人参皂苷Rg3对糖尿病视网膜病变大鼠PI3K-Akt/PKB通路和血管内皮生长因子、细胞间黏附分子-1表达的影响

目的研究人参皂苷Rg3对糖尿病视网膜病变大鼠PI3K-Akt/PKB通路和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达的影响。方法将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、人参皂苷Rg3治疗高剂量组(H-Rg3组,5.0 mg·kg^-1 Rg3)、低剂量组(L-Rg3组,0.5 mg·kg^-1 Rg3),每组各15只,构建糖尿病视网膜病变大鼠模型,共治疗28 d。检测各组大鼠视网膜组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)表达;HE染色和TUNEL染色分析病理变化;免疫组织化学检查ICAM-1和VEGF蛋白的表达;Western blot检测视网膜组织中PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达;采用LY294002抑制剂(静脉注射,0.5 mg·kg^-1)验证PI3K-Akt/PKB通路。结果与对照组相比,模型组凋亡细胞比例、视网膜组织中MDA和LDH表达均升高(均为P<0.05),SOD、PI3K和p-Akt蛋白表达均降低(均为P<0.05),VEGF、ICAM-1、Bad、cleaved-Caspase-3蛋白表达均升高(均为P<0.05)。与模型组相比,L-Rg3组和H-Rg3组凋亡细胞比例、视网膜组织中MDA和LDH表达均降低(均为P<0.05),SOD、PI3K和p-Akt蛋白表达均升高(均为P<0.05),VEGF、ICAM-1、Bad、cleaved-Caspase-3蛋白表达均降低(均为P<0.05)。与L-Rg3组相比,H-Rg3组凋亡细胞比例、视网膜组织中MDA和LDH表达均降低(均为P<0.05),SOD、PI3K和p-Akt蛋白表达均升高(均为P<0.05),VEGF、ICAM-1、Bad、cleaved-Caspase-3蛋白表达均降低(均为P<0.05)。与LY-模型组相比,LY294002组VEGF、ICAM-1、Bad和cleaved-Caspase-3蛋白表达均升高(均为P<0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。与LY-Rg3组相比,LY-Rg3+LY294002组VEGF、ICAM-1、Bad和cleaved-Caspase-3蛋白表达均升高(均为P<0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3能够通过激活PI3K-Akt/PKB信号通路,下调VEGF和ICAM-1蛋白的表达,保护糖尿病视网膜病变大鼠的视网膜组织。

天智颗粒激活PI3K-AKT信号保护Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡作用研究

目的:研究天智颗粒对Aβ_(25-35)诱导的大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞凋亡的作用及其机制。方法:用不同浓度天智颗粒或天智颗粒+LY294002干预Aβ_(25-35)处理的PC12细胞,通过MTT检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡和氧应激,酶标仪检测Caspase 3活性和丙二醛(MDA)含量,免疫印迹法检测Bcl2/Bax、p-AKT/AKT蛋白水平。结果:天智颗粒剂量依赖地改善Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞活力下降,抑制其凋亡,降低Caspase 3活性,上调Bcl2/Bax表达,减少氧应激和MDA的生成,同时促进PI3K/AKT信号的活化。而PI3K抑制剂LY294002干预显著地逆转天智颗粒的这些有益作用。结论:天智颗粒能有效地保护Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与激活PI3K/AKT信号相关。

亮氨酸通过PI3K-AKT信号通路促进牛成肌细胞的增殖

旨在探究外源补充亮氨酸(Leu)对牛成肌细胞增殖的影响及其作用机理。本试验以牛成肌细胞为研究对象,利用CCK-8法和EdU染色法检测不同浓度的Leu对牛成肌细胞增殖的影响,确定Leu的最佳添加浓度;以最佳浓度Leu为处理组、0 mmol·L^(-1)Leu为对照组进行转录组测序(RNA-Seq),筛选Leu调控牛成肌细胞增殖的关键通路。利用qRT-PCR验证关键通路中的关键调控基因,并通过添加抑制剂进行进一步验证。结果显示,添加Leu可提高牛成肌细胞活力,其中0.5 mmol·L^(-1)Leu显著提高成肌细胞活力和EdU阳性率(P<0.05)。Leu组和对照组差异表达基因有1290个,其中688个上调,602个下调。KEGG富集分析,所注释的309个上调基因涉及47条显著富集通路,其中与骨骼肌生长发育相关通路中最为显著的是PI3K-AKT信号通路,包含34个上调基因。随机挑选PIK3 R1、FOXO3、IRS1、RPTOR、MTOR和MET等6个差异表达基因进行qRT-PCR验证,结果与RNA-Seq一致。添加PI3K-AKT信号通路中PI3K的抑制剂LY294002后,阻断了Leu对牛成肌细胞增殖的促进作用。综上所述,Leu可通过PI3K-AKT信号通路促进牛成肌细胞的增殖。

