Piwil2重编程人成纤维细胞形成肿瘤干细胞的初步研究

目的初步观察精原干细胞自我更新基因Piwil2重编程人成纤维细胞的细胞形态及功能特征变化,建立Piwil2调控肿瘤干细胞发生过程的细胞实验模型。方法将携带Piwil2-GFP标记和空载目的基因GFP标记的慢病毒载体分别感染原代培养的小儿包皮成纤维细胞,筛选建立稳定表达Piwil2-GFP和GFP成纤维细胞系,观察细胞形态变化及肿瘤球形成过程,分析细胞染色体核型,进行裸鼠体内成瘤实验,RT-PCR、免疫组织化学进一步鉴定重编程后细胞的干细胞特征及三胚层分化的相关标志物。结果转染后第5天,Piwil2-GFP成纤维细胞开始由长梭形逐渐转变为圆形,第14天出现集落样生长状态,挑选集落重悬后培养形成类似"肿瘤球"样克隆,其细胞染色体核型呈超二倍体的异质性改变。"肿瘤球"样克隆裸鼠体内移植2周时100%形成肿瘤,肿瘤组织学及免疫组化鉴定为表达多种外胚层、中胚层及内胚层肿瘤标志物的恶性肿瘤,RT-PCR显示细胞及裸鼠肿瘤表达干细胞多能基因Oct-4、Nanog、Sox2,以及三胚层特征标志物。结论Piwil2重编程人成纤维细胞后的细胞具有干细胞及多潜能分化特性,以及显著的肿瘤细胞异质特性。

沉默 Piwil2表达对子宫颈癌细胞增殖和衰老的影响

目的采用shRNA沉默Piwil2基因的表达,探讨其对宫颈癌细胞株增殖和衰老特性的影响。方法通过脂质体Lipofectamine2000转染技术和嘌呤霉素筛选,建立稳转Sh-piwil2宫颈癌细胞株,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法验证沉默效果。采用细胞增殖实验、集落形成实验、细胞周期和细胞衰老等实验观察沉默Piwil2表达对宫颈癌细胞生物学特性的影响。结果建立稳定转染Sh-piwil2宫颈癌细胞株,与对照组相比,沉默Piwil2表达后细胞的增殖和集落形成能力均显著降低(P<0.05);细胞G0/G1期比例增加、S期比例明显下降(P<0.05),同时沉默Piwil2后细胞衰老数量明显增多(P<0.05)。结论沉默Piwil2基因可发挥抗宫颈癌作用,推测Piwil2基因可作为宫颈癌临床治疗的一个潜在靶点。

肿瘤抗原PIWIL2的HLA-A2限制性CTL表位鉴定

目的:鉴定肿瘤抗原PIWIL2的人类白细胞抗原A2(HLA-A2)限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位。方法:首先运用RT-PCR、Western blot方法检测PIWIL2在肿瘤细胞系MCF-7、SW480和HT-29中的表达情况,然后通过BIMAS、Rank Pep、Net MHC、Net CTL1.2及IEDB软件预测打分来选取PIWIL2的HLA-A2限制性的表位。候选表位肽通过标准的Fmoc化学合成法合成,结合力实验用于检测候选表位与T2A2细胞表面HLA-A2分子的结合能力,ELISPOT实验检测候选表位肽诱导CTL分泌IFN-γ的能力,体外细胞毒性实验检测候选肽诱导CTL的能力。结果:PIWIL2在肿瘤细胞系MCF-7、SW480和HT-29中均有表达。候选肽P485、P493、P965具有中等结合力。ELISPOT实验结果显示表位肽P485和P965诱导的CTL具有分泌IFN-γ的能力。细胞毒性实验结果显示表位肽P485和P965对MCF-7细胞均有一定的杀伤作用。结论:表位肽P485和P965是优秀的PIWIL2抗原HLAA2限制性CTL候选表位,可能成为新的抗肿瘤多肽免疫治疗疫苗的候选表位。

