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PIAsxα对鼻咽癌细胞系CNE1凋亡的影响及其机制探讨
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作者 李辉 赵哲成 黎可华 《肿瘤药学》 CAS 2015年第5期353-356,共4页
目的探讨PIAsxα对鼻咽癌细胞凋亡和成瘤能力的影响及可能机制。方法采用实时定量PCR,流式细胞术以及裸鼠成瘤实验分析PIAsxα在鼻咽癌组织中的表达情况,PIAsxα对鼻咽癌细胞系CNE1凋亡和cyclin D、CDK表达及其成瘤能力的影响。结果鼻... 目的探讨PIAsxα对鼻咽癌细胞凋亡和成瘤能力的影响及可能机制。方法采用实时定量PCR,流式细胞术以及裸鼠成瘤实验分析PIAsxα在鼻咽癌组织中的表达情况,PIAsxα对鼻咽癌细胞系CNE1凋亡和cyclin D、CDK表达及其成瘤能力的影响。结果鼻咽癌组织中PIAsxαm RNA的表达水平显著低于邻近正常鼻咽组织。过表达PIAsxα的CNE1细胞凋亡率及G2/M期细胞比例均明显增高,cyclin D1、cyclin D3、CDK4、CDK6和CDK8的m RNA表达均显著降低且在裸鼠体内的成瘤能力亦受到抑制。结论 PIAsxα的表达下调可能通过增加cyclin D和CDK的表达,抑制鼻咽癌细胞的凋亡,促进鼻咽癌的发生和发展。 展开更多
关键词 piasxα 鼻咽癌 周期蛋白依赖性激酶
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pCMV-Myc-PIASxβ重组质粒的构建与蛋白表达 被引量:3
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作者 李江 张俊芳 +2 位作者 甄园丽 杨南扬 李晓萌 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期415-418,共4页
目的:通过基因重组方法构建pCMV-Myc-PIASxβ质粒,在真核细胞中高效表达重组蛋白并进行检测。方法:用SalⅠ和NotⅠ将PIASxβ片段从pGADT7载体中酶切后,利用DNA重组技术将其定向插入pCMV-Myc载体中。获得正确重组质粒后,瞬转CHO细胞系,用... 目的:通过基因重组方法构建pCMV-Myc-PIASxβ质粒,在真核细胞中高效表达重组蛋白并进行检测。方法:用SalⅠ和NotⅠ将PIASxβ片段从pGADT7载体中酶切后,利用DNA重组技术将其定向插入pCMV-Myc载体中。获得正确重组质粒后,瞬转CHO细胞系,用Western blotting检测Myc-PIASxβ重组融合蛋白表达。结果:经过酶切,片段回收,连接转化,获得重组质粒。重组pCMV-Myc-PIASxβ克隆通过酶切和测序鉴定其正确性。EcoRⅠ酶切鉴定,pCMV-Myc-PIASxβ为一条大小5 641 bp的条带;XbaⅠ酶切鉴定,pCMV-Myc-PIASXβ为2条大小分别为3 291和2 349 bp的条带,符合预计大小。Western blotting检测证实,在相对分子质量68 000处(PIASxβ融合蛋白)有特异的蛋白表达条带,与重组质粒相符。结论:成功构建了pCMV-Myc-PIASxβ重组质粒,为深入研究PIAS家族的功能奠定良好的基础。 展开更多
关键词 piasxβ pCMV—Myc载体 重组质粒 基因表达
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从小鼠胚胎干细胞文库中筛选PIASx相互作用蛋白
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作者 郑英 贾筱琴 +3 位作者 张露萍 王海燕 孙红亚 梁虹 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第20期1-4,共4页
目的应用酵母双杂交系统,从小鼠胚胎干细胞cDNA文库中筛选与PIASx(protein inhibitor ofactivated STAT x,PIASx)相互作用的蛋白。通过对其相互作用蛋白的筛选和研究,探讨PIASx在干细胞分化中的作用机制。方法以pGBKT7-PIASx为诱饵质粒... 目的应用酵母双杂交系统,从小鼠胚胎干细胞cDNA文库中筛选与PIASx(protein inhibitor ofactivated STAT x,PIASx)相互作用的蛋白。通过对其相互作用蛋白的筛选和研究,探讨PIASx在干细胞分化中的作用机制。方法以pGBKT7-PIASx为诱饵质粒,从小鼠胚胎干细胞cDNA文库中筛选出与PIASx相互作用的阳性克隆,对验证后的阳性克隆进行测序及生物信息学分析,进一步采用直接酵母双杂交进行相互作用验证。结果经过筛选、测序、同源性分析及直接酵母双杂交验证,发现了6种与PIASx相互作用的蛋白。结论应用酵母双杂交系统,共筛选得到了6种不同的基因,其编码蛋白与PIASx相互作用,可能与小鼠胚胎干细胞的增殖与分化相关。对PIASx相互作用蛋白的筛选有助于揭示PIASx在胚胎干细胞中的作用机制。 展开更多
关键词 piasx 酵母双杂交 小鼠胚胎干细胞cDNA文库
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PIASx结构与功能的研究进展
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作者 王海燕 张露萍 郑英 《生命科学》 CSCD 北大核心 2011年第10期1014-1021,共8页
PIAS(protein inhibitor of activated STAT)蛋白家族能够与许多蛋白质发生相互作用,其中大部分为转录因子。PIASx是4个组成成员中的一种,其包括两个亚型。PIASx通过与不同种类的蛋白相互作用,影响它们的活性和功能。PIASx蛋白的调控机... PIAS(protein inhibitor of activated STAT)蛋白家族能够与许多蛋白质发生相互作用,其中大部分为转录因子。PIASx是4个组成成员中的一种,其包括两个亚型。PIASx通过与不同种类的蛋白相互作用,影响它们的活性和功能。PIASx蛋白的调控机制主要有两种:一种是通过其自身所具有的SUMO(smallubiquitin-related modifiers)E3连接酶活性,促进对一些转录因子、转录辅因子的SUMO化修饰,从而调控它们的转录活性;另一种是作为构架蛋白,通过与雄激素受体的作用参与雄激素介导的基因转录调节。PIAS蛋白的上述两种作用机制并不是完全互相排斥的,这体现了PIASx蛋白功能的特异性和复杂性。 展开更多
关键词 piasx SUMO SUMOE3连接酶 雄激素调节因子 SAP
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