LncRNA PICSAR敲低对卵巢癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其作用机制

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)PICSAR在卵巢癌中的表达,探究LncRNA PICSAR对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响以及其可能的作用机制。方法使用荧光定量PCR法检测卵巢癌组织和细胞系A2780、OVCAR-3、HO-8910以及正常卵巢组织和细胞系IOSE386中LncRNA PICSAR的表达水平。将LncRNA PICSAR表达最高的卵巢癌细胞系分为对照组和实验组,通过脂质体转染技术分别转染阴性对照小干扰RNA(siRNA-NC)或PICSAR小干扰RNA(siRNA-PICSAR)。细胞计数实验(CCK-8)、克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验以及流式细胞术分别分析LncRNA PICSAR敲低对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。Western blot法测定各组细胞的凋亡蛋白Bcl-2、Bax和自噬蛋白LC3B、ATG7、Beclin-1的表达水平。使用雷帕霉素和羟氯喹分别作为自噬激活剂和抑制剂处理卵巢癌细胞,并通过Western blot实验检测细胞凋亡水平。结果与正常卵巢组织相比,卵巢癌组织中LncRNA PICSAR表达水平升高。与IOSE386细胞系比较,卵巢癌细胞系A2780、OVCAR-3、HO-8910中LncRNA PICSAR表达水平均升高。与si-NC组比较,si-PICSAR组卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力均降低,细胞凋亡率增高。si-PICSAR组卵巢癌细胞的自噬水平较si-NC组降低,siRNA-PICSAR转染后,用雷帕霉素激活自噬降低了细胞凋亡水平,而用羟氯喹抑制自噬促进了细胞凋亡。结论LncRNA PICSAR在卵巢癌组织和细胞系中高表达,LncRNA PICSAR敲低能够抑制卵巢癌细胞的恶性生物学行为。敲低LncRNA PICSAR可能是通过调节自噬促进卵巢癌细胞凋亡。

绞股蓝提取物通过调控lncRNA PICSAR对IL-1β诱导软骨细胞损伤的保护作用及机制研究

目的探讨绞股蓝提取物对白介素1β(IL-1β)诱导软骨细胞损伤的作用及分子机制。方法2020年10月—2021年4月于湖北省恩施土家族苗族自治州中心医院进行实验,将关节软骨细胞随机分为对照(NC)组、IL-1β组及绞股蓝提取物低、中、高剂量组、IL-1β+si-con组、IL-1β+si-lncRNA PICSAR组、pcDNA-con+高剂量组、pcDNA-lncRNA PICSAR+高剂量组,分别对其进行干预水平;用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹(Western-blot)法检测裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleave-caspase-3)蛋白表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测lncRNA PICSAR表达水平。结果与NC组比较,IL-1β组细胞活力及SOD、CAT活性降低,凋亡率升高,Cleave-caspase-3表达水平、MDA水平、lncRNA PICSAR表达水平升高(P<0.05)。与IL-1β组比较,绞股蓝提取物低、中、高剂量组,软骨细胞活力及SOD、CAT活性依次升高(F/P=119.735/0.000、5.289/0.002、334.948/0.000),凋亡率、Cleave-caspase-3表达水平、MDA水平、lncRNA PICSAR表达水平依次降低(F/P=430.551/0.000、137.513/0.000、383.769/0.000、254.805/0.000)。与IL-1β+si-con组比较,IL-1β+lncRNA PICSAR组软骨细胞活力升高,Cleave-caspase-3表达水平降低,细胞凋亡率降低,MDA水平降低,SOD和CAT活性升高(t/P=18.317/0.000、14.884/0.000、27.691/0.000、29.684/0.000、25.008/0.000、28.737/0.000)。与pcDNA-con+高剂量组比较,pcDNA-lncRNA PICSAR+高剂量组lncRNA PICSAR表达水平升高,软骨细胞活力降低,Cleave-caspase-3表达水平升高,细胞凋亡率升高,MDA水平升高,SOD和CAT活性降低(t/P=13.349/0.000、14.969/0.000、27.871/0.000、20.234/0.000、24.811/0.000、23.971/0.000)。结论绞股蓝提取物通过下调lncRNA PICSAR抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡和氧化应激,减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤。