PICK-1蛋白在多种肿瘤中的表达及在乳腺癌的临床意义

目的:主要探讨乳腺浸润性癌组织中PICK-1蛋白的表达与该肿瘤临床病理、其他生物学指标以及患者预后的相关性。方法:采用组织芯片免疫组织化学染色方法检测496例乳腺浸润性癌组织中PICK-1、ER、PR、HER2/neu、TlMP-1等蛋白的表达情况及表达间的相关性,以及PICK-1蛋白在不同分子亚型乳腺癌中的表达情况及对预后的影响。结果:PICK-1蛋白在乳腺癌组织中的表达率为27.22%,肿瘤细胞中PICK-1的高表达与淋巴结受累和高组织学分级相关(P均<0.001),且与HER2/neu表达相关(P<0.001),而与雌孕激素受体状态无关(P>0.05),同时该蛋白的表达与TIMP-1表达呈正相关(P=0.002)。PICK-1蛋白表达与患者总生存期缩短相关,分层分析显示PICK-1仅对淋巴结阳性患者的预后有影响,同时对HER2/neu不同状态患者的影响不同,其中对三阴性乳腺癌(HR-HER-)预后影响最大。单因素分析显示乳腺肿瘤直径、组织学分级、淋巴结状态、HR状态、HER2/neu表达、TIMP-1表达、肿瘤细胞表达PICK-1均是有意义的预后指标;但多因素分析显示仅肿瘤直径、组织学分级、淋巴结状态、HER2/neu袁达和PICK-1表达是独立的预后因素。结论:PICK-1蛋白与浸润性乳腺癌的侵袭和转移特性相关,同时有可能作为患者预后不良的指标,尤其是对于三阴性乳腺癌的预后意义更为显著。

PICK1:一个功能多样的药靶蛋白

蛋白质是生命功能的执行者.生命体中某些关键蛋白的功能异常往往是导致疾病发生的根本原因.这些疾病相关蛋白极有可能成为药物靶点,为新药研发和疾病治疗提供重要线索.PICK1蛋白(protein interacting with Cαkinase1)结合能力广泛、功能多样以及在多种重要疾病(如:癌症、精神分裂症、疼痛、帕金森综合症等)的发生发展过程中发挥潜在的作用,使其成为一个可能的药靶蛋白.PICK1与绝大多数配体蛋白的相互作用是通过其PDZ结构域与配体C末端区域的结合介导的,使PICK1的PDZ结构域成为一个潜在的药物靶点.因此,可以利用生物小分子物质特异性地结合PICK1的PDZ结构域,干扰或阻断PICK1与配体蛋白的天然相互作用,最终达到治疗相关疾病的目的.

高脂饮食大鼠肝脏脂肪性变及NPC1L1基因表达的变化

目的:探讨NPC1L1及其胆固醇代谢相关基因在高脂饮食诱导肝脏脂肪性变中的可能作用.方法:实验大鼠分为普通饮食组及高脂饮食组,饲喂8周后取肝脏组织,酶法测定肝脏组织中总胆固醇(TC)、磷脂、高密度脂蛋白(HDL)、甘油三酯(TG)含量,RT-PCR检测肝脏组织中NPC1L1,SREBP-1c,FAS及ABCA1基因的表达变化,并在光镜及电镜下观察肝脏病理变化.结果:高脂饮食大鼠肝脏组织TC(67.6±3.1mg/gvs31.8±2.6 mg/g,P<0.01),TG(29.1±2.3 mg/gvs12.5±1.6 mg/g,P<0.01)及磷脂(23.8±2.6 mg/gvs19.8±2.2 mg/g,P<0.05)均较正常饮食大鼠增加.高脂饮食喂养组大鼠肝脏组织中胆固醇代谢相关基因NPC1L1(3.91±0.26,P<0.01),SREBP21c(2.84±0.23,P<0.01)、FASmRNA(6.45±0.25,P<0.01)表达水平显著高于正常饮食组,而ABCA1mRNA(0.56±0.18,P<0.05)表达较正常饮食组降低.结论:肝脏组织NPC1L1表达增加及脂肪代谢相关基因SREBP-1c,FAS。

