副流感病毒5型的分子生物学研究进展

副流感病毒5型(Parainfl uenza virus 5,PIV5)为一类不分节段单股负链RNA病毒,可引起多种动物呼吸道感染,尤其可致犬病发"犬窝咳"。本文围绕PIV5病毒特征、基因组特征、编码蛋白、病毒的转录与复制以及PIV5相关疫苗的研究做一综述,旨在为PIV5疾病监测和PIV5相关疫苗研究提供科学依据。

副流感病毒5型SH蛋白单克隆抗体的制备

为获得副流感病毒5型SH蛋白的单克隆抗体,将构建的重组表达质粒pET43a-SH转化BL21(DE3)plys,经IPTG诱导表达、过镍柱纯化后将重组蛋白作为免疫原,免疫8周龄Balb/c雌性小鼠,并按常规方法制备杂交瘤细胞。通过间接免疫荧光方法进行筛选,获得3株杂交瘤细胞株,命名为5B9、3G8、4E11,并进行了培养特性、分泌抗体活性、分泌抗体亚类的鉴定。结果显示:3株细胞株连续传代10代均稳定分泌单克隆抗体,细胞上清液IFA效价稳定,分泌单克隆抗体亚型均为IgG2a。制备并纯化了1株(5B9)单克隆抗体,浓度为4.26 mg/mL,纯度不低于90%,IFA效价不低于1∶2000,与猪牛等常见病毒均无交叉反应。

虎源副流感病毒5型的分离鉴定及全基因序列分析

本研究旨在了解虎源副流感病毒5型(parainfluenza virus 5,PIV5)的遗传变异情况,阐明其基因组与遗传进化等特征。从广东省某动物园疑似虎PIV5感染的病料处理后接种Vero细胞并通过一系列的鉴定,将分离的毒株命名为HMZ。根据GenBank中PIV5基因序列,设计包含全长的12对特异性引物,并扩增其全基因组。将扩增产物克隆到pMD-18T载体上,对鉴定为阳性的重组质粒送检测序,并对基因全序列进行同源性分析及遗传进化分析。结果显示,HMZ与各病毒株全基因序列同源性为97.2%～99.8%。其中与1168-1 (KC237064.1)、ZJQ-221 (KX100034.1)以及Mammalian rubulavirus 5 (KY685075.1)亲缘性最高,为99.8%;而与D277的亲缘性最低,为97.2%。全基因系统进化树分析结果表明,HMZ与ZJQ-221、Mammalian rubulavirus 5属于同一分支。

副流感病毒5包膜糖蛋白的结构与功能

副流感病毒5(Parainfluenza virus 5,PIV5)属于单股负链不分节段的RNA病毒,迄今尚未发现PIV5与人类已知的疾病有关,主要被用作疫苗载体。其包膜上存在三种糖蛋白:融合(Fusion,F)蛋白、血凝素-神经氨酸酶(Hemaggulatinin-neuraminidase,HN)蛋白、小疏水性(Small hydrophobic,SH)蛋白。F蛋白能在同源性HN蛋白的协助下介导膜融合,HN蛋白具有受体识别、神经氨酸酶活性和促细胞融合活性,SH蛋白则在病毒致病机制中起作用。本文主要阐述了三种包膜糖蛋白的结构和功能,旨在为PIV5的研究提供一些参考。