大黄糖络丸通过调控PI3K-Akt/NF-κB信号通路减轻糖尿病大鼠大血管炎症反应

目的:基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(PKB/Akt)/核因子κB(NF-κB)信号通路,探讨大黄糖络丸(RSP)防治Zucker糖尿病肥胖(ZDF)大鼠大血管炎症反应的作用机制。方法:15只雄性ZDF(fa/+)大鼠作为对照组;高脂饲料诱导成模的75只雄性ZDF(fa/fa)大鼠随机分为模型组,高、中、低剂量RSP组,以及二甲双胍组,每组15只。药物干预12周后,处死大鼠,分离血清,检测高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)水平;ELISA法检测大鼠血清CD4、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;HE染色观察大鼠腹主动脉组织病理改变;免疫组化染色检测腹主动脉中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)蛋白表达;RT-qPCR检测大鼠腹主动脉中PI3K、Akt和NF-κB p65的mRNA表达;Western blot观察腹主动脉组织中PI3K、Akt、p-Akt、p-IκB和NF-κB p65蛋白水平。结果:与模型组相比,RSP显著降低糖尿病大鼠空腹血糖及LDL-C、TG和TC水平(P<0.05),升高HDL-C水平(P<0.05或P<0.01),显著降低血清炎症介质表达,IL-6、TNF-α和CD4水平显著下降(P<0.05或P<0.01),腹主动脉组织病理学损伤程度显著减轻,腹主动脉中PI3K、Akt和NF-κB p65的mRNA及蛋白水平,以及MCP-1、p-Akt和p-IκB蛋白水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:RSP可降糖调脂并减轻糖尿病大鼠大血管炎症损伤,其机制可能与抑制PI3K-Akt/NF-κB信号通路活化、减轻炎症反应有关。

基于miR21/PI3K-Akt/SREBP通路研究泽泻汤对高脂血症模型小鼠的调脂作用机制

目的 探索经典名方泽泻汤对高脂血症模型小鼠的调脂作用机制。方法 采用ELISA法检测血清中血脂四项、肝功能指标及胆固醇脂酰转移酶(LCAT)水平。采用HE和油红O染色法判断肝组织病理情况。采用网络药理学预测泽泻汤降脂相关靶点,实现对交集靶点GO功能和KEGG通路富集分析。采用PCR芯片技术检测网络药理学筛选的目的基因,应用qPCR和Western blot检测基因和蛋白表达量。结果 泽泻汤可显著调节高脂血症模型小鼠的血脂四项水平,改善因高脂引起的肝损伤指标升高,对肝脏组织中脂质代谢关键酶HMGR、CYP7A1及脂质转运体ABCA1、Apo-A1具有反向调节作用。HE和油红O染色显示,泽泻汤可改善肝组织病理形态,减轻肝组织的脂质沉积情况,阳性面积比率显著下降(P<0.01)。PCR芯片获取反向调节基因44个,GO功能富集分析获取了266个条目,KEGG通路富集分析筛选得到99条信号通路。qPCR及Western blot结果显示,泽泻汤组显著下调PIK3CG、AKT1、IL-6基因表达量(P<0.05,P<0.01),上调ABCG1基因表达量(P<0.05),下调PI3 Kinase p110β、p-AKT(Ser473)及SREBP-1c蛋白表达水平(P<0.01);泽泻汤能够反向调节miR21-5p(P<0.01)。结论 泽泻汤对高脂血症模型小鼠脂代谢具有显著的调节作用,能改善高脂血症引起的肝损伤,其调脂作用可能与调节胆固醇在体内代谢、转运有关,与miR21/PI3K-Akt/SREBP通路密切相关,且泽泻汤全方调脂效果优于单味药。