Niemann-Pick C1-Like 1表达缺陷缓解肝X受体激动剂诱导的小鼠肝脏脂肪性变

目的探讨Niemann-Pick C1-Like 1在肝X受体激动剂诱导的肝脏脂肪性变中的作用。方法给C57BL/6小鼠和Niemann-Pick C1-Like 1基因敲除小鼠喂食0.015%胆固醇饮食21天,胃饲溶剂或肝X受体激动剂T0901317一周后,收集小鼠肝脏,称重;抽提肝脏脂质并用酶法检测脂质含量;用实时定量聚合酶链反应法检测肝脏表达与脂肪合成相关基因固醇调节元件结合蛋白1c、脂肪酸合成酶和硬脂酰CoA去饱和酶1的mRNA水平。结果在胃饲T0901317一周后,C57BL/6小鼠肝脏由1.1±0.1g增大到2.8±0.3g,肝脏甘油三酯含量由34.2±18.1mg/g增至232.2±67.9mg/g,固醇调节元件结合蛋白1c、脂肪酸合成酶和硬脂酰CoA去饱和酶1mRNA水平在肝脏的表达也显著增高;而Niemann-Pick C1-Like 1基因敲除小鼠肝脏由0.9±0.1g增大到1.5±0.1g,肝脏甘油三酯含量由43.7±26.5mg/g增至104.9±62.1mg/g,脂肪酸合成酶和硬脂酰CoA去饱和酶1mRNA水平在肝脏的表达也显著增高。但在T0901317诱导下,Niemann-Pick C1-Like 1基因敲除小鼠肝脏脂肪酸合成酶mRNA水平仍比C57BL/6小鼠低63%。结论Niemann-Pick C1-Like 1表达缺陷降低肝X受体激动剂诱导的肝脏固醇调节元件结合蛋白1c和脂肪酸合成酶的表达,缓解小鼠肝脏脂肪性变。

胆固醇转运蛋白NPC1L1的研究进展

NPC1L1是近年来人们研究高脂血症的重点内容,该蛋白已被证实在胆固醇的肠道吸收和胆汁分泌中发挥了关键作用。NPC1L1调节体内胆固醇的生物合成,是维持生物体胆固醇动态平衡的重要因素,同时也是新型降脂药物依泽替米贝的作用靶点。

血管紧张素Ⅱ通过下调巨噬细胞C型1类尼曼-匹克蛋白的表达而减少细胞胆固醇流出

目的以THP-1源性巨噬细胞为研究对象,探讨血管紧张素Ⅱ对THP-1源性巨噬细胞C型1类尼曼-匹克蛋白表达及胆固醇流出的影响。方法体外培养的人THP-1单核细胞经佛波酯诱导48 h,使之分化为巨噬细胞,采用不同浓度的AngⅡ进行处理,逆转录聚合酶链反应和Western Blotting蛋白印记技术分别检测血管紧张素Ⅱ对C型1类尼曼-匹克蛋白mRNA与蛋白表达的影响,应用液体闪烁计数仪检测胆固醇流出的变化。结果与对照组相比,血管紧张素Ⅱ能下调THP-1源性巨噬细胞C型1类尼曼-匹克蛋白mRNA与蛋白质的表达,减少巨噬细胞内胆固醇流出(P<0.05),并呈浓度依赖性。结论血管紧张素Ⅱ可能通过抑制THP-1巨噬细胞C型1类尼曼-匹克蛋白的表达,减少巨噬细胞内胆固醇流出,进而促进动脉粥样硬化的发生发展。

肠道胆固醇转运关键蛋白NPC1L1的研究进展

Niemann-Pick C1Like1(NPC1L1)是肠道吸收胆固醇的关键转运蛋白.NPC1L1存在于小肠上皮细胞刷状缘膜上.影响着胆固醇吸收和血浆低密度脂蛋白水平,是维持体内胆固醇代谢平衡的重要因素.同时也是新型降脂药物依泽替米贝的作用靶点.

血管紧张素-(1-7)与血管紧张素Ⅱ对THP-1巨噬细胞NPC1表达及胆固醇流出的影响

目的:研究血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对C型1类尼曼-匹克蛋白(NPC1)表达及胆固醇流出率的影响,探讨Ang-(1-7)对AngⅡ在胆固醇逆转运方面的拮抗作用。方法:体外培养的人THP-1单核细胞经佛波酯(PMA)诱导48 h,使之分化为巨噬细胞,随机分为对照组、AngⅡ组、Ang-(1-7)组、AngⅡ+Ang-(1-7)组和AngⅡ+Ang-(1-7)+Ang-(1-7)受体阻断剂A-779组。运用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western blotting蛋白印记技术分别检测NPC1 mRNA与蛋白的表达水平,应用液体闪烁计数仪检测胆固醇流出的变化。结果:与对照组相比,AngⅡ能引起THP-1源性巨噬细胞NPC1 mRNA与蛋白质表达的下调及胆固醇流出的减少(P<0.05);Ang-(1-7)使NPC1蛋白和mRNA表达升高,胆固醇流出增多(P<0.05);混合刺激组中,不同浓度的Ang-(1-7)(100-10 000 nmol/L)呈剂量依赖性地减轻AngⅡ对THP-1源性巨噬细胞NPC1蛋白和mRNA表达的抑制作用,促进细胞胆固醇流出,与AngⅡ组相比差异显著(P<0.05);加入A-779组与AngⅡ组比较无显著差异(P>0.05)。结论:Ang-(1-7)通过其特异性受体Mas拮抗AngⅡ抑制的THP-1巨噬细胞NPC1的表达,并呈浓度依赖性,进而促进巨噬细胞内胆固醇流出,抑制动脉粥样硬化的发生发展。

