抗PIWIL2蛋白多克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的:制备兔抗人PIWIL2(P-element-induced wimpy testislike 2,或称HIWI2)的多克隆抗体,并鉴定其特异性,初步探讨其在人正常及肿瘤组织中的分布。方法:人工合成特异性PIWIL2多肽,以马来酰胺活化匙孔血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)为载体构建多肽免疫原,致敏大白兔,制备兔抗人PIWIL2多克隆抗体。亲和层析法纯化抗体,ELISA和Western印迹鉴定特异性,人组织芯片行PIWIL2的免疫组化研究。结果:通过构建PIWIL2多肽-KLH载体复合物致敏大白兔,制备出兔抗人PIWIL2蛋白多克隆抗体。ELISA及Western印迹证实兔抗人PIWIL2抗体可特异性识别PIWIL2多肽。人组织芯片免疫组化染色显示,PIWIL2在肿瘤细胞的表达具有组织特异性,大多数正常和癌组织的平滑肌细胞胞质中呈阳性染色。结论:成功制备出兔抗人PIWIL2多克隆抗体,为后续研究奠定了基础。

PIWIL2蛋白在肝门部胆管癌组织和细胞株中的表达及临床意义

目的研究PIWIL2在肝门部胆管癌组织和细胞株中的表达及其与临床病理特征和根治性切除术预后的关系。方法采用免疫组织化学方法检测41例肝门部胆管癌和10例正常胆管组织中PIWIL2的表达；蛋白印迹和细胞免疫荧光技术检测人胆管癌细胞系QBC939和人正常胆管上皮细胞HIBEpic株中PIWIL2的表达。采用Kaplan—Meier法对胆管癌根治术后患者进行生存期的单因素及多因素分析。结果PIWIL2在肝门部胆管癌和QBC939细胞中的表达明显高于对照组织和HIBEpie细胞（P〈0．05）；PIWIL2在低、中分化胆管腺癌的表达明显高于高分化腺癌（P〈0．05）。单因素生存分析显示根治术后PIWIL2高表达的生存期较短（P〈0．05）。多因素分析显示PIWIL2的表达水平是影响胆管癌根治术预后的独立危险因素（P〈0．05）。结论PIWIL2在肝门部胆管癌组织和细胞系中表达上调，其表达水平与肿瘤分期及分化程度相关，是影响肝门部胆管癌根治切除预后的独立危险因素。