结直肠癌与不同上皮内瘤变腺瘤中PI3Kp110β的表达及临床意义

目的探讨PI3Kp110β表达与结直肠癌发生、发展的相关性及其临床意义。方法应用免疫组化EnVision法检测PI3Kp110β在138例结直肠腺癌、29例低级别上皮内瘤变(low-grade intraepithelial neoplasia,LGIN)腺瘤、35例高级别上皮内瘤变(high-grade intraepithelial neoplasia,HGIN)腺瘤、10例结肠正常黏膜组织中的表达情况。结果 (1)PI3Kp110β在结直肠癌组织中的表达明显高于结直肠LGIN腺瘤、HGIN腺瘤及正常黏膜组织,其差异有统计学意义(P<0.05),PI3Kp110β在结直肠HGIN腺瘤组织中的表达与结直肠LGIN腺瘤、正常黏膜组织中的表达相比,差异无显著性(P>0.05);(2)结直肠癌组织中PI3Kp110β的表达与肿瘤的发生部位、分化程度、临床分期及淋巴结转移等临床因素间具有相关性(P<0.05),与患者的性别、年龄及肿瘤大小等因素无关(P>0.05)。结论 PI3Kp110β异常表达可能在结直肠癌的发生、发展中发挥着重要作用,检测PI3Kp110β对评判结直肠癌的生物学行为及预后有一定临床意义。

大肠癌原发灶与淋巴结转移灶中PI3Kp110α、PI3Kp110β与Bcl-2、CyclinD1表达的相关性及其意义

目的:检测大肠癌原发灶与淋巴结(lymph node,LN)转移灶中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)p110α、PI3Kp110β与B细胞淋巴瘤基因-2(B c e l l lymphoma 2,Bcl-2)、CyclinD1的表达情况,探讨在大肠癌发生及转移中的相关性及其与临床病理因素及预后的关系.方法:采用免疫组织化学方法在30例正常大肠黏膜组织,52例未发生LN转移的大肠癌组织,50例发生LN转移的大肠癌原发灶及其转移灶中检测PI3Kp110α、PI3Kp110β、Bcl-2和CyclinD1的表达情况及其差异,分析PI3Kp110α、PI3Kp110β与Bcl-2和CyclinD1之间的相关性以及与临床病理因素及其预后的关系.结果:(1)PI3Kp110α与Bcl-2在无LN转移组、有LN转移组的原发灶和其相应LN转移灶中的表达均高于正常肠黏膜组(P<0.05);PI3Kp110β与CyclinD1在无LN转移组、有LN转移组的原发灶和其相应LN转移灶中的表达均高于正常肠黏膜组,且在有LN转移的原发灶中的表达均高于其相应LN转移灶和无LN转移组肠癌中的表达(P<0.05);(2)PI3Kp110α与Bcl-2在4组中均呈正相关(P<0.05);PI3Kp110α与CyclinD1在正常肠黏膜组,无LN转移组和有LN转移组中均呈正相关(P<0.05);P I3Kp110β与Bcl-2和CyclinD1在4组中均呈正相关(P<0.05);(3)PI3Kp110α、PI3Kp110β和CyclinD1蛋白的表达与肿瘤分化程度及LN转移相关,Bcl-2的表达与肿瘤分化程度相关;(4)Kaplan-Meier分析显示:PI3Kp110α、PI3Kp110β、Bcl-2和CyclinD1为影响大肠癌预后的因素之一;Cox比例风险模型分析显示:PI3Kp110α、PI3Kp110β是影响大肠癌患者预后的独立因素.结论:(1)PI3Kp110α、PI3Kp110β与Bcl-2、CyclinD1在大肠癌原发灶及转移灶中的表达均高于正常黏膜,在肿瘤的发生发展中发挥重要作用;(2)大肠癌LN转移灶中,PI3Kp110α与PI3Kp110β分别通过影响Bcl-2及CyclinD1对转移灶中的肿瘤生长起促进作用;(3)PI3Kp110α、PI3Kp110β、Bcl-2和CyclinD1与大肠癌的分化程度有关,且PI3Kp110α、PI3Kp110β和CyclinD1与大肠癌的转移密切相关;(4)PI3Kp110α和PI3Kp110β是影响大肠癌预后的独立危险因素.