采摘茎尖次数对叶菜型甘薯品种百薯1号薯块产量及品质的影响

2007年夏季,在一般大田常规栽培条件下,通过分期采摘茎尖的方法,对叶菜型甘薯品种百薯1号的薯块产量和品质进行了研究。结果表明:⑴随着采摘茎尖次数的增加,薯块产量呈直线函数降低,其曲线方程为Y=-2009.6X+35776(R2=0.9417﹡﹡)。⑵不同品质性状受采摘茎尖次数的影响存在明显差异,可溶性糖变异最大,淀粉、蛋白质和烘干率变异较大,脂肪、纤维和维生素C变异较小,灰分变异最小。⑶采摘茎尖3次时,烘干率、灰分、脂肪、蛋白质、淀粉和纤维含量均居首位,可溶性糖含量居第二位,维生素C含量居第四位,薯块的综合品质达到最优,这时薯块实际产量为29527.5kg/hm2,占对照薯块实际产量的84.6%,可以作为最佳采摘次数。

1-MCP对番茄贮后生理效应的影响

为了探讨1-MCP对番茄采后保鲜时间的影响,对番茄采后保鲜提供依据与技术支撑,以粉红期番茄品种印第安为材料,研究了常温(20℃)条件下0.5、1.0μL/L 1-MCP处理对番茄贮藏生理特性的影响。结果表明,1-MCP处理可明显抑制贮藏过程中果实乙烯释放,延迟乙烯高峰出现,并有利于番茄果实硬度保持,延缓果实可溶性固形物上升和可滴定酸含量下降,减少果实腐烂,对番茄保鲜效果较好。

Niemann-Pick C1 Like 1研究新进展

Niemann-Pick C1 Like 1(NPC1L1)是肠道胆固醇吸收的关键蛋白,也是胆固醇吸收抑制剂依泽替米贝的分子作用靶点。NPC1L1的表达受一些核因子受体调控。敲除apoE-/-小鼠NPC1L1基因能显著抑制动脉粥样硬化的发生和发展,为动脉粥样硬化和冠状动脉性心脏病提供了新的治疗靶点。

广西汉族人群NPC1L1基因1735C>G多态性分布特征及与血脂、肥胖的关系

目的分析NPC1L1基因1 735C>G多态性分布特征及其与血脂、肥胖的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,对409例汉族人群进行NPC1L1基因多态性分型,比较不同基因型间血脂水平、BMI的差异。结果 CC,CG,GG基因型的分布频率分别为39.40%、46.00%、14.60%;等位基因C和G频率分别为62.35%和37.65%。3种基因型组间的LDL-C、ApoB水平和BMI的差异有统计学意义(P<0.05),G等位基因携带者(GC/GG基因型)较CC型有更高的LDL-C、ApoB水平(P<0.05)。血脂谱和BMI与多种环境因素相关。结论 NPC1L1基因1 735C>G多态性与血脂水平和BMI相关,G等位基因可能是高LDL-C水平和肥胖的一个危险因素。

新疆维吾尔族ABCG8和NPC1L1基因多态性与胆囊结石病的关系

目的:研究新疆维吾尔族ATP结合盒G8(ABCG8)基因和尼曼-匹克C1样1蛋白(NPC1L1)基因单核苷酸多态性与胆囊结石病的关系。方法:采集43例新疆维吾尔族胆囊结石病人和96例无胆结石对照病人的外周静脉血,提取基因组DNA。用实时定量PCR的等位基因分型法确定ABCG8基因T400K、Y54C、D19H和NPC1L1基因-762 T>C、1679 C>G的基因型。结果:在所有病人中,NPC1L1基因1679 G在胆石组与对照组中的分布无统计学差异(32.6%比26.6%,P=0.306);但在女性胆石组中,1679 G频率明显高于对照组(36.7%比19.4%,P<0.05)。NPC1L1基因-762 T>C位点以及ABCG8基因3个位点在两组间的分布无差异。结论:携带NPC1L1基因1679 G等位基因可能与新疆维吾尔族女性胆石病发病存在相关性。

