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绵羊PIK3R3基因克隆、生物信息学及组织表达分析
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作者 于梦琪 王雷 +2 位作者 刘猛 柳楠 贺建宁 《中国畜牧杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期111-116,共6页
实验旨在克隆绵羊PIK3R3基因,并对其进行生物信息学和组织表达分析。以敖汉细毛羊为实验对象,利用PCR技术克隆绵羊PIK3R3基因,利用生物信息学软件分析PIK3R3蛋白的结构和功能,并用实时荧光定量PCR技术检测PIK3R3基因mRNA在绵羊不同器官... 实验旨在克隆绵羊PIK3R3基因,并对其进行生物信息学和组织表达分析。以敖汉细毛羊为实验对象,利用PCR技术克隆绵羊PIK3R3基因,利用生物信息学软件分析PIK3R3蛋白的结构和功能,并用实时荧光定量PCR技术检测PIK3R3基因mRNA在绵羊不同器官中的表达水平。结果表明:绵羊PIK3R3基因核苷酸序列与山羊的同源性较高,达到99.9%。PIK3R3基因编码蛋白是一种结构较不稳定、等电点为5.75的亲水性蛋白,由461个氨基酸组成;PIK3R3蛋白的二级结构主要由α-螺旋构成,主要存在于细胞质;三级结构与二级结构预测一致;没有信号肽,没有跨膜结构域;PIK3R3基因mRNA在绵羊多个器官中均有表达,其中在腹部皮肤中的表达量显著高于其他器官,肩部皮肤次之,说明PIK3R3基因可能与皮肤的生长发育有重大联系。本实验对绵羊PIK3R3蛋白的功能进行了基础研究,可为探究绵羊PIK3R3基因在皮肤生长发育过程中的调控作用提供参考。 展开更多
关键词 绵羊 pik3r3基因 克隆 生物信息学分析
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c-Myc调控PIK3R3抑制黑色素瘤B16-F10细胞的迁移和侵袭 被引量:6
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作者 杨镓宁 邓菲 潘宁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期66-71,共6页
目的:探讨c-Myc调控PIK3R3对黑色素瘤B16-F10细胞的迁移和侵袭的影响。方法:运用免疫组化检测PIK3R3在正常皮肤组织和黑色素瘤组织的表达;检测慢病毒(LV3-c-Myc和LV3-PIK3R3)对c-Myc和PIK3R3基因的沉默效率;使用Ed U增殖实验检测沉默c-... 目的:探讨c-Myc调控PIK3R3对黑色素瘤B16-F10细胞的迁移和侵袭的影响。方法:运用免疫组化检测PIK3R3在正常皮肤组织和黑色素瘤组织的表达;检测慢病毒(LV3-c-Myc和LV3-PIK3R3)对c-Myc和PIK3R3基因的沉默效率;使用Ed U增殖实验检测沉默c-Myc和PIK3R3后黑色素瘤细胞株B16-F10的增殖情况;Transwell侵袭实验检测c-Myc和PIK3R3的表达对黑色素瘤细胞B16-F10的侵袭能力的影响;划痕实验检测c-Myc和PIK3R3的表达对黑色素瘤细胞B16-F10迁移能力的影响;q PCR检测沉默c-Myc和PIK3R3后miR-199a的表达;q PCR检测转染miR-199a mimics和miR-199a inhibitor后c-Myc和PIK3R3的表达;双荧光素酶报告基因系统检测miR-199a对c-Myc和PIK3R3转录活性的影响。结果:和正常皮肤组织比较,PIK3R3在黑色素瘤组织中表达明显增加;沉默c-Myc和PIK3R3基因后,黑色素瘤细胞株B16-F10的增殖、侵袭和转移能力明显降低;沉默c-Myc和PIK3R3基因后,miR-199a表达上调;转染miR-199a mimics后,c-Myc和PIK3R3表达降低;转染miR-199a inhibitor后,c-Myc和PIK3R3表达上调;双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-199a可以直接调控c-Myc和PIK3R3的转录活性。结论:c-Myc可以通过miR-199a调控PIK3R3的表达,从而促进黑色素瘤细胞的增殖、侵袭和迁移能力。 展开更多
关键词 miR-199a C-MYC 黑色素瘤 WESTERN BLOT TRANSWELL 划痕实验 pik3r3
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牙鲆PIK3R3-like基因的表达分析及重组表达 被引量:1