抗PIWIL2蛋白多克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的:制备兔抗人PIWIL2(P-element-induced wimpy testislike 2,或称HIWI2)的多克隆抗体,并鉴定其特异性,初步探讨其在人正常及肿瘤组织中的分布。方法:人工合成特异性PIWIL2多肽,以马来酰胺活化匙孔血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)为载体构建多肽免疫原,致敏大白兔,制备兔抗人PIWIL2多克隆抗体。亲和层析法纯化抗体,ELISA和Western印迹鉴定特异性,人组织芯片行PIWIL2的免疫组化研究。结果:通过构建PIWIL2多肽-KLH载体复合物致敏大白兔,制备出兔抗人PIWIL2蛋白多克隆抗体。ELISA及Western印迹证实兔抗人PIWIL2抗体可特异性识别PIWIL2多肽。人组织芯片免疫组化染色显示,PIWIL2在肿瘤细胞的表达具有组织特异性,大多数正常和癌组织的平滑肌细胞胞质中呈阳性染色。结论:成功制备出兔抗人PIWIL2多克隆抗体,为后续研究奠定了基础。

Piwil2调控宫颈癌细胞恶性生物学行为的机制探讨

背景与目的:Piwil2在肿瘤干细胞及癌前干细胞中高表达,通过转录和转录后调控机制调控多种基因表达,与肿瘤发生、发展密切相关。该研究探讨Piwil2与宫颈癌细胞恶性生物学行为之间的关系及可能的调控机制。方法:构建慢病毒载体p Lenti-CMV-Piwil2-SV40-EGFP和sh Piwil2质粒,分别转染He La和Si Ha细胞,建立过表达/沉默Piwil2表达稳转细胞株,反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)及蛋白[质]印迹法(Western blot)鉴定转染效果;采用CCK-8法检测细胞增殖能力;PI染色后,流式细胞术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)检测细胞周期;Western blot检测细胞增殖及周期相关调控蛋白表达;采用维拉帕米(verapamil)处理细胞,Hoechst 33342染色,FACS检测侧群(side polulation,SP)细胞比例;CCK-8法检测顺铂对细胞的杀伤活性。结果:过表达Piwil2上调He La和Si Ha细胞S期及G2/M期细胞比例,进而促进细胞增殖,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05);沉默Piwil2表达则细胞发生G0/G1期阻滞,抑制细胞增殖(P<0.05);Piwil2上调cyclin D1表达,提高Stat3磷酸化水平,下调p53表达;Piwil2显著上调He La和Si Ha细胞中SP细胞比例(P<0.01),提高宫颈癌细胞对顺铂的耐药性(P<0.01);沉默Piwil2则相反,显著提高对顺铂的敏感性。结论:Piwil2上调SP细胞比例,促进宫颈癌进展;Piwil2可作为宫颈癌的潜在治疗靶点。

人膀胱癌组织中肿瘤干细胞样细胞的分离培养及PIWIL2表达

目的从人膀胱移行细胞癌(BTCC)组织中分离培养肿瘤干细胞样细胞(CSLC),鉴定其生物学特性,并研究PIWIL2在CSLC中的表达和意义。方法收集12例不同临床分期BTCC患者组织标本,通过酶消化和原代培养相结合等方法处理,采用无血清悬浮培养法分离培养获得含CSLC的悬浮细胞球,流式细胞仪检测细胞表面分子标志CD133和CD44的表达,免疫磁珠分选系统分离CD133+CD44+细胞;采用半定量逆转录聚合酶链反应检测PIWIL2mRNA在CSLC中的表达;裸鼠皮下接种CS-LC,观察其成瘤能力。结果成功地从人膀胱癌组织分离培养获得可悬浮生长、稳定传代的CSLC,CSLC高表达CD133和CD44,裸鼠皮下接种1×104、1×105个CSLC均可全部成瘤,PIWIL2mRNA在CSLC的表达显著高于正常膀胱组织细胞。结论采用无血清悬浮培养法成功从人膀胱癌组织中分离获得CSLC,具有肿瘤干细胞特性,能高度表达PIWIL2,为靶向肿瘤干细胞的治疗提供了实验依据。

Piwil2蛋白在乳腺恶性叶状肿瘤组织中的表达及临床预后分析

目的:探讨Piwil2蛋白在乳腺恶性叶状肿瘤组织中的表达,分析Piwil2蛋白的表达与乳腺恶性叶状肿瘤相关临床病理因素之间的关系及对病人10年生存预后的影响。方法:收集乳腺恶性叶状肿瘤女性病人资料50例,同时选取因乳腺炎切除的乳腺正常组织70例作为对照组。采用免疫组织化学法分别检测Piwil2蛋白在乳腺恶性叶状肿瘤、正常乳腺组织中的表达。结果:Piwil2蛋白在乳腺恶性叶状肿瘤组织中的阳性表达率为86.00%,明显高于正常乳腺组织的0.00%,差异有统计学意义(χ^(2)=93.82,P<0.01)。Piwil2蛋白的阳性表达率与病人肿瘤直径≥10 cm、Ki-67≥25%、瘤细胞异型性、CyclinD1蛋白阳性表达及核分裂≥15个/10HPF有关(P<0.05~P<0.01),而与病人年龄及术后是否复发无关(P>0.05)。乳腺恶性叶状肿瘤Piwil2蛋白阳性表达的病人10年生存率(65.12%)低于Piwil2蛋白阴性表达病人(100.00%),差异有统计学意义(χ^(2)=3.95,P<0.05)。结论:Piwil2蛋白的异常表达参与了乳腺恶性叶状肿瘤的演变、发展,也可作为临床预测病人生存预后的参考指标。

