Pim1基因过表达在急性髓系白血病发病机制中的作用研究

目的:研究Pim1上调对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞系U937增殖、凋亡、趋化作用和血管生成的影响,探讨其可能的作用机制,了解Pim1基因在AML患者原代细胞中的表达情况。方法:构建Pim1过表达和空载的荧光质粒,用慢病毒载体系统包装带有GFP荧光标记的Pim1慢病毒和对照病毒,同时建立Pim1慢病毒稳定感染U937细胞系和对照病毒稳定感染U937细胞系;CCK-8检测和流式细胞术检测Pim1基因表达上调对U937细胞增殖、凋亡影响;应用Transwell趋化试验了解Pim1基因表达对AML细胞趋化的影响;应用Western blot检测Pim1基因表达上调对凋亡、增殖趋化蛋白表达的影响;通过流式细胞术和共聚焦显微镜观察Pim1过表达对CXCR4表达和Pim1和CXCR4在细胞内定位情况;实时荧光定量PCR(q PCR)检测Pim1基因表达对血管生成基因表达的影响,采用Reverse transcription PCR(RT-PCR)检测AML原代细胞Pim1的表达情况。结果:成功建立Pim1过表达的慢病毒感染AML细胞系及对照病毒感染的AML细胞系。Pim1过表达促进AML细胞增殖,抑制细胞凋亡伴随Cyclin D1表达增加,磷酸化BAD和磷酸化CXCR4增加。在Pim1过表达细胞中加入SDF-1α刺激后,细胞趋化能力增强,同时流式细胞术和Western blot检测到CXCR4和磷酸化CXCR4表达增加,钙离子内流增加。荧光共聚焦显微镜检测到Pim1过表达,导致细胞内磷酸化CXCR4表达增加,并且增加的磷酸化CXCR4与Pim1共同定位。QPCR显示,Pim1基因表达上调对血管新生的基因表达没有影响;在AML患者外周血单个核细胞(PBMC) Pim1基因mRNA表达明显高于正常对照人群。结论:Pim1在AML发病机制中起到重要作用,其不仅促进AML细胞增殖和抑制凋亡,还能提高白血病细胞的趋化能力,这与Pim1磷酸化CXCR4和增加细胞内钙离子的内流信号有密切关系。

PIM1基因通过调控STAT3信号通路蛋白表达对食管癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨原癌基因PIM1通过调控信号转导子与激活子3(STAT3)信号通路对食管癌KYSE150细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:分别以PIM1 siRNA和siRNA Control转染KYSE150细胞,命名为PIM1-siRNA组和NC组,同时设置空白对照Control组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组细胞中PIM1表达变化。采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术和Transwell实验分别检测细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力。Western blot检测与细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移相关蛋白以及与STAT3信号通路相关蛋白表达水平。结果:PIM1-siRNA组KYSE150细胞中PIM1 mRNA和蛋白表达显著低于Control组(P<0.05)。PIM1-siRNA组KYSE150细胞光密度(OD)值、侵袭和迁移细胞数均显著低于Control组(P<0.05),凋亡率明显高于Control组(P<0.05),增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和p-STAT3蛋白表达水平均低于Control组(P<0.05),剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达水平高于Control组。Control组和NC组以上各指标相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PIM1通过调控STAT3信号通路调节食管癌KYSE150细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移。

PIM1基因阳性的黏膜相关边缘区B细胞淋巴瘤1例

探讨PIM1基因与黏膜相关边缘区B细胞淋巴瘤的发病机制及相关治疗。对1例PIM1基因阳性的黏膜相关边缘区B细胞淋巴瘤患者的相关实验室检查、影像学、病理学结果及治疗情况进行回顾性分析,并复习相关文献。患者使用R-CHOP方案治疗,效果较好。黏膜相关淋巴组织(mucosa associated lymphoid tissue,MALT)淋巴瘤是一种惰性淋巴瘤。PIM1在调节正常造血细胞和造血系统恶性肿瘤细胞的增殖和分化中起着重要作用。