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作者 王欣桐 王宣刚 +4 位作者 孙敏敏 孔祥福 刘金相 王志刚 于海洋 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期49-58,共10页
本文从牙鲆(Paralichthys olivaceus)中鉴定得到了PI3K家族的成员之一——PIK3R3-like,并分析其可能为PIK3R3的亚型。由于其部分外显子在转录或修饰时被删除,导致该基因会产生一种较短的mRNA(PoPIK3R3-like-Ⅱ),与完整的转录组相比缺失2... 本文从牙鲆(Paralichthys olivaceus)中鉴定得到了PI3K家族的成员之一——PIK3R3-like,并分析其可能为PIK3R3的亚型。由于其部分外显子在转录或修饰时被删除,导致该基因会产生一种较短的mRNA(PoPIK3R3-like-Ⅱ),与完整的转录组相比缺失21 nt。对PoPIK3R3-like的可变剪接长链(PoPIK3R3-like-Ⅰ)进行序列分析发现该基因包含一个1425 bp的开放性阅读框,共编码474个氨基酸,编码的蛋白共包含三个结构域,分别是一个nSH2结构域、一个iSH2结构域和一个cSH2结构域。同源性分析结果显示PoPIK3R3-like-Ⅰ、PoPIK3R3-like-Ⅱ均与其它硬骨鱼的PIK3R3-like相似度较高,系统进化分析显示PoPIK3R3-like与硬骨鱼聚为一支,与两栖类、鸟类和哺乳类相距较远。作者通过qRT-PCR检测了PoPIK3R3-like在各组织中的表达分布,发现其在牙鲆的各组织中均有表达,但在鳃和脑中表达量较高,使用迟缓爱德华氏菌侵染牙鲆鳃细胞及单核-巨噬细胞后,PoPIK3R3-like表达量分别呈现先上升再下降和显著上升的趋势,提示该基因在牙鲆抵抗迟缓爱德华氏菌感染相关的免疫应答中可能发挥作用。利用原核表达的方法在大肠杆菌中异源表达了PoPIK3R3-like-Ⅰ的重组蛋白,SDS-PAGE结果显示得到的重组蛋白与预测大小一致,蛋白纯化结果显示得到的蛋白纯度较高,可用于下一步PIK3R3-like基因功能的相关研究。 展开更多
关键词 牙鲆 pik3r3-like QRT-PCR 诱导表达 迟缓爱德华氏菌
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IL-6通过调控miR-152/PIK3R3通路促进胃癌细胞的增殖和上皮-间质转化 被引量:12
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作者 孙杰 付立芳 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1241-1247,共7页
目的:探索白细胞介素(interleukin,IL)-6在胃癌中的作用及相关的分子机制。方法:50 ng/m L IL-6刺激胃癌细胞MGC-803后,利用MTT法检测细胞增殖、划痕实验检测细胞迁移的变化,RT-qPCR实验检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadhe... 目的:探索白细胞介素(interleukin,IL)-6在胃癌中的作用及相关的分子机制。方法:50 ng/m L IL-6刺激胃癌细胞MGC-803后,利用MTT法检测细胞增殖、划痕实验检测细胞迁移的变化,RT-qPCR实验检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、锌指转录因子Snail1和miR-152在mRNA水平的表达,Western印迹检测E-cadherin,N-cadherin,vimentin,Snail1在蛋白水平的表达;IL-6与miR-152模拟物(miR-152 mimics)单独处理或者共同处理MGC-803细胞后,RT-qPCR检测PIK3R3在mRNA水平的表达,Western印迹检测PIK3R3、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化-Akt(p-Akt)在蛋白水平的表达。结果:外源性IL-6明显促进MGC-803细胞的增殖与迁移(P<0.05),降低E-cadherin蛋白和mRNA和miR-152 mRNA的表达(P<0.01),增加N-cadherin,vimentin,Snail1,PIK3R3蛋白和mRNA及p-Akt蛋白的表达(P<0.05)。转染miR-152 mimics后明显降低了PIK3R3和p-Akt蛋白水平的表达(P<0.01)。同时,过表达miR-152能够降低IL-6诱导的PIK3R3及p-Akt的表达水平(P<0.01)。各组中Akt的表达均无明显变化(P>0.05)。结论:IL-6可能是通过下调miR-152表达,诱导PIK3R3表达,激活PI3K/Akt信号通路,从而促进胃癌细胞的增殖、迁移和上皮-间质转化。 展开更多