PI3Kp110不同亚单位在结直肠腺瘤癌变中的表达及相关性

目的:探讨PI3Kp110不同亚单位p110α、p110β在结直肠腺瘤癌变过程中的表达及其相关性.方法:随机选择低级别上皮内瘤变(lowgrade intraepithelial neoplasia,LGIN)腺瘤组织46例、高级别上皮内瘤变(high-grade intraepithelial neoplasia,HGIN)腺瘤组织32例、结直肠腺瘤癌变组织60例以及30例正常黏膜组织,应用免疫组织化学染色法,分别检测p110α、p110β的表达情况,分析两者表达的相关性及其与临床病理因素的关系.结果:(1)p110α在癌组织中的的表达明显高于LGIN腺瘤及正常组织(P<0.05),但与HGIN腺瘤无明显差异(P>0.05);而在HGIN腺瘤中的表达高于LGIN腺瘤及正常组织,且差异有统计学意义(58.64±15.37vs37.80±14.47,P<0.05).p110β在癌组织、HGIN腺瘤、LGIN腺瘤及正常组织中的表达逐渐降低,且差异有统计学意义(P<0.05);(2)癌组织中p110α的表达与年龄、肿瘤直径、分化程度有相关性(P<0.05),而与患者的性别、肿瘤的发病部位、TNM分期及淋巴结转移等因素无关(P>0.05);p110β的表达与肿瘤的分化程度、TNM分期等临床因素间具有相关性(P<0.05),与患者的性别、年龄、肿瘤直径、发病部位及淋巴结转移等因素无关(P>0.05);(3)p110α、p110β在LGIN腺瘤中的表达呈正相关关系(r=0.419,P<0.05),而在癌组织、HGIN腺瘤、正常组织中的表达无相关性(r=0.145、-0.036、0.242,P>0.05).结论:p110α与p110β分别在腺瘤向腺癌转化过程的不同阶段中发挥重要作用,联合检测p110α、p110β的表达可作为早期预测腺瘤癌变的指标.

非小细胞肺癌PI3Kp110β高表达的临床意义及机制

背景与目的磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositide 3-kinases,PI3K)通路是细胞内最重要的信号传导通路之一,参与细胞生长、增殖、分化、运动等多项重要功能,其异常活化见于50%-70%的非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer,NSCLC)。PI3K蛋白作为PI3K通路的枢纽,表达水平的变化直接影响通路的功能状态,与NSCLC的发生、发展和靶向治疗密切相关。本研究旨在探讨PI3K催化亚基p110β在NSCLC中的表达、临床意义及作用机制。方法采用免疫组化法检测170例NSCLC中p110β和PI3K通路其他蛋白的表达,分析p110β的表达与患者临床病理特征的关系,与PI3K通路其他蛋白表达的关系。结果 p110β在NSCLC的高表达率为41.8%。其表达水平与Ki67计数呈正相关(P=0.040),在腺癌和鳞状细胞癌间、不同性别、年龄、吸烟状况分组间以及不同T分期、N分期、TNM分期和病理学分级间差异均无统计学意义(P>0.05)。p110β的高表达与EGFR突变呈负相关(P=0.022),与PTEN表达缺失呈正相关(P<0.001),与ROS1、野生型EGFR、HER2、ALK和p-Akt(Ser473)的表达均无明显关系(P>0.05)。结论 p110β高表达在NSCLC是一频发事件;与PTEN缺失密切相关,是PTEN缺失肿瘤生存和进展的关键;可导致肿瘤增殖指数升高,但却与磷酸化Akt无关。PIK3CB突变不是p110β高表达的主要原因;各类受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinases,RTKs)异常均未显示导致癌组织p110β表达增高的能力,而且,EGFR突变者p110β的表达反而低于EGFR野生型。

