RNAi抑制PI3Kp85α蛋白活性对人乳腺癌细胞系MCF-7生长抑制的体外研究

目的:探讨敲低P13Kp85α表达对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长的影响和机制。方法:用靶向P13Kp85α的siRNA转染人乳腺癌细胞系MCF-7,使用Real-time PCR法鉴定转染P13Kp85α表达水平;MTT法评价P13Kp85α siRNA对乳腺癌细胞系MCF-7生长的影响;流式细胞术检测转染后细胞周期分布和凋亡;采用免疫荧光染色及western blot方法观察IA型P13K/AKT通路主要成员的表达。结果:Real-time PCR结果显示P13Kp85αsiRNA转染导致P13Kp85α表达下调;MTF结果显示P13Kp85αsiRNA转染抑制肿瘤细胞生长;流式细胞术检测可见P13Kp85α siRNA转染组细胞周期存在G_0/G_1期阻滞而且凋亡率显著高于对照组与空载体组(F=19.255,P=0.002)。结论:应用P13Kp85α siRNA转染人乳腺癌细胞系MCF-7细胞,可抑制其增殖和诱导细胞凋亡,因此P13Kp85α可以作为人乳腺癌基因治疗的候选靶点。

靶向PI3Kp85α的siRNA抑制人卵巢癌细胞系生长的实验研究

目的:探讨siRNA靶向抑制卵巢癌细胞磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基p85α(phosphoinositide 3-kinase regulatory subunitp85 alpha,P13Kp85α)表达后,对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法:应用siRNA靶向PI3Kp85α转染人卵巢癌细胞系SKOV3,Re-altime PCR检测目的基因mRNA表达,Western blot和免疫荧光技术检测PI3Kp85α、AKT1、AKT2和Ki67的表达变化;M_rr法和an-nexin V标记评价细胞的增殖活性和凋亡,流式细胞法分析细胞周期.Transwell法分析侵袭能力。结果:转染PI3Kp85αsiRNA后PI3Kp85αmRNA表达下降;PI3Kp85α、AKT1、AKT2和Ki67的蛋白表达水平均明显降低(P<0.01)。卵巢癌细胞增殖活性明显受到抑制,细胞周期在G_0/G_1期有明显的阻滞,早期凋亡的细胞教明显增多,细胞的运动迁移能力降低(P<0.01),侵袭能力减弱(P<0.01)。结论:靶向PI3Kp85α的siRNA技术可抑制卵巢癌细胞PI3Kp85α的表达,进而抑制肿瘤细胞的生长,这可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点。

甲状腺癌组织中PI3Kp85α、EZRIN和ARID1A表达检测及作用探讨

目的:通过对甲状腺癌及癌旁正常组织中磷脂酰肌醇3-激酶p85α亚单位(PI3Kp85α)、EZRIN和抑癌基因染色质重建复合物SWI/SNF亚基(AT rich interactive domain 1A:ARID1A)的mRNA和蛋白质的表达情况进行检测,探讨PI3Kp85α、EZRIN和ARID1A的相互之间的关联性,及三个检测指标与甲状腺癌病理分类因素的关系,来试图阐明PI3Kp85α、EZRIN和ARID1A的表达在甲状腺癌发生、侵袭及转移中的意义。方法:收集2017年1月-2018年5月忑枣庄市立医院乳腺甲状腺外科就诊的患者,就诊前无任何措施的治疗,经病理诊断的甲状腺癌组织114例及癌旁正常甲状腺组织43例。应用免疫组织化法和RT-PCR的方法检测甲状腺癌及癌务正常甲状腺组织中的PI3Kp85α、EZRIN和ARID1A的表达水平(实验结果采用SPSS19.0软件进行统计分析学分析处理)。结果:①与癌务正常组织相比较,PI3Kp85α、EZRIN在甲状腺癌中的阳性表达率及mRNA的表达显著升高(P<0.01),而ARID1A阳性表达率及mRNA的表达显著降低(P<0.01);②ARID1A mRNA的表达与甲状腺癌分化恶性程度呈负相关(P<0.05r=-0.689);PI3Kp85α、EZRIN与甲状腺癌的恶性程度呈正相关。(P<0.05 r=0.625)结论:PI3Kp85α、EZRIN、ARID1A的异常表达与甲状腺癌有较高的相关性,ARID1A的缺失或降低,能够促进PI3Kp85α和EZRIN蛋白的高表达,进而促进甲状腺癌的发生、发展和侵袭;联合检测该三项指标,有助于甲状腺癌对潜能侵袭转移的判断,从而为甲状腺癌的治疗和疗效评估,提供依据。