仙鹤草素通过抑制PI3K-AKT通路促进NRF2介导的胃癌细胞铁死亡

目的:观察仙鹤草素抑制人胃癌HGC-27、MKN-45的作用机制。方法:将胃癌HGC-27、MKN-45细胞分为对照组、不同剂量仙鹤草素组、卡培他滨(阳性对照)组及仙鹤草素+NRF2激活剂(Bardoxolone)组。采用CCK-8法检测HGC-27、MKN-45细胞活力,划痕实验观察细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平,western blotting法检测PI3K-AKT通路相关蛋白及抗铁死亡分子NRF2、Histone H3、HO-1、SLC7A11、GPX4表达。结果:与对照组相比,不同剂量仙鹤草素对HGC-27、MKN-45细胞活性均有显著的抑制作用(P<0.05),且随着时间延长和仙鹤草素剂量增加,抑制作用增强。与对照组比较,仙鹤草素低、高剂量组和阳性对照组HGC-27、MKN-45细胞迁移能力减弱,ROS和MDA水平升高,GSH/GSSG、P-PI3K/PI3K、P-AKT/AKT比值降低,总NRF2(Total-NRF2)、细胞核内NRF2(Nuclear-NRF2)、HO-1、SLC7A11、GPX4蛋白表达下调(均P<0.05)。仙鹤草素+Bardoxolone组Total-NRF2、GPX4蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:仙鹤草素可促进胃癌HGC-27、MKN-45细胞铁死亡,其作用机制可能与抑制PI3K-AKT-NRF2信号通路的激活有关。

基于网络药理学和细胞验证从PI3K-Akt通路探讨半夏白术天麻汤干预甲基苯丙胺成瘾的作用机制

目的研究半夏白术天麻汤(Banxia Baizhu Tianma Decoction,BBTD)干预甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)成瘾的网络药理学机制。方法利用网络药理学分析BBTD干预MA成瘾的作用机制,进一步构建MA依赖SH-SY5Y细胞模型,观察BBTD对细胞模型及PI3K-Akt通路的影响。结果筛选得到BBTD活性成分88个及其靶点583个;KEGG表明BBTD干预MA成瘾可能与PI3K-Akt、cAMP等通路相关;分子对接显示关键活性物质与PI3K-Akt通路核心靶点均有较好的结合活性。细胞实验显示,MA依赖模型细胞突触变短、细胞边界模糊,呈现典型的细胞损伤形态,且胞内cAMP高表达(P<0.01)、5-HT低表达(P<0.05);BBTD干预可对抗上述形态学、cAMP及5-HT变化,提示其对MA依赖模型细胞有一定治疗作用。Western blot显示,MA造模可以升高p-PI3K/PI3K(P<0.05)和p-Akt/Akt(P<0.01)的比值,BBTD干预可以降低其比值。结论BBTD中天麻素等活性成分对MA成瘾有一定治疗作用,其机制可能与调控PI3K-Akt信号通路有关。

cGAMP通过激活PI3K-AKT通路减轻小鼠脑缺血恢复期的损伤

目的 研究cGAMP对小鼠脑缺血恢复期的影响及初步作用机制。方法 采用线栓法制备小鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,通过行为学评分和组织病理染色观察cGAMP 对MCAO小鼠恢复期的影响。激光散斑仪器观察cGAMP对MCAO小鼠恢复期的脑血流量的影响,使用苏木精-伊红染色(HE)和尼氏染色(NISSL)观察cGAMP对MCAO小鼠大脑皮层神经元的影响,使用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测小鼠大脑皮层中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和精氨酸酶1(Arg-1)的表达,使用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠大脑皮层中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT的表达。结果 行为学观察结果显示,与模型组相比,缺血期的MCAO小鼠经 cGAMP 处理后,行为学评分降低,在提尾测试、平衡木试验和前肢抓地力牵引测试中,其运动功能均显著恢复。HE、NISSL染色中,cGAMP可减轻脑缺血恢复期小鼠神经元损伤。PCR结果表明cGAMP处理可以降低脑缺血恢复期小鼠脑组织TNF-α的表达,升高Arg-1的表达。在Western blot结果中,cGAMP处理能够显著促进PI3K、AKT的磷酸化(P<0.05)。结论 cGAMP 能明显改善脑缺血恢复期小鼠运动功能,可能是通过激活PI3K-AKT通路减轻小鼠脑缺血恢复期的神经元损伤发挥治疗作用。