PI3Kp110α在早期营养不良仔鼠海马中的表达及其意义

目的研究早期营养不良仔鼠海马中PI3Kp110α表达量的变化及其意义。方法将怀孕14 d的大鼠分为正常饮食组和半量饮食组,至哺乳期结束后仔鼠均正常饮食。测量仔鼠出生时体质量;胰岛素耐量试验(ITT)评估外周胰岛素敏感性;Morris水迷宫试验测试仔鼠15月龄时学习记忆能力;Western印迹、免疫组化(IHC)法分别检测脑组织PI3Kp110α及其信号下游分子Aβ1~42的表达。结果与对照组相比,实验组出生时体质量偏低(P【0.01);外周胰岛素敏感性降低(P【0.05);学习记忆能力下降(P【0.05);海马PI3Kp110α的表达量降低(P【0.05);脑组织Aβ1~42表达增加但差异无统计学意义(P】0.05)。结论早期营养不良对仔鼠老年期认知功能影响的机制可能与海马PI3Kp110α表达量异常有关。

细粒棘球绦虫PI3K P110亚基酪氨酸激酶区蛋白原核表达及其多克隆抗体制备

目的制备细粒棘球绦虫PI3KP110亚基酪氨酸激酶区（EgPI3KP110RTK）蛋白的多克隆抗体,为进一步研究EgPI3KP110蛋白的功能提供检测抗体。方法将EgPI3KP110RTK（1-352aa）基因序列克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,转化E.coli ROSETTA（DE3）株,IPTG诱导蛋白表达,以GST亲和层析纯化EgPI3K P110RTK蛋白,免疫家兔,收集免疫血清,采用ELISA法测定抗体效价,Western blotting检测所制备抗体与EgPI3KP110RTK蛋白的反应性。结果经0.8mmol/L IPTG诱导,表达出约66ku的EgPI3KP110RTK重组蛋白,制备获得效价在5.12×10^5以上的多克隆抗体,该抗体能够与EgPI3KP110RTK重组蛋白发生特异性反应。结论成功制备获得兔抗EgPI3KP110亚基多克隆抗体,为研究EgPI3K激酶在Eg中的功能和作为药物靶标等研究奠定基础。

PTEN和PI3K/Akt在卵巢浆液性肿瘤中的表达及意义

目的:通过检测卵巢浆液性肿瘤(OST)PTEN、PI3K以及Akt磷酸化,探讨OST的发生机制。方法:应用免疫组织化学法,检测5例卵巢正常上皮(NOT)、10例浆液性囊腺瘤(OSA)、18例浆液性交界性肿瘤(OSBT)、38例浆液性癌(OSC)石蜡包埋组织中PTEN、PI3Kp110α和p-AktSer473蛋白的表达,并结合OSC周围组织浸润、淋巴结转移情况进行统计分析。结果:(1)PTEN蛋白在OSC中的阴性率高于OSBT、OSA和NOT,差异有统计学意义(P<0.05);(2)PTEN蛋白与OSC浸润及淋巴结转移的关系均无统计学意义(P>0.05);(3)PI3Kp110α蛋白表达的阳性率在OSC和OSBT中高于OSA和NOT,差异有统计学意义(P<0.01),p-AktSer473蛋白表达的阳性率在OSC和OSBT中高于OSA和NOT,差异具有统计学意义(P<0.05);(4)PI3Kp110α和p-AktSer473蛋白与OSC浸润及淋巴结转移的关系均无统计学意义(P>0.05);(5)在OSC中,PTEN和PI3Kp110α、PTEN和p-AktSer473蛋白表达间均为负相关(P<0.05),而PI3Kp110α与p-AktSer473蛋白表达间为正相关(P<0.05)。结论:PTEN蛋白表达的缺失伴随PI3K/Akt信号通路过度激活,可能共同参与OST的发生、发展。