关键词 白细胞介素-6 miR-152 pik3r3 胃癌
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PIK3R3通过PPARA调节肝癌细胞脂质代谢及增殖 被引量:5
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作者 邵胜利 杨熹 徐丰 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期129-136,共8页
目的研究PIK3R3是否依赖于PPARA调节肝癌细胞脂质代谢及增殖。方法在肝癌细胞HepG2及SMMC-7721中转染PIK3R3过表达质粒及其特异性siRNA,通过Western blot检测PPARA水平,通过酶比色法检测肝癌细胞培养液上清中酮体含量,CCK8法及BrdU/PI... 目的研究PIK3R3是否依赖于PPARA调节肝癌细胞脂质代谢及增殖。方法在肝癌细胞HepG2及SMMC-7721中转染PIK3R3过表达质粒及其特异性siRNA,通过Western blot检测PPARA水平,通过酶比色法检测肝癌细胞培养液上清中酮体含量,CCK8法及BrdU/PI双掺入法检测肝癌细胞的增殖和DNA合成。利用稳定过表达或沉默PIK3R3的肝癌细胞株,进行平板克隆形成实验观察PIK3R3对肝癌细胞克隆形成的影响,进而在干预PIK3R3表达的基础上观察肝癌细胞脂质代谢及细胞增殖的变化。在PIK3R3过表达或沉默的肝癌细胞中加入蛋白酶体抑制剂MG132或蛋白质生物合成抑制物CHX(cycloheximide,放线菌酮)后检测PPARA的水平。构建PPARA启动子荧光素酶质粒,观察干预PIK3R3表达后PPARA启动子活性的改变。结果在肝癌细胞中干预PIK3R3的表达可影响肝癌细胞PPARA的表达及肝癌细胞脂质代谢和增殖,干预PPARA的表达可部分逆转PIK3R3的作用;PIK3R3调节PPARA的生成而非降解,这一作用通过调节PPARA启动子活性实现。结论 PIK3R3可以通过调节PPARA的表达调节肝癌细胞脂质代谢及增殖。 展开更多
关键词 pik3r3 过氧化物酶体增殖物激活受体Α 肝癌 脂质代谢 细胞增殖
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PIK3R3对三阴性乳腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响 被引量:2
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作者 吕峰 秦景博 +2 位作者 潘力敏 孔舒欣 曹贝贝 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期716-722,共7页
目的观察PIK3R3在三阴性乳腺癌细胞中的表达及其对肿瘤细胞增殖、迁移活动的影响和可能的机制。方法首先,采用免疫组织化学方法检测53例三阴性乳腺癌组织及正常乳腺组织标本内PIK3R3的阳性表达率,分析PIK3R3与临床病理参数(肿瘤TNM分期... 目的观察PIK3R3在三阴性乳腺癌细胞中的表达及其对肿瘤细胞增殖、迁移活动的影响和可能的机制。方法首先,采用免疫组织化学方法检测53例三阴性乳腺癌组织及正常乳腺组织标本内PIK3R3的阳性表达率,分析PIK3R3与临床病理参数(肿瘤TNM分期和淋巴结转移情况)之间的相关性。然后将人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231瞬时转染siRNA-PIK3R3,并设转染无关序列siRNA(siRNA-NC)和未转染细胞(Blank)的对照组,Western blot检测细胞内PIK3R3的表达。在下调PIK3R3后,用流式细胞术检测MDA-MB-231细胞凋亡率,MTT法和Transwell实验分别测定MDA-MB-231细胞的增殖和迁移,Western blot检测MDA-MB-231细胞内磷酸化蛋白激酶(p-AKT)、雌激素受体(ERα)、G蛋白偶联雌激素受体1(GPER1)蛋白的表达。最后建立动物模型,下调PIK3R3后验证其对动物体内肿瘤的影响。结果PIK3R3在正常乳腺组织中的阳性表达率为22.64%(12/53),而在三阴性乳腺癌组织中的阳性表达率为60.38%(32/53),明显高于正常组织(P<0.01),且阳性表达率的高低与肿瘤TNM分期和淋巴结转移呈正相关(均P<0.01)。