肝癌组织中XB130和PI3Kp85的表达及临床意义

目的探讨肝细胞肝癌(HCC)中XB130和PI3Kp85的表达情况及与临床病理因素的关系。方法采用免疫组化方法检测60例HCC组织和30例癌旁组织中XB130和PI3Kp85蛋白的表达差异,分析HCC组织中XB130和PI3Kp85表达的相关性及与临床病理因素的关系。结果 HCC组织中XB130和PI3Kp85蛋白阳性表达率分别为76.67%(46/60)和68.33%(41/60),高于癌旁组织的23.33%(7/30)和13.33%(4/30),差异均有统计学意义(均<0.05)。XB130和PI3Kp85表达均与分化程度、门静脉癌栓及临床分期有关(均<0.05)。XB130和PI3Kp85在HCC中的表达呈正相关(=0.56,<0.05)。结论 HCC组织中XB130和PI3Kp85蛋白表达明显升高,其表达上调可能参与HCC的发生、发展过程,联合检测XB130和PI3Kp85有望成为HCC恶性程度及门静脉侵犯判断的指标。

鼻咽癌组织中PI3Kp85的异常表达

目的通过检测PI3Kp85在鼻咽癌组织及鼻咽部慢性炎症组织中的表达情况,探讨它们在鼻咽癌发生、发展过程中的作用。方法采用免疫组织化学SP法检测PI3Kp85在57例鼻咽癌和20例鼻咽部黏膜慢性炎症组织中的表达情况,应用Image-ProPlus图像分析软件测定免疫组化图像的平均光密度(mean optical density,MOD),运用SPSS13.0软件进行统计学分析,观察其与鼻咽癌临床病理特征之间的关系。结果PI3Kp85在鼻咽癌组织的阳性表达率为78.95%,而在鼻咽部慢性炎症组织中的阳性表达率为45.00%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。PI3Kp85表达与临床分期、淋巴结转移、原发病灶大小及患者年龄、性别均无相关性(P>0.05)。结论PI3Kp85蛋白表达可能与鼻咽癌的发生有关。

疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝细胞PI3K p85α蛋白表达的影响

目的观察疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝细胞磷脂酰肌醇-3-激酶p85α(PI3K p85α)表达的影响。方法以高脂饮食12周建立大鼠NAFLD模型后,造模组大鼠再随机分为模型组、疏肝组、健脾组、综合组和自然恢复组等5组。治疗组分别给予相应药物灌胃,其他组给予等量蒸馏水灌胃,模型组继续高脂饮食,其余均予基础饲料喂养。治疗8周后,用3%戊巴比妥腹腔麻醉,腹主动脉取血,全自动生化仪检测血脂及肝功,稳态模型法评价胰岛素抵抗程度,光镜下观察各组肝脏病理改变,免疫组化方法检测肝细胞内PI3K p85α蛋白的表达情况。结果与模型组相比,药物治疗各组及自然恢复组肝脏脂变程度明显减轻,肝功、血脂、胰岛素抵抗均有显著改善(P<0.05或P<0.01),肝细胞内PI3K p85α蛋白的表达明显减少(P<0.05)。与自然恢复组相比,药物治疗各组肝功、血脂、血糖的改善无显著差异,但肝脏脂变程度减轻,胰岛素抵抗指数明显下降(P<0.05),肝细胞内PI3K p85α蛋白的表达显著降低(P<0.05)。结论疏肝健脾方药对高脂饮食诱导的大鼠NAFLD有较好的治疗作用,其机制可能是与其降低肝细胞PI3K p85α的表达有关。