Piwil2在三阴性乳腺癌中的表达及临床意义分析

目的:探讨Piwil2在三阴性乳腺癌中的表达及临床意义。方法:收集本校附属医院病理科确诊为三阴性乳腺癌的40例患者作为观察组,另选40例非乳腺癌患者作为对照组,对所有患者的Piwil2表达情况进行比较,并对Piwil2在不同病理分期三阴性乳腺癌中的表达进行观察。结果:Piwil2在三阴性乳腺癌中的阳性表达率为82.50%,对照组为7.50%,差异有统计学意义(P<0.05),TNM分期越高,患者Piwil2阳性表达率越高;Pearson相关性分析显示,Piwil2与三阴性乳腺癌TNM分期呈正相关(r=0.756,P<0.05)。结论:Piwil2与三阴性乳腺癌的肿瘤细胞生长增殖呈正相关,可为有效分子靶向治疗乳腺癌提供参考依据。

Piwil2在三阴性乳腺癌中的表达及与临床分期、肿瘤直径及淋巴结转移的关系

目的探讨Piwil2在三阴性乳腺癌(TNBC)中的表达及与临床分期、肿瘤直径及淋巴结转移的关系。方法从选取2016年3月至2018年3月在湖南中医药大学第一附属医院治疗的40例患者为研究对象,对其进行Piwil2检测,观察不同临床分期、肿瘤直径及淋巴结转移患者的Piwil2表达情况。结果40例中Piwil2阳性率为70.00%。不同临床分期的TNBC患者Piwil2表达有明显差异(P<0.05);肿瘤直径越大、淋巴结转移患者的Piwil2阳性表达率明显较高(P<0.05)。结论TNBC的Piwil2阳性表达率较高,且随着临床分期越高、肿瘤直径越大、淋巴结转移,其阳性率表达率越高。

piwil2在口腔鳞状细胞癌患者中的表达及手术治疗对美观的影响研究

目的探讨piwil2在口腔鳞状细胞癌患者中的表达及手术治疗对整形美容的影响。方法选择2010年1月-2017年1月口腔鳞状细胞癌患者56例作为对象,所有患者均拟行手术治疗,术中取病灶组织及癌旁组织(距离病灶≥3cm),术后对患者进行3年随访。采用免疫组织化学法测定不同组织中piwil2蛋白表达水平;查阅病理资料,记录不同性别、年龄、肿瘤直径、分化程度及肿瘤分期状态下piwil2阳性率。所有患者术后均常规进行口腔整形美容,并借助同意问卷对患者美容前、后整体美观、口腔形态、面部外貌、口腔咀嚼功能及吞咽功能进行调查,记录患者生存期,比较两组piwil2表达水平、美观、生存期。结果所有患者均顺利完成手术,术后1例患者发生感染,患者球愈合良好,未见明显愈合不良,获得良好的美观。口腔鳞状细胞癌患者病灶组织中piwil2蛋白阳性率高于癌旁组织中(P<0.05);免疫组化结果表明:piwil2蛋白在口腔鳞状细胞癌患者病灶组织中阳性率较高以深、棕黄色为主,而在癌旁组织中黄色面积相对较小;口腔鳞状细胞癌患者中piwil2蛋白阳性率与性别、年龄、肿瘤部位无统计学意义(P>0.05);与肿瘤直径、TNM分期及分化类型具有统计学意义(P<0.05);口腔鳞状细胞癌患者手术后整体美观、口腔形态、面部外貌、口腔咀嚼功能及吞咽功能评分均高于手术前(P<0.05)。结论piwil2在口腔鳞状细胞癌患者中呈高表达,其阳性率能反映患者疾病严重程度,患者手术后加强其整形美容可获得良好的口腔美观,值得推广应用。