p16与PIK3CA、PIK3CB突变在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的:研究在食管鳞癌中p16与PI3Kp110a、p100β的表达情况,并分析HPV感染与PIK3CA、PIK3CB基因突变在食管鳞癌中的作用。方法:在食管鳞癌与正常黏膜中,采用免疫组化法(IHC)检测p16、PI3KpP110a、110β的表达差异;在鳞癌中,分析表达的相关性及与临床特征之间的关系。结果:在食管鳞癌中,p16、PI3Kp110a、p110β的表达高于正常黏膜。p16与食管鳞癌的发病部位、分化程度、淋巴结转移明显相关;PI3Kpll0a、p110β与淋巴结转移相关。PI3Kp110a与p16呈正相关。结论:在食管鳞癌中,p16、PI3Kp110a、p110β蛋白呈高表达,PI3K/Akt信号通路失衡与HPV感染密切相关,联合检测PIK3CA基因和p16更有利于食管鳞癌的优化治疗。

结直肠锯齿状病变及癌变组织中PI3Kp110α、PI3Kp110β的表达及意义

目的探讨PI3Kp110α、PI3Kp110β在结直肠锯齿状病变及其癌变组织中的表达及意义。方法采用免疫组化和Western blot法检测PI3Kp110α、PI3Kp110β在结直肠正常黏膜、管状腺瘤、锯齿状病变及来自管状腺瘤和锯齿状腺瘤癌变组织中的表达,并分析二者表达与临床病理特征的关系。结果 PI3Kp110α、PI3Kp110β在腺癌组、不同级别锯齿状腺瘤组及高级别管状腺瘤组中均呈高表达,且明显高于增生性息肉、低级别管状腺瘤及正常黏膜组织(P<0.05),但组间相比差异无显著性(P>0.05)。锯齿状腺瘤中PI3Kp110α、PI3Kp110β的表达与肿瘤大小有关、肿瘤数目有关(P<0.05)。腺癌组中PI3Kp110α、PI3Kp110β表达与肿瘤分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 PI3Kp110α与PI3Kp110β在锯齿状腺瘤及腺瘤癌变中呈高表达,二者可能是促进腺瘤恶变的危险因素,联合检测PI3Kp110α和PI3Kp110β在结直肠锯齿状腺瘤中的表达有助于判断其恶性潜能。

PI3Kp110β抑制剂对人舌鳞状细胞癌CAL27细胞增殖与凋亡的影响

目的观察不同浓度的选择性PI3Kp110β抑制剂KIN-193对人舌鳞状细胞癌增殖及凋亡的影响。方法 2018年1-7月于武汉大学人民医院中心实验室进行实验。用不同浓度KIN-193作用于CAL27细胞,倒置显微镜观察KIN-193干预后细胞形态变化;TUNEL法检测不同浓度KIN-193作用48h后CAL27细胞的凋亡情况;CCK-8法检测不同时间药物干预后CAL27细胞的存活变化;克隆形成实验检测不同浓度下CAL27细胞的克隆形成能力;EdU法检测不同浓度KIN-193作用48h后CAL27细胞的增殖能力;Western Blot检测不同药物浓度KIN-193作用72 h后CAL27细胞PI3Kp110β蛋白的表达变化情况。结果与对照组(KIN-193为0μmol/L)比较,在倒置显微镜下CAL27细胞形态明显改变,细胞数量明显减少,细胞边界模糊不清,漂浮死亡细胞增多;TUNEL法、CCK-8法、克隆形成实验及EdU实验结果分别表明,CAL27细胞的凋亡呈浓度依赖性增高(F=7. 428,P=0. 000),细胞活力被显著抑制(24 h、48 h、72 h的F/P=6.682/0.001、14.428/0.000、38.549/0.000),CAL-27细胞的克隆形成数量减少(F=75. 141,P=0. 000)及CAL27细胞增殖能力减弱(F=6. 885,=0.000); Western Blot显示PI3Kp110β蛋白表达明显减少(F=4.312,P=0.04)。结论选择性PI3Kp110β抑制剂KIN-193对CAL27细胞具有显著的增殖抑制效果,同时能够促进细胞凋亡。其原理主要与通过抑制PI3K分子的p110β亚型的表达有关。