曲唑酮联合百乐眠通过PI3K-AKT信号通路改善老年人慢性失眠伴焦虑抑郁症状的研究

目的研究曲唑酮联合百乐眠通过磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激活酶B(AKT)信号通路对老年人慢性失眠伴焦虑抑郁症状的影响。方法前瞻性选取2018年4月至2020年1月河北北方学院附属第一医院收治的138例老年人慢性失眠伴焦虑抑郁症患者,按随机数字表法将其分为对照组和观察组,各69例。对照组口服曲唑酮50 mg/d,观察组在对照组基础上口服百乐眠胶囊2次/d,两组均治疗2个月。比较两组患者各因子表达差异;评估两组患者临床治疗效果;分别于治疗前及治疗2个月后,采用匹兹堡睡眠指数(PSQI)评估受试者睡眠质量;采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评估患者抑郁情况;采用汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评估患者焦虑情况。采用酶联免疫吸附试验测定患者血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量;采用蛋白免疫印迹法测定患者外周血单个核细胞中PI3K、AKT和pAKT蛋白表达量;采用荧光定量PCR法测定患者外周血单个核细胞中PI3K和AKT mRNA含量;观察并记录受试者治疗期间不良反应发生情况。结果观察组临床治疗总有效率为94.20%,明显高于对照组(71.01%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗2个月后,两组患者PSQI、HAMD和HAMA量表评分均较治疗前明显降低,且观察组较对照组降低更显著,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗2个月后,两组患者TNF-α和IL-1β水平均较治疗前明显降低,且观察组患者TNF-α和IL-1β水平较对照组降低更显著,差异均有统计学意义(P<0.05)。患者PSQI、HAMD和HAMA量表评分与信号通路中因子TNF-α和IL-1β均呈正相关(r=0.443、0.447、0.508;r=0.478、0.472、0.492,P<0.05)。治疗2个月后,两组患者PI3K、AKT、pAKT蛋白以及PI3K mRNA和AKT mRNA均较治疗前降低,且观察组均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组不良反应发生率为11.60%,明显低于对照组(28.99%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论曲唑酮联合百乐眠通过PI3K-AKT信号通路可以明显改善老年人慢性失眠伴焦虑抑郁症状。

基于PI3K-Akt通路探讨补阳还五汤改善阿司匹林致消化道溃疡的机制

目的探讨补阳还五汤对阿司匹林致消化道溃疡的保护作用及其可能的作用机制。方法将75只大鼠随机分为空白对照组、胃溃疡模型组、补阳还五汤组、血府逐瘀汤组和双抗组,每组15只。除空白组大鼠灌胃等体积生理盐水,其余各组大鼠均灌胃阿司匹林水溶液300 mg/kg,并于灌胃6 h后各给药组分别灌胃相应药物,模型组灌胃等体积生理盐水,每日1次,连续14 d。检测各组大鼠凝血四项功能;运用酶联免疫吸附法(ELISA)和实时荧光定量聚合酶链式反应法(RT-PCR)分别测定各组大鼠血浆中血小板活化因子(PAF)、表皮生长因子(EGF)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3k)、蛋白激酶B(Akt)表达水平及相关mRNA的表达。结果与模型组比较,血府逐瘀汤组与正常组凝血酶时间(TT)时间明显延长(P<0.05);与正常组比较,血府逐瘀汤组和双抗组大鼠血清PAF水平明显提高,各给药组大鼠血清EGF水平明显降低(P<0.05);与模型组相比较,补阳还五汤组、血府逐瘀汤组、双抗组大鼠胃组织PI3k、Akt、PAF mRNA表达水平明显降低,EGF mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。结论补阳还五汤联合阿司匹林具有强有力的抗凝作用,且能够抑制细胞因子PAF基因的表达以及胃组织中PI3k-Akt mRNA激活,提高细胞因子EGF的表达,对胃黏膜起到保护作用。

