Pik3ip1通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路促进牛MDSCs分化

PI3K相互作用蛋白1(Pik3ip1)为PI3K/AKT/mTOR信号通路负调控因子,其对牛MDSCs(Muscle derived satellite cells,MDSCs)分化研究较少。采用Western blot及免疫荧光,在牛MDSCs分化过程中检测Pik3ip1表达。构建Pik3ip1基因过表达及抑制载体,研究Pik3ip1对牛MDSCs分化及PI3K/AKT/mTOR信号通路活性的影响。结果表明,在牛MDSCs分化中Pik3ip1表达量逐渐升高;激活Pik3ip1表达后,细胞分化程度升高;抑制Pik3ip1表达则出现相反现象。Co-IP结果表明,在牛MDSCs分化过程中Pik3ip1与p110α相互作用。激活Pik3ip1抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路活性。相反在抑制Pik3ip1表达后,PI3K/AKT/mTOR信号通路活性增强。综上所述,Pik3ip1通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路促进牛MDSCs分化。

老年胃癌患者幽门螺旋杆菌感染与血清BEX2、APOC1、PIK3IP1表达的相关性

目的探讨老年胃癌患者幽门螺旋杆菌(Hp)感染与血清脑表达的X连锁基因2(BEX2)、载脂蛋白C1(APOC1)、磷脂酰肌醇3激酶相互作用蛋白1(PIK3IP1)表达的相关性。方法前瞻性选取2022年3月至2023年1月复旦大学附属中山医院青浦分院收治的老年胃癌患者86例,作为胃癌组,另选取同期在同院行胃镜检查的非胃癌者80例作为对照组。对比胃癌和非胃癌患者血清中BEX2、APOC1和PIK3IP1的mRNA水平及Hp感染U值,Hp不同感染程患者与未感染患者血清BEX2、APOC1、PIK3IP1的mRNA表达水平,不同临床病理特征患者血清BEX2、APOC1、PIK3IP1的mRNA表达水平,应用Pearson相关性分析BEX2、APOC1和PIK3IP1 mRNA水平与Hp感染U值的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清中BEX2、APOC1和PIK3IP1 mRNA表达水平对老年胃癌患者Hp感染诊断价值。结果胃癌患者血清中BEX2、APOC1 mRNA水平及Hp感染U值均明显高于对照组,胃癌患者血清中PIK3IP1 mRNA水平明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。HpⅠ级、HpⅡ级、HpⅢ级感染患者中BEX2、APOC1 mRNA水平均明显高于Hp未感染的患者,HpⅠ级、HpⅡ级、HpⅢ级感染患者中PIK3IP1 mRNA水平明显低于Hp未感染的患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。老年胃癌患者血清中BEX2、APOC1和PIK3IP1 mRNA水平与TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤直径无关(P>0.05);老年胃癌患者血清中BEX2、APOC1 mRNA水平与Hp感染U值呈正相关(r=0.425、0.347,P<0.05),PIK3IP1 mRNA水平与Hp感染U值呈负相关(r=-0.323,P=0.002);3者联合检测诊断老年胃癌患者Hp感染的ROC曲线下面积AUC值明显优于BEX2、APOC1和PIK3IP1 mRNA 3者单独检测(P<0.05)。结论老年胃癌患者血清中BEX2和APOC1 mRNA表达升高,PIK3IP1 mRNA表达降低,与胃癌的TNM分期、分化程度、淋巴结转移及Hp的感染程度相关,3者联合检测BEX2、APOC1和PIK3IP1 mRNA对老年胃癌患者Hp感染具有一定的诊断效能。

小鼠抗人磷脂酰肌醇3激酶相互作用蛋白1单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备鼠抗人磷脂酰肌醇3激酶相互作用蛋白1(PIK3IP1)的单克隆抗体(mAb),探讨PIK3IP1蛋白的结构和功能。方法:利用重组蛋白GST-PIK3IP162-168为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合,通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗人PIK3IP1蛋白mAb的杂交瘤细胞株,通过ELISA,Westernblot和免疫荧光技术等方法对其特性进行鉴定。结果:成功地建立了1株稳定分泌抗PIK3IP1蛋白的mAb杂交瘤细胞株,命名为5C6,其免疫球蛋白亚类为IgG1。ELISA检测的腹水效价可达1:107。5C6mAb与重组GST-PIK3IP162-168蛋白有较强的特异性反应,而与大肠杆菌裂解液以及谷胱苷肽2S转移酶(GST)没有交叉反应。同时,5C6mAb也能特异性地结合真核细胞超表达的全长PIK3IP1蛋白和变异体PIK3IP1-v1,但检测不到内源性的PIK3IP1蛋白。共聚焦免疫荧光显微镜结果显示PIK3IP1和PIK3IP1-v1定位于胞质,在胞质中呈现不均一的斑点状分布。结论:获得了效价高、特异性好的PIK3IP1蛋白的mAb,为进一步研究PIK3IP1的生物学功能提供了有用的工具。