苦参碱对结直肠肿瘤细胞中PI3Kp110α、PI3Kp110β的表达水平影响及其临床意义

目的探讨苦参碱对结直肠黏膜正常组织、结直肠腺瘤以及原发性结直肠癌组织中PI3Kp110α、PI3Kp110β表达的影响及临床意义。方法回顾性选取2016年8月至2018年12月上海交通大学医学院附属仁济医院宝山分院收集的病理标本,25例正常黏膜组织及40例结直肠腺瘤组织[锯齿状腺瘤(SA)病变组织、管状腺瘤(TA)病变组织(高级别TA、低级别TA)]取自消化内镜中心的电凝切除、黏膜活检标本;15例结直肠癌组织是来源于同期普外科手术切除的结直肠癌病变,进行结直肠癌细胞细胞学培养,给予所有组织标本苦参碱干预治疗,观察其细胞生长变化情况,采用免疫组化方法检测PI3Kp110α、PI3Kp110β的表达。结果在正常黏膜、高级别SA、高级别TA、低级别TA、腺癌中,随着病变程度的加重,PI3Kp110α、PI3Kp110β蛋白表达阳性率增加。PI3Kp110α以及PI3Kp110β在腺癌、高级别SA及高级别TA中的表达阳性率均高于低级别TA及正常黏膜(P<0.05)。苦参碱治疗后,PI3Kp110α、PI3Kp110β的蛋白表达阳性率在各病变组均明显低于治疗前,同样在正常黏膜及低级别病变组织中与腺癌组及高级别病变组织表达阳性率逐渐升高,且差异有统计学意义(P<0.05),且随着病变程度加重,PI3Kp110α、PI3Kp110β蛋白表达增加。结论苦参碱可降低结直肠癌肿瘤患者组织中PI3Kp110α、PI3Kp110β阳性表达率,疗效显著。

PI3Kp110α在卵巢透明细胞癌中的表达及临床病理意义

目的探讨PI3Kp110α在卵巢透明细胞癌(OCCC)中的表达及临床病理意义。方法收集2015年6月至2021年5月于西北妇女儿童医院病理科确诊为OCCC的56例患者的临床病理资料,分析OCCC的苏木精-伊红(HE)染色特征;分析子宫内膜异位症与OCCC预后的关系;分析PI3Kp110α在癌旁卵巢组织和OCCC组织中的表达情况;分析PI3Kp110α阳性率与OCCC临床分期及预后的关系;分析PI3Kp110α阳性率与OCCC病理诊断常用蛋白及PI3K/AKT通路重要蛋白表达的相关性;观察治疗与随访情况。结果在OCCC中,合并子宫内膜异位症患者的死亡率为6.7%(2/30),低于未合并子宫内膜异位症患者的34.6%(9/26)(P<0.05)。PI3Kp110α在瘤旁卵巢组织中,阳性6例(10.7%),阴性50例(89.3%),在OCCC组织中,阳性38例(67.9%),阴性18例(32.1%);癌旁卵巢组织和OCCC组织中的PI3Kp110α阳性率比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。与Ⅰ期相比,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期PI3Kp110α阳性率逐渐增高,不同临床分期的OCCC中PI3Kp110α阳性率比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。PI3Kp110α阳性率与天冬氨酸蛋白酶A(Napsin A)及磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)阳性表达相关(P<0.05),与肝细胞核因子1β(HNF1β)、雌激素受体(ER)、Wilms肿瘤基因1(WT1)及孕激素受体(PR)阳性表达无关(P>0.05)。结论合并子宫内膜异位症的OCCC患者较未合并子宫内膜异位症患者的预后更好;PI3Kp110α在OCCC组织中的阳性率较癌旁卵巢组织明显升高,有望成为诊断OCCC的分子标志物;PI3Kp110α阳性表达OCCC患者的死亡率较高;PI3Kp110α在OCCC中的阳性率与临床分期呈正相关,其可能通过PI3K/AKT途径影响OCCC预后。