烟曲霉新基因pim1敲除菌株构建及其耐药功能鉴定

在前期构建的T-DNA(Transfer DNA)随机插入的烟曲霉耐唑类药物突变菌株的基础上,通过Tail-PCR和测序,从突变菌株中鉴定到一个新基因pim1,并进一步利用基因敲除技术构建烟曲霉pim1基因敲除菌株,从而通过菌落表型验证该基因缺失所导致的耐药现象.由此推测,pim1基因可能通过影响烟曲霉线粒体的功能参与唑类药物耐药的调控.该研究结果可为后期深入研究pim1基因在烟曲霉中参与唑类药物耐药分子调控机制,以及进一步控制真菌的耐药现象提供理论依据.

弥漫大B细胞淋巴瘤中莫洛尼病毒前病毒整合位点1基因突变情况及其临床意义

目的探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中莫洛尼病毒前病毒整合位点1(PIM1)基因突变情况及其临床意义。方法收集2016年1月至2022年3月于十堰市太和医院手术切除的38例DLBCL患者的石蜡包埋组织,采用聚合酶链反应(PCR)-Sanger法检测PIM1基因突变情况;筛选cBioPortal数据库中DLBCL相关的DUKE、DFCI和TCGA数据集,收集PIM1基因突变和表达、临床预后信息。将患者分为PIM1基因突变阳性组和PIM1基因突变阴性组,比较两组患者临床病理特征、肿瘤突变负荷(TMB)、微卫星不稳定(MSI)水平及总生存(OS)的差异,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,采用Cox比例风险模型进行单因素和多因素生存分析。结果DUKE、DFCI、TCGA数据集中及十堰市太和医院DLBCL患者PIM1基因突变的阳性率分别为14.3%(96/673)、26.3%(26/99)、19.5%(8/41)和28.9%(11/38),其中突变位点与突变形式以第4号外显子和错义突变多见。不同年龄(DUKE数据集)、细胞起源(COO)分型(DFCI数据集)的DLBCL患者PIM1基因突变阳性率差异均有统计学意义(χ^(2)值分别为8.22、4.40,均P<0.05)。DUKE、DFCI和TCGA数据集中,与PIM1基因突变阴性组患者相比,PIM1基因突变阳性组中TMB均升高(均P<0.05)。DUKE和DFCI数据集中,PIM1基因突变阳性组OS较阴性组差(均P<0.05),多因素Cox回归分析显示PIM1基因突变阳性为DLBCL患者OS不良预后因素(DUKE数据集:HR=1.661,95%CI 1.151~2.396,P=0.007;DFCI数据集:HR=2.074,95%CI 1.031~4.172,P=0.041)。结论PIM1基因突变可能与DLBCL患者预后不良有关。

高车前素对大肠癌细胞生长和转移的影响

高车前素是一种分离自菊科植物毛莲蒿的黄酮类化合物,具有多种生物活性。原癌基因PIM1可调节癌细胞存活、分化、增殖、凋亡和肿瘤发生。为了揭示高车前素对大肠癌细胞生长和转移的影响,及其对PIM1表达的影响,本研究应用不同浓度的高车前素处理人大肠癌细胞系SW620,并通过转染PIM1 siRNA来敲低大肠癌细胞中PIM1的表达,通过转染高表达PIM1的质粒载体再上调PIM1的表达。研究发现敲低PIM1可显著抑制大肠癌细胞的增殖和侵袭,并促进细胞凋亡;高车前素处理以浓度依赖性方式抑制大肠癌细胞系SW620的增殖和侵袭,并增加细胞凋亡。此外,高车前素处理以浓度依赖性方式抑制PIM1的表达,而上调PIM1的表达可显著抑制高车前素对大肠癌细胞系SW620的增殖、凋亡和侵袭能力的影响;高车前素以浓度依赖性方式抑制JAK2/STAT3的活化,并上调癌细胞内ROS水平;应用ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理可恢复JAK2/STAT3信号传导的激活及PIM1的表达。本研究证实原癌基因PIM1在大肠癌中起着致癌基因的作用,而高车前素通过ROS/JAK2/STAT3信号通路来调节PIM1的表达,进而发挥其抗肿瘤作用。