HA-PIPP^(H557A)对小鼠受精卵卵裂的影响

目的研究脯氨酸丰富的肌醇多磷酸5-磷酸酶(PIPP)在组氨酸557位点突变为丙氨酸时PIPPH557A对小鼠受精卵卵裂的调节作用。方法将HA-PIPPH557A重组质粒转染到小鼠受精卵中,用免疫荧光染色法检测HA-PIPPH557A对小鼠受精卵卵裂的影响。然后使用相差显微镜观察并计数HA-PIPPH557A对受精卵卵裂率的影响。结果 HA-PIPPH557A在小鼠受精卵的有丝分裂过程中对卵裂的调节与PIPP的作用相反。并且他们之间的比较具有显著意义(P<0.001)。结论 PIPPH557A在小鼠受精卵中通过调节PIPP的活性作用干扰受精卵卵裂。

FLAG-PIPP^(H557A)在小鼠1-细胞期受精卵中对PKB/Akt表达的调节作用

目的:研究富含脯氨酸的肌醇多磷酸5-磷酸酶(proline-rich inositol polyphosphate 5-phosphatase,PIPP)在组氨酸557位点突变为丙氨酸(FLAG-PIPPH557A)时对小鼠受精卵中磷酸化苏氨酸蛋白激酶(pAkt)的影响。方法:将FLAG-PIPPH557A、FLAG-PIPP以及FLAG vector重组质粒转染到小鼠受精卵,用蛋白印记、免疫荧光染色以及活性检测方法分析FLAG-PIPPH557A对小鼠受精卵中丝氨酸(Ser)473位点磷酸化的苏氨酸蛋白激酶(pAkt Ser473)表达、定位以及活性的影响。结果:FLAG-PIPPH557A在小鼠受精卵中对pAkt Ser473的表达和活性的调节作用明显低于FLAG-PIPP的作用,两者间有显著差异(P<0.001);而且在小鼠受精卵中FLAG-PIPPH557A不能调节pAktSer473在细胞膜的定位。结论:PIPPH557A在小鼠1-细胞期受精卵中可以通过改变PIPP的活性,影响pAkt Ser473的表达、定位以及活性。

PIPP^(H557A)对小鼠受精卵有丝分裂期的调节作用

目的研究脯氨酸丰富的肌醇多磷酸5-磷酸酶(proline-rich inositol polyphosphate 5-phosphatase,PIPP)组氨酸557位点突变为丙氨酸时PIPPH557A在小鼠1-细胞期受精卵中对有丝分裂促进因子(MPF)的调节作用。方法将HA-PIPPH557A、HA-PIPP和/或HAvector转染到小鼠1-细胞期受精卵中,用激酶活性分析法和WesternBlotting方法检测小鼠受精卵中MPF活性以及pCdc2 Tyr15表达的变化。结果 HA-PIPPH557A对小鼠受精卵MPF活性影响较小,但可以降低pCdc2Tyr15的表达,与HA-PIPP的作用不同。结论 HA-PIPPH557A在小鼠受精卵中通过失活PIPP降低pCdc2 Tyr15的表达调节小鼠受精卵的有丝分裂。