鬼针草调节PI3K-Akt信号通路改善急性肺损伤作用的分子机制研究

目的研究鬼针草对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)的改善作用及其机制。方法将60只Balb/c小鼠随机分为6组:空白组、模型组、鬼针草(低、中、高剂量)组及阳性药组,腹腔注射LPS诱导ALI模型12 h后进行灌胃给药,建模5 d后处死并分离肺组织,观察组织病理切片及检测相关炎症因子活性,通过网络药理学预测鬼针草改善ALI作用的药效物质基础及潜在的作用机制,采用免疫组织化学方法对相应通路的关键靶点进行验证。结果鬼针草可改善ALI小鼠肺泡间质水肿、肺泡壁增厚等病理损伤,显著抑制肺组织髓过氧化物酶(MPO)及血清TNF-α,IL-1β和IL-6的表达(P<0.05),从而缓解机体的炎症反应。通过网络药理学预测分析,鬼针草治疗ALI的主要活性成分可能为黄酮类化合物中的槲皮素和木犀草素;通过作用于TNF、IL-6、ALB、GAPDH、AKT1、VEGFA、STAT3等靶点,调控PI3K-Akt、TNF、HIF-1等通路来发挥改善ALI的作用。RT-qPCR及免疫组织化学结果显示鬼针草可促进ALI小鼠肺组织Akt的转录及表达(P<0.05)。结论鬼针草对ALI炎症反应具有改善作用,其机制可能为激活PI3K-Akt信号通路来发挥肺保护作用。为鬼针草的进一步开发利用提供了一定的实验基础。

参附注射液通过调控PI3K-AKT通路对LPS诱导的小鼠肺上皮细胞自噬与凋亡的影响

目的:研究参附注射液对脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺上皮细胞MLE-12的保护作用,并进一步探究其对自噬和凋亡的作用及潜在的分子机制。方法:采用LPS处理小鼠肺上皮细胞MLE-12建立脓毒症急性肺损伤(ALI)细胞模型,分为空白对照组、模型组及参附注射液低、中、高浓度组。CCK-8法检测LPS和参附注射液对MLE-12细胞活力的影响;酶联免疫吸附试验检测细胞上清中TNF-α、IL-1β、IL-6含量;试剂盒检测细胞内ROS水平;蛋白免疫印迹法检测肺上皮细胞标记蛋白E-cadherin、Occludin、ZO-1,自噬相关蛋白LC3B、Beclin1,凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及PI3K-AKT信号通路相关蛋白的表达;细胞免疫荧光检测细胞内LC3B蛋白表达;流式细胞术检测参附注射液对LPS诱导下MLE-12细胞凋亡的影响。结果:与模型组比较,参附注射液各组MLE-12细胞活力显著升高,TNF-α、IL-1β、IL-6分泌及细胞内ROS生成显著降低,E-cadherin、Occludin、ZO-1、Beclin1蛋白表达及LC3BⅡ/LC3BⅠ水平显著升高,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT水平显著降低,MLE-12细胞凋亡率显著降低(P<0.01)。结论:参附注射液可抑制LPS诱导的炎症因子分泌,减轻氧化应激,改善肺上皮细胞功能,增加细胞保护性自噬,抑制细胞凋亡,其机制可能与调控PI3K-AKT信号通路有关。

PI3K抑制剂林普利塞对弥漫大B细胞淋巴瘤的体外抗肿瘤效应

目的探讨PI3K抑制剂林普利塞(Linperlisib,YY-20394)对弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)的抗肿瘤效应及其作用机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度YY-20394对SU-DHL-4细胞(GCB亚型)和U2932细胞(ABC亚型)增殖能力的影响,并计算出24 h时药物的IC_(25)、IC_(50)、IC_(75)。采用流式细胞术检测IC_(25)、IC_(50)和IC_(75)浓度YY-20394对SU-DHL-4细胞和U2932细胞凋亡的影响。采用高通量RNA测序技术(RNA-Seq)检测药物作用前后各组细胞基因表达的变化,对差异表达基因进行KEGG信号通路分析和GO富集分析,并且对各组细胞基因表达数据进行GSEA富集分析。结果在YY-20394作用下,SU-DHL-4细胞增殖抑制率和细胞凋亡率增加(P<0.05),但U2932细胞增殖及凋亡能力未发生明显改变(P>0.05)。KEGG和GO富集分析结果显示,YY-20394对SU-DHL-4细胞的抗肿瘤作用涉及多条信号通路,其中PI3K-AKT、MAPK、JAK-STAT等信号通路的活性下调,且可能通过影响醇类物质合成等细胞生物学功能发挥作用;而U2932细胞中未富集到具有显著差异的信号通路。GSEA富集分析显示PI3K-AKT信号通路在SU-DHL-4细胞中的活化水平显著低于U2932细胞。结论PI3K抑制剂YY-20394通过影响PI3K-AKT等肿瘤相关信号通路,对GCB亚型的SU-DHL-4细胞产生抗肿瘤效应,而对ABC亚型的U2932细胞不敏感。