乳酸菌培养上清液下调Piwil2基因增强三阴性乳腺癌细胞对顺铂的敏感性

目的探讨乳酸菌培养上清液(lactobacilli supernatants,LS)处理乳腺癌细胞对顺铂(cisplatin,DDP)敏感性的影响及其机制。方法采用CCK-8和Western blot检测不同浓度DDP(0、1、2、3、4、5μg/m L)和LS(体积分数分别为1%、5%、10%、20%)对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和Piwil2基因表达的影响;瞬时转染Piwil2 siRNA沉默MDA-MB-231细胞中Piwil2基因表达,Western blot检测其沉默效果,CCK-8检测Piwil2基因沉默后对MDA-MB-231细胞增殖的影响;2μg/m L DDP联合不同浓度LS(体积分数分别为1%、5%、10%、20%)作用MDA-MB-231细胞,观察细胞增殖抑制效应和Piwil2蛋白表达的改变。结果高浓度DDP(≥3μg/m L)可抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P<0.05),而低浓度DDP(≤2μg/m L)不能有效抑制细胞增殖;DDP以剂量依赖性方式上调Piwil2蛋白的表达;siRNA沉默Piwil2表达可恢复2μg/m L DDP对细胞增殖的抑制。与对照组(乳酸菌培养基,MRS)比较,LS以剂量依赖性方式下调Piwil2蛋白的表达,但并不影响细胞的增殖;与单用2μg/m L DDP比较,2μg/m L DDP联合20%LS处理可显著下调Piwil2蛋白的表达并抑制细胞增殖(P<0.05)。结论三阴性乳腺癌细胞中Piwil2的高表达可导致细胞对顺铂敏感性的降低,乳酸菌培养上清液可通过下调Piwil2基因的表达增强三阴性乳腺癌细胞对顺铂的敏感性。

肝细胞肝癌中Piwil2表达与临床病理特征及预后的关系

目的探讨肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中Piwil2的表达及其与HCC的发生与演进、临床病理特征、预后的关系。方法利用组织芯片技术和免疫组化PV 6000法检测163例HCC组织及对应癌旁非瘤组织中Piwil2的表达,并进行统计学分析。结果HCC组织中Piwil2的高表达率为47.85%(78/163),而癌旁非瘤组织中未发现高表达病例,两者差异有统计学意义(χ^2=102.532,P<0.001)。Piwil2表达与HCC病理分级、TNM分期、包膜侵犯、脉管侵犯均有关(P均<0.05),病理分级Ⅲ+Ⅳ级、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期的患者高表达率高于Ⅰ+Ⅱ级、Ⅰ+Ⅱ期的患者(73.33%vs 26.14%,P<0.001;68%vs 44.2%,P=0.028)。Kaplan-Meier预后生存分析结果显示,Piwil2高表达组患者的总生存期和无瘤生存期较低表达组短(P均<0.05);有包膜侵犯、有脉管侵犯、病理分级Ⅲ+Ⅳ级、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期的患者Piwil2高表达组总生存期和无瘤生存期比低表达组短(P均<0.05)。Cox回归分析结果发现,Piwil2表达、TNM分期是影响HCC患者术后无瘤生存期和总生存期的独立影响因素(P<0.05)。结论Piwil2可能参与HCC的发生、发展,其高表达可促使癌细胞增殖与转移,并可影响患者术后生存时间。检测Piwil2在HCC中的表达具有重要的临床价值,并有望成为HCC治疗的新靶标。

圆斑星鲽piwil2基因的克隆与表达分析

本研究采用RACE末端扩增方法,得到全长为3872 bp的圆斑星鲽(Verasper variegatus)piwil2基因序列,命名为Vvpiwil2,开放阅读框(ORF)长为3192 bp,编码1063个氨基酸,5¢-UTR和3¢-UTR的长度分别140 bp和540 bp。基于ExPASy、SMART、Signal4.1和NCBI的保守结构域(CDD)数据库在线分析对蛋白序列结构进行预测,推断Vvpiwil2编码的氨基酸分子量为118.6 kDa,理论等电点为9.02,无跨膜结构及信号肽,有3个结构域:ArgoL1结构域、PAZ结构域及PIWI结构域。利用实时荧光定量PCR技术对圆斑星鲽不同发育时期的胚胎、仔稚鱼以及雌雄成鱼的不同组织表达模式进行分析。结果显示,Vvpiwil2基因从胚胎发育早期至高囊胚期均大量表达,之后呈下降趋势,直至孵化阶段。由于胚胎从卵裂至囊胚时期的发育过程主要受细胞质成分引导,直至原肠早期,mRNA开始大量转录合成,实现由母源型向合子型的过渡,推断Vvpiwil2是母源性基因。孵化后仔稚鱼68 d时,Vvpiwil2基因表达量显著高于其他时期,表明Vvpiwil2的功能可能与圆斑星鲽性腺分化过程相关;Vvpiwil2基因在雌雄成鱼性腺中的表达量显著高于其他组织,且卵巢中的表达量显著高于精巢,推测Vvpiwil2基因在卵巢功能的维持中发挥重要作用。本研究结果为解析圆斑星鲽性别决定机制提供了新的靶标基因,为建立全雌化苗种繁育技术打下坚实的理论基础。