下调PIK3R3后,MDA-MB-231细胞的凋亡过程几乎未受到影响;Transwell实验结果显示siRNA-PIK3R3组穿膜细胞数为(89.9±7.3),siRNA-NC组为(161.3±24.7),空白对照组为(178.4±37.7),siRNA-PIK3R3组细胞迁移能力明显低于siRNA-NC组和空白对照组(均P<0.01);MTT检测结果显示,敲减PIK3R3可以显著抑制MDA-MB-231的增殖;Western blot检测结果显示,下调PIK3R3可促进GPER1的表达。下调PIK3R3的表达能够延缓小鼠体内肿瘤生长速度。结论PIK3R3表达与乳腺癌肿瘤分期密切相关,表明PIK3R3在乳腺癌的发生及发展过程中发挥重要作用。使用siRNA敲减PIK3R3后,细胞凋亡未受影响,却对MDA-MB-231细胞的增殖和迁移有明显抑制,这为乳腺癌的治疗和预后提供了新的研究方向。 展开更多
关键词 pik3r3 PI3K 乳腺癌 增殖 迁移
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雌二醇对绵羊输卵管上皮细胞pik3r3、Akt、mapk3基因mRNA及蛋白表达的影响
7
作者 李秀男 曹贵方 +4 位作者 乌达巴拉 田瑛 何亭漪 李彩新 杨燕燕 《畜牧与饲料科学》 2022年第3期25-29,41,共6页
[目的]利用雌二醇对绵羊输卵管上皮细胞进行刺激,检测与分析绵羊输卵管上皮细胞pik3r3、Akt、mapk3基因mRNA及蛋白表达的变化。[方法]以5代内的绵羊输卵管上皮细胞作为研究对象,通过qPCR及Western blot检测添加10-8 mol/L的雌二醇(以等... [目的]利用雌二醇对绵羊输卵管上皮细胞进行刺激,检测与分析绵羊输卵管上皮细胞pik3r3、Akt、mapk3基因mRNA及蛋白表达的变化。[方法]以5代内的绵羊输卵管上皮细胞作为研究对象,通过qPCR及Western blot检测添加10-8 mol/L的雌二醇(以等量培养基替代雌二醇作为对照组)作用0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0 h后输卵管上皮细胞pik3r3、Akt、mapk3基因mRNA及蛋白的表达情况。[结果]在绵羊输卵管上皮细胞中添加10-8 mol/L雌二醇后,随着作用时间的延长,pik3r3、Akt、mapk3基因mRNA及蛋白的表达量整体呈先升高、后降低趋势。与作用0 h相比,pik3r3基因的mRNA表达量(P<0.01)及蛋白表达量(P<0.05)在雌二醇作用1.5 h时达到最高峰,Akt、mapk3基因的mRNA表达量(P<0.01)及蛋白表达量(P<0.05)在雌二醇作用2.5 h时达到最高峰。雌二醇作用3.0 h时,pik3r3、Akt、mapk3基因的mRNA表达量相比0 h都显著(P<0.05)提高。[结论]输卵管上皮细胞中pik3r3、Akt、mapk3基因的表达受到雌二醇调控。高浓度雌激素促进pik3r3、Akt、mapk3基因的高表达,这可能与生殖道的天然防御有关,并可能通过该途径提高机体自身免疫应答能力。 展开更多
关键词 雌二醇 输卵管上皮细胞 pik3r3基因 AKT基因 mapk3基因
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黑色素瘤组织中c-Myc、PIK3R3表达量与侵袭、迁移基因的相关性 被引量:2
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作者 林志明 《海南医学院学报》 CAS 2018年第8期877-880,共4页
目的:研究黑色素瘤组织中c-Myc、PIK3R3表达量与侵袭、迁移基因的相关性。方法:选择2015年5月-2017年3月期间在福州总院95临床部手术切除的黑色素瘤组织以及全厚皮片移植手术中剩余的正常皮肤组织,分离提取组织中的RNA后采用荧光定量PC... 目的:研究黑色素瘤组织中c-Myc、PIK3R3表达量与侵袭、迁移基因的相关性。方法:选择2015年5月-2017年3月期间在福州总院95临床部手术切除的黑色素瘤组织以及全厚皮片移植手术中剩余的正常皮肤组织,分离提取组织中的RNA后采用荧光定量PCR试剂盒测定c-Myc、PIK3R3及侵袭、迁移基因的mRNA表达量。结果:黑色素瘤组织中c-Myc、PIK3R3、CXCL12、CXCR4、CXCR7、NRP1、MMP2、MMP9、CatK的mRNA表达量均显著高于正常皮肤组织,E-cadherin、TIMP1、KISS1的mRNA表达量显著低于正常皮肤组织;黑色素瘤组织中c-Myc的mRNA表达量与PIK3R3的mRNA表达量呈正相关;c-Myc高表达的黑色素瘤组织中CXCL12、CXCR4、CXCR7、NRP1、MMP2、MMP9、CatK的mRNA表达量均显著高于c-Myc低表达的黑色素瘤组织,E-cadherin、TIMP1、KISS1的mRNA表达量显著低于c-Myc低表达的黑色素瘤组织。结论:黑色素瘤组织中高表达的c-Myc、PIK3R3能够促进癌细胞的侵袭和迁移。 展开更多