靶向PIK3CA突变的抗肿瘤药物研究进展

PI3K-Akt信号通路作为肿瘤相关十大信号通路之一,在调控肿瘤恶性进展中扮演着重要角色。PIK3CA编码PI3K复合体蛋白催化亚基P110α,是一种典型的致癌突变,对实体瘤的发生和发展至关重要。PIK3CA突变可导致肿瘤对一线抗癌药物产生耐药性,其机制可能与PIK3CA突变激活PI3K-Akt信号通路相关。目前,几种靶向PIK3CA突变的抑制剂在临床研究中取得了一定进展,特别是PI3Kα特异性抑制剂阿培利司已被FDA批准作为PIK3CA突变乳腺癌的治疗药物。本文就PIK3CA突变促进肿瘤药物耐药的机制,以及逆转耐药的治疗策略作一综述,以期更全面了解PIK3CA突变在肿瘤耐药方面的进展以及最新治疗策略。

乳腺癌PIK3CA突变的临床意义及其检测研究进展

磷脂酰肌醇4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha, PIK3CA)基因突变在乳腺癌中占30%~40%,对早期乳腺癌的发生、发展至关重要。随着靶向PIK3CA突变的抑制剂的发展,PIK3CA突变成为乳腺癌个体化治疗的重要检测因子。该文就PIK3CA突变在乳腺癌中的相关临床研究进展以及临床检测等进行系统综述。

右美托咪定通过α7nAChR介导的PI3K/Akt通路改善糖尿病大鼠术后认知功能

目的研究右美托咪定对糖尿病大鼠术后认知功能的影响及其机制。方法将30只SD大鼠随机分为对照组(CG组)、糖尿病组(DM组)、糖尿病+右美托咪定组(DM+Dex组)、糖尿病+右美托咪定组+甲基牛扁亭柠檬酸盐组(DM+Dex+MLA组)和糖尿病+右美托咪定+LY294002组(DM+Dex+LY组)。CG组为正常对照处理;其余各组糖尿病造模。DM+Dex组、DM+Dex+MLA组和DM+Bex+LY294002组于麻醉前腹腔注射右美托咪定;DM+Dex+MLA组在输注右美托咪定前腹腔注射MLA;DM+Dex+LY组在输注右美托咪定前腹腔注射LY294002。各组大鼠麻醉后,行剖腹探查术。手术后1周进行水迷宫实验。处死大鼠后分离其海马组织,Western blot检测海马组织中α7nAChR、p-PI3K、p-Akt的相对表达量,HE染色观察海马组织损伤情况。结果与CG组相比,DM组大鼠Morris水迷宫实验找到平台所需时间显著增加(P<0.05),平台穿越次数显著减少(P<0.05),海马组织中α7nAChR、p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显降低(P<0.05),DM组海马组织神经元萎缩、坏死,排列紊乱,部分神经元细胞核固缩、深染,甚至消失;与DM组相比,DM+Dex组大鼠找到平台所需时间显著缩短(P<0.05),平台穿越次数显著增加(P<0.05),海马组织中α7nAChR、p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显升高(P<0.05),DM+Dex组较DM组海马损伤明显减轻;而右美托咪定的作用可被α7nAChR的抑制剂即MLA和PI3K抑制剂LY294002部分逆转。结论右美托咪定通过α7nAChR介导的PI3K-Akt信号通路改善糖尿病大鼠术后认知功能。

