端粒酶卡扎尔体蛋白1和PIN2/TERF1相互作用端粒酶抑制剂1在乳腺浸润性导管癌患者中的表达及临床意义

目的 探讨端粒酶卡扎尔体蛋白1(TCAB1)和PIN2/TERF1相互作用端粒酶抑制剂1(PINX1)在乳腺浸润性导管癌患者中的表达及临床意义。方法 选取45例乳腺浸润性导管癌患者和45例乳腺纤维腺瘤患者,收集乳腺浸润性导管癌组织和乳腺纤维腺瘤组织,采用免疫组化染色法检测TCAB1和PINX1的表达情况。比较乳腺浸润性导管癌组织与乳腺纤维腺瘤组织中TCAB1和PINX1的表达情况,比较不同临床特征乳腺浸润性导管癌患者乳腺浸润性导管癌组织中TCAB1和PINX1的表达情况,采用Spearman相关分析法分析乳腺浸润性导管癌组织中TCAB1与PINX1表达的相关性。结果 乳腺浸润性导管癌组织中TCAB1高表达率明显高于乳腺纤维腺瘤组织,PINX1高表达率明显低于乳腺纤维腺瘤组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。无淋巴结转移、组织学分级为Ⅱ级的乳腺浸润性导管癌患者乳腺浸润性导管癌组织中PINX1高表达率分别明显高于淋巴结转移、组织学分级为Ⅲ级的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。乳腺浸润性导管癌组织中TCAB1与PINX1的表达呈负相关(r=-0.328,P=0.028)。结论 乳腺浸润性导管癌患者中TCAB1高表达率较高,PINX1高表达率较低,二者的表达呈负相关,且PINX1表达与淋巴结转移情况和组织学分级密切相关。

PIN2蛋白在水稻根尖细胞中定位方法的优化

PIN2蛋白作为生长素外排蛋白,在植物根的向地性生长中起重要作用。免疫定位法是一种可以将蛋白在植物细胞中快速准确定位的方法。本研究利用改良的免疫荧光定位法,对PIN2蛋白在水稻根尖细胞中的定位进行了观察,并与前人的两种方法进行比较。结果表明,与已有的方案比较,改良免疫荧光定位法可使PIN2蛋白在水稻根尖细胞中的位置快速准确地被观察到,且简化了操作步骤,操作方便快速,可广泛应用于植物其他蛋白的定位研究。

PinX1的原核表达、纯化及其与hTERT的相互作用

目的:原核表达人Pin2/TRF1结合蛋白X1(PinX1),确定该蛋白与人端粒酶逆转录酶(hTERT)催化亚基的相互作用。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增PinX1基因的编码序列,克隆至pET-32a载体构建重组质粒pHisPinX1,经双酶切鉴定后转化大肠杆菌BL21并进行诱导表达,SDS-PAGE和Western印迹检测His-PinX1的表达;用His磁珠纯化His-PinX1,在人肾胚细胞293T内检测His-PinX1与hTERT的相互作用。结果:扩增得到980 bp的PinX1基因;Western印迹检测表明,相对分子质量约57×103的His-PinX1获得表达,且纯化的His-PinX1与hTERT具有相互作用。结论:表达并纯化得到了与hTERT相互作用的His-PinX1,为深入研究PinX1的功能奠定了基础。

PinX1基因在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的分析Pin2/TRF1结合蛋白X1(Pin2/TRF1-interacting protein X1,PinX1)基因在非小细胞肺癌组织中表达,探讨PinX1基因在肺癌发生发展中的作用及其临床意义。方法对56例肺癌组织及癌旁正常组织应用半定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测其中的PinX1的mRNA表达水平,应用端粒重复序列扩增(telomeric repeat anplication protocol,TRAP)-酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测其中的端粒酶活性。结果 PinX1在不同病理类型的肺癌组织中表达无显著性差异,与临床分期和预后之间呈显著相关性,与端粒酶活性呈负相关。结论 PinX1的下调可能与肺癌的发生、发展过程中端粒酶激活有关。检测PinX1的表达水平对评价肺癌预后有重要的临床价值。

端粒酶抑制因子X1对皮肤鳞状细胞癌细胞生长与凋亡的影响

目的探讨端粒酶抑制因子X1(PinX1)对皮肤鳞状细胞癌细胞生长与凋亡的影响。方法将SCL-1细胞分成3组:空白对照组(空白对照细胞)、阴性对照组(转染阴性对照载体)和过表达组(转染PinX1过表达载体)。以噻唑蓝法检测细胞增殖能力(OD值),以流式细胞术检测细胞凋亡,以反转录-聚合酶链反应测定SCL-1细胞中PinX1基因表达水平,以蛋白质印迹检测Notch受体胞内结构域1(NICD1)、Notch受体胞内结构域2(NICD2)、发状分裂相关增强子1(HES1)和端粒酶逆转录酶(hTERT)和PinX1蛋白表达。结果空白对照组、阴性对照组和过表达组细胞中的PinX1基因表达水平分别为1.00±0.12,1.04±0.07和3.25±0.21;这3组细胞的增殖能力分别为1.26±0.10,1.24±0.12和0.85±0.09;这3组细胞的凋亡率分别为(9.39±0.93)%,(9.59±1.21)%和(27.88±2.48)%;这3组细胞的NICD1蛋白水平分别为0.62±0.05,0.60±0.07和1.15±0.14;这3组细胞中的NICD2蛋白水平分别为0.55±0.04,0.57±0.06和1.24±0.12;这3组细胞中的HES1蛋白水平分别为0.53±0.07,0.54±0.06和0.91±0.09;这3组细胞中的hTERT蛋白水平分别为0.51±0.04,0.52±0.05和0.17±0.03。上述指标:过表达组与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论PinX1可能通过激活Notch信号通路,抑制皮肤鳞状细胞癌细胞生长和诱导细胞凋亡。

Fbx4蛋白质及其研究进展

泛素介导的蛋白降解途径参与了许多生物学过程。SCF复合体是一种非常重要的E3泛素连接酶，F-box蛋白是SCF复合体的一个亚基，Fhx4蛋白是众多F-box蛋白中的一种，是底物特异性识别SCF^Fbx4/αB-crystallin酶的重要组成部分，Fbx4蛋白失活或表达水平改变影响SCF^Fbx4/αB-crystallin酶活性，从而影响细胞周期蛋白D1的表达水平。同时Fbx4蛋白还是端粒长度调节的一个重要调控因子。