关键词 黑色素瘤 C-MYC pik3r3 侵袭 迁移
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Correlation of c-Myc and PIK3R3 expression with invasion and migration genes in melanoma tissue
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作者 Zhi-Ming Lin 《Journal of Hainan Medical University》 2018年第8期65-68,共4页
Objective:To study the correlation of c-Myc and PIK3R3 expression with invasion and migration genes in melanoma tissue.Methods: Surgical removed melanoma tissue and normal skin tissue left in full-thickness skin graft... Objective:To study the correlation of c-Myc and PIK3R3 expression with invasion and migration genes in melanoma tissue.Methods: Surgical removed melanoma tissue and normal skin tissue left in full-thickness skin grafting in 95 Clinical Department, Fuzhou General Hospital between May 2015 and March 2017 were selected, the RNA in the tissue was separated and extracted, and then fluorescence quantitative PCR kit was used to determine the mRNA expression of c-Myc and PIK3R3 as well as invasion and migration genes.Results:c-Myc, PIK3R3, CXCL12, CXCR4, CXCR7, NRP1, MMP2, MMP9 and CatK mRNA expression in melanoma tissue were significantly higher than those in normal skin tissue while E-cadherin, TIMP1 and KISS1 mRNA expression were significantly lower than those in normal skin tissue;c-Myc mRNA expression in melanoma tissue was positively correlated with PIK3R3 mRNA expression;CXCL12, CXCR4, CXCR7, NRP1, MMP2, MMP9 and CatK mRNA expression in melanoma tissue with higher c-Myc expression were significantly higher than those in melanoma tissue with lower c-Myc expression while E-cadherin, TIMP1 and KISS1 mRNA expression were significantly lower than those in melanoma tissue with lower c-Myc expression.Conclusion:The high expression of c-Myc and PIK3R3 in melanoma tissue can promote the invasion and migration of cancer cells. 展开更多
关键词 MELANOMA C-MYC pik3r3 INVASION MIGRATION
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PIK3R3在胆囊癌组织中的表达及临床意义
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作者 李雪川 崔旭雅 +4 位作者 李霖 杨洋 巴桑 鄂福胜 赵铭宁 《肝胆胰外科杂志》 CAS 2020年第4期232-235,共4页
目的检测胆囊癌患者癌组织及癌旁组织中磷脂酰肌醇3激酶调节亚基3(PIK3R3)的表达,分析其临床意义。方法回顾性分析上海交通大学医学院附属新华医院2014年1月至2016年12月共50例胆囊癌患者的临床资料;采用门诊及电话的方式对患者进行随访... 目的检测胆囊癌患者癌组织及癌旁组织中磷脂酰肌醇3激酶调节亚基3(PIK3R3)的表达,分析其临床意义。方法回顾性分析上海交通大学医学院附属新华医院2014年1月至2016年12月共50例胆囊癌患者的临床资料;采用门诊及电话的方式对患者进行随访,随访时间截止至2018年12月。利用免疫组织化学染色法检测50例胆囊癌患者癌组织及其癌旁组织中PIK3R3蛋白的表达情况,并用统计学方法分析其与患者临床特征及预后的关系。结果免疫组化分析表明,PIK3R3蛋白表达主要位于胆囊癌细胞的细胞质中,胆囊癌组织中PIK3R3蛋白表达阳性率较癌旁组织中明显升高(74.0%vs 28.0%,χ^2=7.923,P<0.05)。而且PIK3R3蛋白表达阳性率在患者的肿瘤TNM分期和分化程度上差异有统计学意义(χ^2=7.033,6.821,P<0.05),而在性别、年龄、是否患有胆囊结石、淋巴结转移方面,则无明显统计学差异(P>0.05)。PIK3R3蛋白高表达者相较于低表达者预后更差(中位生存时间10个月vs 19个月,P<0.05);经Cox多因素回归分析发现,PIK3R3表达阳性可作为胆囊癌预后危险因素之一(HR 5.766,95%CI 1.843~18.033,P<0.05)。结论PIK3R3在胆囊癌组织中表达升高,且主要表达在细胞质中。PIK3R3表达与胆囊癌发展指标如TNM分期、肿瘤分化程度有关。在患者预后方面,PIK3R3蛋白高表达的患者具有较差的预后。PIK3R3蛋白的表达可以作为胆囊癌患者预后的指标之一。 展开更多
关键词 胆囊癌 磷脂酰肌醇3激酶调节亚基3 肿瘤分化 TMN分期 肿瘤预后
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LncRNA PURPL调节miR-342-3p/PIK3R1轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响
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作者 王红梅 陈思瑞 杜红 《河北医学》 2024年第1期29-35,共7页
目的:探究长链非编码RNA(PURPL)调节微小RNA-342-3p(miR-342-3p)/磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基1(PIK3R1)轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:细胞实验:将si-NC、si-PURPL、si-PURPL+inhibitor NC、si-PURPL+miR-342-3p inhibitor分别... 目的:探究长链非编码RNA(PURPL)调节微小RNA-342-3p(miR-342-3p)/磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基1(PIK3R1)轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:细胞实验:将si-NC、si-PURPL、si-PURPL+inhibitor NC、si-PURPL+miR-342-3p inhibitor分别转染至肝癌细胞Huh-7细胞并命名为si-NC组、si-PURPL组、si-PURPL+inhibitor NC组、si-PURPL+miR-342-3p inhibitor组,未做任何处理的Huh-7细胞记为NC组。双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA PURPL、miR-342-3p、PIK3R1的关系;qRT-PCR检测人正常肝细胞系L02和人肝癌细胞系Huh-7中LncRNA PURPL、miR-342-3p表达;Western blot检测L02细胞、Huh-7细胞PIK3R1蛋白水平;MTT法检测Huh-7细胞增殖情况;流式细胞术检测Huh-7细胞凋亡率;Transwell检测Huh-7细胞侵袭数量;划痕试验测定Huh-7细胞迁移。体内实验:构建裸鼠异种移植模型,分组同细胞实验,检测肿瘤体积和肿瘤重量。