基于PI3K-Akt信号通路的清带汤对大肠癌细胞增殖的影响

目的通过体内外实验观察清带汤对大肠癌细胞增殖的抑制作用,并通过网络药理学、分子对接技术和实验探讨其可能的机制。方法体外培养人大肠癌HCT116、LoVo、HT29细胞和正常人肠上皮NCM460细胞,加入不同浓度(10、20、40、80、160μg/mL)清带汤冻干粉干预48 h,CCK-8法检测细胞增殖;建立人大肠癌HCT116细胞荷瘤裸鼠模型,将裸鼠随机分为对照组和清带汤组(11.6 g/kg),给药21 d后观察裸鼠瘤体生长情况;采用网络药理学预测清带汤治疗大肠癌有效成分、核心靶点及相关通路,利用分子对接技术分析清带汤有效成分与核心靶点的结合能力;Western blot检测清带汤干预后HCT116和LoVo细胞PI3K-Akt信号通路相关蛋白表达,q PCR检测HCT116、LoVo细胞及裸鼠肿瘤组织PI3K-Akt信号通路相关基因表达。结果清带汤(20、40、80、160μg/mL)对HCT116、LoVo、HT29细胞增殖有显著抑制作用(P<0.05,P<0.01),而对NCM460细胞无明显影响。与对照组比较,清带汤组裸鼠皮下移植瘤体积和质量显著降低(P<0.05)。网络药理学和分子对接结果显示,清带汤抑制大肠癌可能与PI3K-Akt信号通路有关。Western blot结果显示,与对照组比较,清带汤组HCT116、LoVo细胞p-AKT和p-mTOR蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01);qPCR结果显示,与对照组比较,清带汤组HCT116、LoVo细胞及裸鼠肿瘤组织PI3K-Akt信号通路下游基因CDK2、BCL-2和MCL-1表达均显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论清带汤能有效抑制人大肠癌细胞增殖及荷瘤裸鼠瘤体生长,其机制与调控PI3K-Akt信号通路、抑制癌细胞增殖有关。

阿美替尼联合安罗替尼通过下调PI3K/AKT通路抑制非小细胞肺癌细胞的增殖

目的探究阿美替尼联合安罗替尼抑制非小细胞肺癌的作用。方法CCK-8法、集落克隆法和流式细胞术检测不同浓度阿美替尼和安罗替尼对PC-9细胞和HCC827细胞增殖、细胞存活和细胞凋亡的影响;SynergyFinder模型评价阿美替尼与安罗替尼的协同作用;Transwell小室实验检测阿美替尼联合安罗替尼对PC-9细胞和HCC827细胞侵袭及迁移的作用;Western blotting实验检测阿美替尼联合安罗替尼对PC-9细胞和HCC827细胞凋亡和侵袭迁移相关蛋白Bax、Bcl-2、E-Cadherin、Vimentin、MMP2和MMP9及PI3K-Akt通路关键蛋白表达的影响。结果阿美替尼作用于PC-9细胞的IC_(50)为1.701μmol/L,安罗替尼作用于PC-9细胞的IC_(50)=4.979μmol/L,协同得分(ZIP)为19.112;阿美替尼对HCC827细胞IC_(50)=2.961μmol/L,安罗替尼对HCC827细胞IC_(50)=7.934μmol/L,协同得分(ZIP)为12.325,阿美替尼联合安罗替尼能够显著抑制PC-9细胞和HCC827细胞增殖(P<0.05)。相比于单药组,集落克隆结果表明阿美替尼联合安罗替尼能够显著抑制PC-9细胞和HCC827细胞存活(P<0.01);流式细胞术结果表明,阿美替尼联合安罗替尼能够促进PC-9细胞和HCC827细胞发生凋亡(P<0.05);Transwell实验结果表明,阿美替尼联合安罗替尼能够显著抑制PC-9细胞和HCC827细胞的侵袭迁移能力(P<0.01);Western blotting实验结果表明,阿美替尼联合安罗替尼能够显著促进PC-9细胞和HCC827细胞中E-Cadherin和Bax蛋白的表达,抑制Bcl-2、Vimentin、MMP2和MMP9蛋白的表达(P<0.01),同时显著降低了PI3K-Akt通路中关键蛋白PI3K、Akt的磷酸化蛋白水平(P<0.01)。结论阿美替尼联合安罗替尼通过下调PI3K-Akt通路抑制NSCLC肿瘤细胞,这种联合治疗方式可能成为临床上治疗NSCLC患者的一种潜在治疗策略。