NPC1L1基因-762T>C多态性与启动子活性的研究

目的:研究尼曼匹克C1样1(Niemann Pick C1 like 1,NPC1L1)基因启动子-762T>C多态性的活性差异及药物对其的调节作用。方法:分别构建含NPC1L1基因-762T>C多态性的T/C等位基因启动子荧光酶报告基因,测定启动子活性以及不同药物处理后启动子活性的改变。结果:含T或C等位基因的NPC1L1基因启动子活性无统计学差异(P>0.05)。外源性胆固醇和依泽麦布均在高浓度抑制两种启动子活性,辛伐他汀则增强两种启动子活性(P<0.05),但两种基因型启动子之间对药物依泽麦布和辛伐他汀的反应无统计学差异(P>0.05)。结论:胆固醇和依泽麦布能抑制NPC1L1转录活性活性,辛伐他汀则增强NPC1L1转录活性,而-762T>C多态性不影响启动子活性及药物反应。

尼曼-匹克C1型类似蛋白1介导依泽替米贝对RAW264.7细胞脂质蓄积的抑制作用

目的观察肠道胆固醇吸收抑制剂依泽替米贝(ezetimibe)对RAW264.7细胞源性荷脂细胞脂质蓄积的影响并对其机制进行初步探讨。方法采用油红O染色、高效液相色谱法检测细胞内脂滴数量和细胞内脂质含量,Western blot对NPC1L1(Niemann-Pick type C1Like-1)进行定性和半定量检测。结果RAW264.7细胞中有NPC1L1蛋白表达。不同浓度(0、0.003、0.01和0.03mol.L-1)依泽替米贝预先孵育RAW264.7细胞24h或最佳浓度(0.03mol.L-1)预先孵育不同时间(0、6、12和24h)后,换50mg.L-1oxLDL继续孵育24h,结果显示不同浓度ezetimibe预先孵育后,细胞内脂滴数量与面积随着浓度的增加而逐渐减少;Ezetimibe预先孵育可减少细胞内脂质蓄积,并呈浓度和时间依赖性。其中0.03mol.L-1ezetimibe预先孵育24h组作用最明显,CE百分比较oxLDL单独孵育组减少了约47%±0.1%。结论小鼠源性巨噬细胞RAW264.7中存在NPC1L1蛋白表达;依泽替米贝能够减少RAW264.7细胞中NPC1L1蛋白表达;依泽替米贝抑制RAW264.7细胞中脂质蓄积。

不同采制时间对‘白叶1号’紫笋茶品质的影响

研究了白叶1号茶树品种的不同采制时间对长兴紫笋茶品质的影响。结果表明：春季随着开采时间的延续,白叶1号加工的紫笋茶外形和叶底质量有下降趋势,但在开采约1周之后至结束约1周之前期间滋味、香气和汤色均较佳;水浸出物和咖啡碱含量比较稳定,茶多酚的量呈上升趋势,氨基酸含量表现为下降变化,开采1~2周的原料和产品的质量均比较好。

挑拔疗法联合眩晕1号方加减治疗高血压病合并颈椎病的疗效观察

目的观察挑拔疗法联合眩晕1号方加减治疗高血压病合并颈椎病的疗效。方法选取山东中医药大学第二附属医院门诊及病房自2018年9月—2020年5月就诊的高血压合并颈椎病患者90例,随机分成3组,每组30例,常规组给予口服颈复康颗粒和苯磺酸氨氯地平片治疗,中药组在常规组的基础上给予眩晕1号方加减治疗,联合组在中药组基础上加用挑拔疗法治疗。3组均以1周为1个疗程,3个疗程后观察比较3组患者治疗前后的临床疗效及症状改善、颈椎活动度评分、视觉模拟评分法(VAS)、挑络疼痛量表,并观察有无不良反应。结果联合组临床疗效总有效率优于中药组和常规组;联合组颈椎活动度评分、VAS评分、挑络疼痛量表评分均优于另外两组(P<0.05),中药组颈椎活动度评分、VAS评分、挑络疼痛量表评分优于常规组(P<0.05),3组未发生明显不良反应。结论眩晕1号方在治疗高血压合并颈椎病时可有效改善患者的颈椎功能,降低患者的血压水平;加用挑拔疗法后起效更迅速,作用更全面,且可减少不良事件的发生。

