI3K、p-Akt(Thr3O8)、p-mTOR蛋白表达量显著降低(P<0.01)与光损伤模型组比较,枸杞多糖(10mg/mL,1OOmg/L)组细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著降低,p-PI3K、p-Akt(Thr3O8)、p-mTOR蛋白表达量显著升高(P<0.01),结论枸杞多糖可抑制光诱导下ARPE-19细胞凋亡,其机制可能与失活P13K/Akt/mT0R信号通路有关.