结果:细胞实验结果显示:与si-NC组相比,si-PURPL组Huh-7细胞OD490值、划痕愈合率、侵袭细胞数量、LncRNA PURPL、PIK3R1水平显著下降(P<0.05),Huh-7细胞凋亡率、miR-342-3p相对表达量显著升高(P<0.05),而抑制miR-342-3p表达减弱了沉默LncRNA PURPL抑制Huh-7细胞增殖、迁移、侵袭和促进凋亡的效果;LncRNA PURPL负向调控miR-342-3p/PIK3R1轴。体内结果显示:si-PURPL组裸鼠肿瘤体积和质量较si-NC组下降(P<0.05);抑制miR-342-3p表达减弱了沉默LncRNA PURPL对体内肿瘤生长的抑制作用。结论:沉默LncRNA PURPL可抑制Huh-7细胞的恶性生物学行为,其机制可能与调控miR-342-3p/PIK3R1轴有关。 展开更多
关键词 LncRNA PURPL miR-342-3p/PIK3R1轴 肝癌 增殖 凋亡
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异鼠李素介导miR-454-3p/PIK3R1轴对口腔鳞状细胞癌细胞生物学特性的影响
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作者 冯希霞 迈宇鹤 穆宏 《中医药导报》 2024年第4期23-29,共7页
目的:探讨异鼠李素(ISO)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞生物学特性的影响,以及在该过程中对miR-454-3p/PIK3R1轴的调控机制。方法:MTT法检测ISO对TSCC1细胞的毒性,随后将TSCC1细胞分为OSCC组、ISO组、ISO+miR-NC组、ISO+miR-454-3p mimic组... 目的:探讨异鼠李素(ISO)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞生物学特性的影响,以及在该过程中对miR-454-3p/PIK3R1轴的调控机制。方法:MTT法检测ISO对TSCC1细胞的毒性,随后将TSCC1细胞分为OSCC组、ISO组、ISO+miR-NC组、ISO+miR-454-3p mimic组。MTT法检测各组细胞的存活率;克隆形成实验检测各组细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力;RT-qPCR法检测各组细胞中miR-454-3p和PIK3R1的mRNA水平;Western blotting法检测各组细胞中PIK3R1蛋白的表达;双荧光素酶实验验证miR-454-3p与PIK3R1的靶向关系;建立裸鼠移植瘤模型,将小鼠分为模型组、ISO组、ISO组+agomir-NC组,ISO组+miR-454-3p agomir组,每组5只,干预15 d后检测各组小鼠的肿瘤质量和体积;RT-qPCR法检测肿瘤组织中miR-454-3p和PIK3R1的mRNA水平。结果:体外实验发现,与OSCC组比较,ISO组和ISO+miR-NC组细胞存活率、迁移和侵袭细胞数量、miR-454-3p表达水平均降低(P<0.05),细胞凋亡率、PIK3R1 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05);miR-454-3p mimic回补实验逆转了ISO对OSCC的抑癌作用及PIK3R1的表达水平(P<0.05),同时双荧光素酶报告基因实验验证了miR-454-3p与PIK3R1之间存在靶向关系;体内实验发现,与模型组比较,ISO组小鼠移植瘤的质量和体积均减小(P<0.05),miR-454-3p表达水平、PIK3R1 mRNA表达水平以及miR-454-3p agomir的回补实验结果均与体外实验保持一致。结论:ISO能够通过调节miR-454-3p/PIK3R1轴抑制OSCC细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 异鼠李素 口腔鳞状细胞癌 miR-454-3p/PIK3R1轴 增殖 迁移 侵袭 小鼠
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病毒性心肌炎血清外泌体来源的miR-320通过靶向Pik3r1抑制AKT/mTOR通路促进小鼠心肌细胞凋亡
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作者 张欣 李雪琴 +3 位作者 朱良宇 殷国泉 张苑 吕坤 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期516-525,共10页