降脂1号对高脂血症大鼠小肠和Caco-2细胞NPC1L1及ABCG5表达的影响

目的:观察降脂1号(JZ1)对尼曼-匹克C1型样蛋白1(NPC1L1)和三磷酸腺苷结合盒转运体G5(ABCG5)表达的影响,初步探讨其降脂机制。方法:雄性,SD大鼠48只,随机选取8只大鼠为正常对照组,其余40只大鼠灌胃高脂乳剂制备高脂血症大鼠模型,造模2周后随机分为模型组(等量0.9氯化钠液),每日灌胃给予降脂1号低、中、高剂量组(0.37、1.10、3.30 g/kg),阳性药组(阿托伐他汀2.1 mg/kg),持续6周;给药结束检测TC、TG、LDL-C、HDL-C水平,免疫组化法测定各组大鼠小肠组织中NPC1L1、ABCG5蛋白的表达;体外培养Caco-2细胞,分为正常对照组,模型组,阳性药组(依折麦布50μmoL/L),降脂1号组(1.2 mg/mL)。药物孵育24 h后,采用RT-PCR法检测各组NPC1L1、ABCG5 mRNA的表达水平。结果:降脂1号各剂量组大鼠TC、LDL-C水平均显著低于模型组(P<0.05,P<0.01);免疫组化法检测结果显示,与模型组比较,各给药组NPC1L1蛋白表达水平显著降低、ABCG5蛋白表达水平显著升高,其中降脂1号高剂量组效果最为显著(P<0.01);Caco-2细胞的RT-PCR结果显示,与模型组比较,降脂1号组NPC1L1 mRNA的表达水平显著降低、ABCG5 mRNA的表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:降脂1号可降低高脂血症大鼠体内胆固醇水平,可能与该药下调NPC1L1、上调ABCG5表达有关。

肝过表达hNPC1L1促进脂质过氧化

利用体细胞核移植技术将构建的肝过表达h NPC1L1的小型猪胎儿成纤维细胞作为核供体细胞,构建了肝过表达h NPC1L1转基因巴马小型猪,PCR和RT-PCR鉴定表明h NPC1L1特异性地表达于肝组织。对转基因巴马小型猪进行了初步研究,脂质过氧化标记物丙二醛(MDA)检测表明:转基因猪MDA含量(7.51±0.09)nmol·m L-1显著高于非转基因猪(3.56±0.16)nmol·m L-1(P<0.001),说明肝组织发生了严重的脂质过氧化。超氧化物歧化酶(SOD)活性检测表明:SOD活性为(131±4.61)U·mg-1显著低于非转基因猪[(229.2±4.39)U·mg-1](P<0.001),说明肝脏清除自由基和抗氧化能力大大下降。试验揭示出在肝脏过表达h NPC1L1导致严重的脂质过氧化,表明NPC1L1在脂代谢紊乱和肝脏疾病中扮演着重要的角色,有望成为肝脏疾病治疗新的靶标。

姜黄素在预防高脂饮食小鼠胆囊胆固醇性结石中的作用

目的研究姜黄素与高脂饮食小鼠胆囊胆固醇性结石关系及可能参与调控过程的因子。方法将C57BL6小鼠50只随机分为5组,其中一组予普通饲料,其余四组予高脂饮食饲料,同时灌喂不同剂量姜黄素[0、200、500、1 000 mg/(kg·d)],共4周。计算小鼠胆囊结石成石率,收集小鼠血液、胆囊胆汁、胆囊、肝脏以及小肠。计算胆囊容积,称量肝脏质量,检测血液及胆汁胆固醇、甘油三酯等生化指标。用Realtime PCR及Western blotting方法分别检测小鼠小肠上皮NPC1L1及SREBP2 m RNA及蛋白表达。结果姜黄素能够降低小鼠胆囊结石的发生,大剂量姜黄素可降低胆囊结石发生率达60%,同时降低肝脏脂肪变性程度,降低小鼠血液胆固醇饱和度。同时,姜黄素可以抑制高脂饮食所致的NPC1L1 m RNA表达上调[(2.65±0.04)vs(2.06±0.07),(1.69±0.06),(1.33±0.05),P<0.01],且呈现剂量依赖关系,降低高脂饮食所致的NPC1L1蛋白高表达。姜黄素还可以抑制高脂饮食所致的SREBP2 m RNA表达上调[(1.34±0.08)vs(1.39±0.03),(1.19±0.01),(1.06±0.03),P<0.05],且呈现剂量依赖关系,降低高脂饮食所致的SREBP2蛋白表达上调。结论姜黄素能够降低高脂饮食小鼠胆囊结石的形成,NPC1L1和SREBP2可能参与了这个过程。