真空渗入法转pinⅡ基因菜薹外源基因的遗传与表达

本研究对利用真空渗入法获得的转bar基因及pinⅡ基因菜薹,进行了外源基因的遗传及表达情况分析。结果表明通过该方法获得的转基因植株,外源基因能够稳定遗传。bar基因在T2代的分离大部分符合孟德尔遗传规律,但也有不符合的群体;pinⅡ基因在T2代中稳定表达,但各个株系之间的表达水平差异较大,因而各个株系的抗虫效果也具有显著差异,即使具有相同外源基因拷贝数的各个株系,其PINⅡ蛋白表达量和抗虫效果也具有显著差异。

PINⅡ基因通过花粉管通道法转化水稻的研究

利用花粉管通道法,用含抗除草剂基因bar及抗虫基因pin2的质粒pTW-α转化中籼HD357。经用除草剂Basta进行筛选,得到5株抗性苗。对其进行初步PCR检测,结果表明,有4株PCR结果呈阳性。用PINⅡ基因探针对其进行Southern杂交分析,有2株表现出有杂交信号,说明外源基因已整合转入到水稻基因组中,抗虫性实验尚待继续进行。

pinⅡ基因在转基因大白菜DH纯系和试配F_1代的遗传及表达

马铃薯蛋白酶抑制剂基因-Ⅱ(pinⅡ)是一类控制丝氨酸蛋白酶抑制剂PI-Ⅱ合成的抗虫基因。为了比较pinⅡ基因在转基因大白菜纯系和杂种中的表达特性,为抗虫新品种选育提供理论指导,本实验以转基因大白菜双单倍体纯系(DH系)的5个自交系和与常规育种亲本材料试配的3个F1杂交组合为试材,利用标记性状(除草剂抗性)对试材进行转基因验证,通过小菜蛾饲喂实验对纯系及F1代的离体叶片进行小菜蛾抗性鉴定,同时利用RTq-PCR及蛋白酶抑制活性测定对抗虫性良好的纯系及F1杂种的目的mRNA转录量及目的蛋白合成量进行了测定。结果显示,F1杂种09-2-464对小菜蛾的抑虫效果比纯系T280-2-6强;F1杂种09-2-467对小菜蛾的抑虫效果比纯系T280-3-6强。T180-3-6的自交T2代与杂交F1代对小菜蛾的抑虫作用表现在不同的虫体发育阶段:T280-3-6②主要表现在高致死率和低化蛹率,T280-3-6④和杂种F1代主要表现在降低小菜蛾羽化率上,呈现出抗虫能力上的杂种优势。莲座期T280-3-6②pinⅡmRNA转录量和PI-Ⅱ蛋白表达量分别是F1代09-2-467的5倍和4倍。在植物的不同生长阶段纯系PI-Ⅱ蛋白量均高于F1代。T280-3-6②和F1代09-2-467、09-2-464有希望用于抗虫大白菜育种。

转PinII基因抗虫水稻后代的农艺性状研究

对转PinII基因抗虫水稻T0、T1、T2代群体的株高、穗长、穗总粒、结实率、千粒重以及田间虫害发生率进行了研究,从中选出有利用价值的广谱抗虫性增强的材料20份,同时获得了一些矮化和分蘖能力增强的材料,这些工作对水稻抗虫新品种选育以及水稻基因功能分析和基因分离克隆具有重要意义。

提高农杆菌介导法将PinII抗虫基因导入滇型水稻的转化效率

本论文对滇型水稻品种玉优一号、HT - 7的愈伤组织诱导、基因转化及植株再生进行了研究。通过实验 ,将质粒 pCAMBI130 0上带有的PinⅡ抗虫基因导入水稻愈伤组织细胞中 ,获得了一批Hyg抗性植株 ,185株抗性苗经过PCR检测和叶片对潮霉素的抗性试验 ,证明其中有 5 9株为转基因阳性植株。结果显示 ,受体、农杆菌状态以及共培养方式等是影响基因转化效率的关键因素 ;以叶片对潮霉素的抗性作为转基因植株的快速筛选是可行的 ,大大提高了检测效率。