P13Kp110α在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨P13Kp110α在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测102例乳腺癌患者中浸润性导管癌及其旁导管原位癌和正常乳腺组织中Ki-67指数、P13Kp110α、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、人表皮生长因子受体2（HER．2）和磷酸酶及张力蛋白同源体（PTEN）的表达。比较乳腺浸润性导管癌、乳腺导管原位癌和正常乳腺组织中P13Kp110α的表达情况。采用相关分析分析浸润性导管癌中P13Kp110α的表达与HER．2、PTEN、p-Akt的表达和Ki-67指数的相关性；分析P13Kp110α的表达与肿瘤分期的相关性。结果正常乳腺组织中，低表达97例（95．1％），高表达5例（4．9％）；导管原位癌组织中，低表达67例（65．7％），高表达35例（34．3％）；浸润性导管癌组织中，低表达14例（13．7％），高表达88例（86．3％）；乳腺正常组织、导管原位癌和浸润性导管癌组织中P13Kp110α的表达差异有统计学意义（P〈0．001）。在浸润性导管癌中，P13Kp110α的表达与HER-2和PTEN的表达均呈负相关（均P〈0．05），但与p-Akt的表达和Ki-67指数无关（均P〉0．05）。HER-2表达与Ki-67指数呈正相关（rs=0．333，P=0．001），但与p-Akt的表达无关（P=0．177）。p-Akt的表达与Ki-67指数呈正相关（rs=0．210，P=0．035）。P13Kp110α的表达与T分期和TNM分期呈均负相关（均P〈0．05），而与N分期和M分期均无关（均P〉0．05）。HER-2的表达与T分期呈正相关（P=0．037），而与N分期、M分期和TNM分期均无关（均P〉0．05）。Ki-67指数、PTEN和p-Akt的表达与T分期、N分期、M分期和TNM分期均无关（均P〉0．05）。结论P13Kp110α的表达与乳腺癌发生、发展密切相关。P13Kp110α的表达与HER-2和PTEN的表达呈负相关，与乳腺癌T分期和TNM分期呈负相关。P13Kp110α高表达在乳腺癌发生中可能为独立的癌变途径，P13Kp110α高表达乳腺癌患者的预后较好。

PI3Kp110beta和前强啡肽在人肝癌组织中的表达

目的观察人肝癌中磷脂酰肌醇激酶-3（PI3K）p110beta和前强啡肽的表达。方法应用半定量逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测10例人中晚期肝癌及其癌旁正常组织中PI3Kp110beta和前强啡肽mRNA基因的相对表达量。结果PI3Kp110beta和前强啡肽在中晚期肝癌中的表达高于癌旁正常组织，差异有统计学意义（90％比10％；80％比20％，P〈0．05）。结论中晚期肝癌中PI3Kp110beta和前强啡肽处于过度表达状态，参与肝癌的发生、发展。

PI3K p110α在宫颈病变中的表达研究

目的研究PI3K p110α蛋白在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法应用ElivisionTMSuper免疫组化法检测40例正常宫颈、31例CINⅠ、33例CINⅡ、35例CINⅢ和41例宫颈癌石蜡标本中PI3K p110α的表达,比较各组间的差别及与患者临床病理特征的关系。结果①PI3K p110α在正常宫颈、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌中的阳性率依次为0.0%、19.4%、57.6%、65.7%、80.5%。②比较正常宫颈与CINⅠ之间(χ2=8.451,P=0.004)及CINⅠ与CINⅡ之间(χ2=9.810,P=0.002),PI3K p110α阳性率差异有统计学意义;CINⅡ组与CINⅢ组之间(χ2=0.476,P=0.490)及CINⅢ与宫颈癌之间(χ2=2.125,P=0.145)比较,随着分期的增加呈上升趋势,但差异无统计学意义。③PI3K p110α在LSIL和HSIL中的阳性率分别是19.4%和61.8%,差异有统计学意义(χ2=15.333,P=0.000),可将其视为宫颈LSIL与HSIL间的辅助鉴别指标。④PI3K p110α蛋白表达与宫颈癌临床分期、组织分化程度及有无淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 PI3K p110α在除正常宫颈组织外的各级宫颈病变组织中均呈阳性表达,抑制其活性可能为宫颈癌的治疗提供新靶点。