RNAi调下AKT1、PI3K P85表达抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖

目的:探讨RNAi(RNA interference)技术抑制乳腺癌MCF-7细胞中AKT1和PI3KP85亚基的表达对MCF-7细胞增殖和侵袭等的影响。方法:将包含AKT1、PI3KP85两种siRNA开放阅读框的短发夹RNA(shRNA)重组腺病毒质粒表达载体rAd5-siAKT1-siPI3K转染至乳腺癌MCF-7细胞。应用real-timePCR和Western blotting检测转染后目的基因mRNA和蛋白的表达水平,并用Western blotting检测目的基因被沉默后PCNA、cyclinD1和P53的表达情况。应用MTT法、流式细胞术、2-D和3-DMatrigel实验检测MCF-7细胞转染前后的细胞增殖周期和侵袭能力。结果:重组腺病毒质粒表达载体rAd5-siAKT1-siPI3K介导的靶向AKT1,PI3KP85shRNA可以有效抑制目的基因AKT1和PI3Kp85的mRNA和蛋白表达;下游相关因子PCNA、cyclinD1的表达亦下调,P53表达则上调。MTT法结果显示rAd5-siAKT1-siPI3K组细胞生长抑制率>50%,与未转染组和rAd5-siCtrl转染组比较,出现明显的G1/G0细胞周期阻滞;2-D和3-DMatrigel实验显示,未转染组和rAd5-siCtrl转染组细胞呈正常形态,而rAd5-siAKT1-siPI3K转染组细胞贴壁生长能力明显减低,细胞团块明显缩小。结论:靶向AKT1、PI3KP85亚基的shRNA技术可以抑制MCF-7细胞中AKT1、PI3KP85亚基的表达,抑制MCF-7细胞的体外增殖。

芪桂益脉灵对急性心肌缺血再灌注损伤保护机制的研究

目的通过测定ICAM-1、VCAM-1、PI-3Kp85am RNA和AKT2m RNA的表达,探讨芪桂益脉灵对急性心肌缺血再灌注损伤的保护机制。方法随机将50只SD大鼠分为5组,每组10只,每日清晨空腹灌胃1次,连续灌服7 d。空白对照组(灌服生理盐水)开胸暴露左冠状动脉后不做任何处理,假手术组(灌服生理盐水)开胸暴露左冠状动脉后穿线并结扎,单纯缺血再灌注组(灌服生理盐水)、芪桂益脉灵低剂量组(0.6 g/kg)和芪桂益脉灵高剂量组(1.2g/kg)结扎左冠状动脉前降支造成急性心肌梗死(AMI)模型。再灌注后腹主动脉采血5 m L,离心后将上层血清用双抗体夹心法酶联免疫测定ICAM-1和VCAM-1的表达;取大鼠心尖部缺血组织,采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法来测定PI-3Kp85am RNA、AKT2m RNA的表达。结果芪桂益脉灵组与单纯缺血再灌注组比较,ICAM-1和VCAM-1表达均下降(P<0.05),PI3Kp85am RNA、AKT2m RNA水平明显升高(P<0.05),其中高剂量组的效果更加显著。结论芪桂益脉灵可减轻心肌缺血再灌注后的炎症反应,并且可激活再灌注损伤挽救激酶信号通路,从而保护血管内皮和受损心肌组织。

卵巢癌组织芯片中磷脂酰肌醇3激酶调节亚基p85α,AKT2及Ki-67表达

目的:应用高通量组织芯片技术分析卵巢癌和正常卵巢组织中磷脂酰肌醇3激酶调节亚基p85α(phosphoinositide 3-kinase regulatory subunit p85 alpha,PI3Kp85α)、AKT2和Ki-67蛋白的表达,探讨其相关性及临床意义。方法:利用组织芯片技术结合免疫组化法检测177例卵巢癌和10例正常卵巢组织中PI3Kp85α,AKT2及Ki-67的表达。结果:PI3Kp85α,AKT2及Ki-67的总阳性表达率在卵巢癌组织中分别为70.6%,76.3%和74.5%,正常卵巢组织中分别为30.0%,10.0%和10.0%,蛋白阳性表达率的差异有统计学意义(P<0.05);在高分化卵巢癌组织中分别为43.5%,47.8%和47.8%,中分化卵巢癌组织中分别为69.4%,75.8%和74.2%,低分化卵巢癌组织中分别为78.3%,83.7%和84.8%,蛋白阳性表达率有统计学差异(P<0.01),其阳性表达率及强度随癌症恶性程度增高而增高;PI3Kp85α,AKT2与Ki-67蛋白的表达均存在相关性(P<0.01)。结论:联合分析PI3Kp85α,AKT2和Ki-67的表达对预测卵巢癌的发生和发展有重要意义。