目的探讨病毒性心肌炎血清外泌体miR-320对心肌细胞凋亡的影响及机制。方法使用柯萨奇病毒B3(CVB3)腹腔注射,建立病毒性心肌炎小鼠模型;采用血清外泌体抽提试剂盒提取血清外泌体,与心肌细胞共培养,激光共聚焦显微镜观察心肌细胞摄取外... 目的探讨病毒性心肌炎血清外泌体miR-320对心肌细胞凋亡的影响及机制。方法使用柯萨奇病毒B3(CVB3)腹腔注射,建立病毒性心肌炎小鼠模型;采用血清外泌体抽提试剂盒提取血清外泌体,与心肌细胞共培养,激光共聚焦显微镜观察心肌细胞摄取外泌体情况;使用miR-320抑制剂或模拟物转染心肌细胞,实时荧光定量PCR检测miR-320表达水平;采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,Western blot法检测B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)和Bcl2相关X蛋白(BAX)表达水平;生物信息学预测miR-320靶基因并进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析;荧光素酶报告基因检测miR-320与其靶基因磷脂酰肌醇3激酶调节亚基1(Pik3r1)的作用关系;Western blot法检测miR-320对蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AKT/mTOR)通路蛋白的影响。结果病毒性心肌炎血清外泌体促进心肌细胞凋亡并上调BAX水平,同时降低Bcl2水平;病毒性心肌炎小鼠心肌组织中miR-320显著上调,且miR-320成熟体和miR-320前体pri-miR-320表达在心肌细胞均明显上调;病毒性心肌炎血清外泌体处理的心肌细胞中miR-320水平显著上调,而转染miR-320抑制剂逆转了外泌体引起的miR-320上调及凋亡率升高;Pik3r1是miR-320的靶基因,其过表达逆转miR-320上调导致的心肌细胞凋亡;miR-320过表达抑制AKT/mTOR通路激活。结论病毒性心肌炎血清外泌体miR-320通过靶向Pik3r1抑制AKT/mTOR通路促进小鼠心肌细胞凋亡。 展开更多
关键词 病毒性心肌炎 外泌体 磷脂酰肌醇3激酶调节亚基1(Pik3r1) miR-320 心肌细胞 凋亡
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微小RNA-27b对RAW264.7细胞生物学功能的作用及调控机制 被引量:1
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作者 隋静 张艳秋 +2 位作者 李成云 付艳云 梁戈玉 《环境与职业医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1049-1054,共6页
[目的]在分析纳米二氧化钛引起巨噬细胞微小RNA(mi R)表达谱改变的基础上,选择与免疫通路相关的mi R-27b,探讨mi R-27b对巨噬细胞RAW264.7的生物学功能及其对靶基因磷脂酰肌醇-3-激酶调节亚基3(Pik3r3)的调控作用。[方法]用Diana-mir P... [目的]在分析纳米二氧化钛引起巨噬细胞微小RNA(mi R)表达谱改变的基础上,选择与免疫通路相关的mi R-27b,探讨mi R-27b对巨噬细胞RAW264.7的生物学功能及其对靶基因磷脂酰肌醇-3-激酶调节亚基3(Pik3r3)的调控作用。[方法]用Diana-mir Path在线软件对mi R-27b进行生物学信息分析,并通过Targetscan软件预测靶基因位点。通过转染使RAW264.7细胞的mi R-27b表达上调,采用MTT、流式细胞技术观察转染后细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的变化,应用Western blot检测靶基因的蛋白表达水平。[结果]Diana-mir Path在线软件进行mi R-27b的信号通路及靶基因分析结果显示,mi R-27b参与的信号通路-ln P≥2.99(P<0.05)的有23个,其中得分最高的通路为T细胞受体信号通路(T cell receptor signaling pathway),得分为16.89。靶基因预测结果显示Pik3r3可能是其靶基因之一。转染mi R-27b模拟物后,转染组与阴性对照组相比较,光密度值无明显差异(P=0.725),细胞周期也无明显差异(G1、S和G2期分别为P=0.490,P=0.088,P=0.323),但细胞凋亡率明显增高(P=0.023)。此外,转染组Pik3r3蛋白表达量无明显差异(P>0.05)。[结论]mi R-27b可促进RAW264.7细胞凋亡,其调控机制尚需进一步研究。 展开更多
关键词 MI R-27b 细胞周期 细胞凋亡 pik3r3
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