防己黄芪汤对CIA大鼠关节PI3K-Akt通路的调控作用研究

目的:研究防己黄芪汤(FHD)治疗胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的药理学机制及其对PI3K-Akt信号通路的调控作用。方法:60只雌性Wistar大鼠随机分为健康对照组(Control)、CIA组、不同剂量FHD[2.2、4.4、8.8 g(/kg·d)]干预组。除对照组外,其余各组采用牛Ⅱ型胶原构建CIA模型,不同剂量FHD干预,持续给药6周。HE染色检测大鼠关节和脾脏病理变化,ELISA检测血清TNF-α、IL-1、IL-6表达,网络药理学分析FHD治疗类风湿关节炎(RA)的核心信号通路,Western blot检测核心通路蛋白表达。结果:与Control组相比,CIA组大鼠关节炎症细胞浸润和骨质破坏明显,脾脏内白髓增生显著,血清TNF-α、IL-1、IL-6表达显著升高(P<0.05,P<0.01);与CIA组相比,不同剂量FHD组大鼠关节炎症及骨破坏显著改善,脾脏白髓增生减轻,低、中剂量FHD组大鼠血清TNF-α、IL-1、IL-6表达显著降低(P<0.05,P<0.01),高剂量FHD组TNF-α和IL-1表达差异无统计学意义(P>0.05);网络药理学分析显示FHD治疗RA的核心通路为PI3K-Akt通路;CIA组大鼠关节p-PI3K、p-Akt表达较Control组显著升高(P<0.01),不同剂量FHD组p-PI3K、p-Akt表达较CIA组显著降低(P<0.01),各组大鼠PI3K、Akt蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:成功构建CIA大鼠模型;FHD对CIA大鼠具有良好治疗作用,其安全用药剂量为2.2~4.4 g(/kg·d);FHD可能通过抑制PI3K-Akt通路激活和炎症因子生成发挥RA治疗作用。

FBXO38通过PI3K-Akt信号通路调控眼部黑色素瘤增殖

目的·研究F-box蛋白38(F-box only protein 38,FBXO38)对眼部黑色素瘤增殖的作用以及潜在的调控通路。方法·使用FBXO38短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)和FBXO38过表达质粒构建FBXO38敲低以及过表达的人皮肤黑色素瘤A375和葡萄膜黑色素瘤OMM2.3细胞系,并通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和Western blotting在转录和蛋白水平验证FBXO38的敲低和过表达效率。通过克隆形成实验、BrdU免疫荧光染色和CCK8细胞增殖实验,探究FBXO38对黑色素瘤细胞增殖的影响。使用肿瘤基因组图谱计划数据库(The Cancer Genome Atlas,TCGA),分析FBXO38高表达和低表达组中的差异表达基因,并进行京都基因与基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集,揭示与FBXO38相关的信号通路。进一步通过CCK8细胞增殖实验检测信号通路抑制剂对不同FBXO38表达量细胞的抑制率。同时通过qRT-PCR和Western blotting,验证在敲低FBXO38之后该通路是否激活。结果·qRT-PCR和Western blotting验证A375和OMM2.3细胞系中的FBXO38的mRNA及蛋白质表达水平,发现与对照组相比敲低组的FBXO38表达水平下降,与野生型相比过表达组的FBXO38的表达水平提高(P<0.05)。克隆形成实验、BrdU免疫荧光染色和CCK8细胞增殖实验显示,敲低FBXO38显著增强A375和OMM2.3细胞的增殖能力(P<0.05),反之过表达FBXO38抑制A375和OMM2.3细胞增殖(P<0.05)。KEGG通路富集分析显示,在皮肤黑色素瘤和葡萄膜黑色素瘤中,FBXO38的表达影响磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B,PI3K-Akt)通路激活。与对照组相比,PI3K抑制剂LY294002和mTOR1抑制剂Everolimus对FBXO38敲低组的抑制率显著提升(P<0.05),对FBXO38过表达组的抑制率则显著下降(P<0.05)。Western blotting结果显示,敲低FBXO38之后,与PI3K-Akt通路相关的PTEN、P21和P53蛋白水平下降,而MDM2蛋白水平上升。qRT-PCR结果显示在FBXO38敲低细胞中P53转录水平显著下降(P<0.05),而MDM2转录水平显著上升(P<0.05)。结论·FBXO38通过PI3K-Akt信号通路参与调控眼部黑色素瘤细胞的增殖。