Piwil2基因表达诱导NIH3T3细胞恶性转化

目的通过建立稳定表达外源Piwil2基因的NIH3T3细胞,初步探讨Piwil2基因对NIH3T3细胞生物学特性的调控作用。方法通过脂质体介导的方法和G418的筛选,建立稳定表达Piwil2基因的NIH3T3细胞株,之后利用细胞集落形成实验、细胞增殖实验、细胞周期分析和裸鼠成瘤实验,观察Piwil2基因表达对NIH3T3细胞的生物学特性的影响。结果建立了稳定过表达Piwil2基因的NIH3T3细胞株。与对照组空白载体细胞系相比,过表达Piwil2基因的NIH3T3细胞增殖和集落形成能力增强;细胞周期G0/G1期减少、S期明显升高;接种裸鼠后形成的肿瘤体积显著大于对照组。结论 Piwil2基因在NIH3T3细胞中稳定表达具有诱导正常NIH3T3细胞发生恶性转化的重要生物功能。

Piwil2基因在肝癌组织中mRNA及蛋白的表达

目的:检测肝癌组织中Piwil2基因mRNA和蛋白的表达,进而探讨Piwil2基因在临床诊断中的意义.方法:采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot印迹技术,检测了70例肝癌及其对应癌旁组织中PiWil2基因mRNA及其蛋白的表达并结合临床资料进行分析.结果:PiWil2 mRNA在肝癌中的表达量相对值高于癌旁的肝脏组织的表达量(0.91±0.04vs0.32±0.04,P<0.05).Piwil2基因mRNA的表达与患者的肝内转移、分化程度及癌栓等病理因素方面的差异有统计学意义(P<0.05).蛋白在肝癌中的表达均高于对应的癌旁组织.Piwil2的蛋白质表达与患者的肝内转移及癌栓等病理因素方面的差异有统计学意义(P<0.05).Piwil2基因mRNA的表达与Piwil2的蛋白质的表达有相关性(P<0.05).结论:Piwil2有可能成为肝癌的检测及治疗的一种分子标志物.

Piwil2与肿瘤的关系及研究进展

Piwil2属于Argonaute蛋白家族的PIWI亚家族,在人类中目前已发现,Argonaute蛋白家族的两个亚族:一类为类似植物拟南芥Argonaute1的A-GO亚族,主要为AGO1、AGO2、AGO3、AGO44个亚型:另一类为类似果蝇中Piwi的PIWI亚族,主要为Piwil1(HIWI)、Piwil2(HILI)、Piwil 3、Piwil 4(HIWIL2)4个亚型[1]。

沉默PIWIL2抑制口腔鳞癌细胞CAL27增殖、侵袭、迁移和裸鼠移植瘤生长

目的探究精原干细胞自我更新基因PIWIL2对口腔鳞癌细胞CAL27增殖、侵袭、迁移和裸鼠移植瘤生长的影响。方法将口腔鳞癌细胞CAL27随机分为空白组(不作处理)、阴性对照组(转染慢病毒阴性对照病毒scramble)和PIWIL2-shRNA慢病毒组(转染PIWIL2-shRNA慢病毒)。采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测细胞中PIWIL2 mRNA及蛋白表达水平,集落形成实验检测细胞增殖能力,Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力,JC-1探针检测线粒体膜电位变化,蛋白印迹法检测Ki67、血管内皮生长因子(VEGF)、E-cadherin、N-cadherin、Snail表达水平。裸鼠皮下注射慢病毒感染的CAL27细胞构建裸鼠移植瘤模型,免疫组化染色检测肿瘤组织中VEGF的表达水平,观察沉默PIWIL2对肿瘤生长的影响。结果PIWIL2-shRNA慢病毒感染后CAL27细胞中PIWIL2 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与阴性对照组比较,PIWIL2-shRNA慢病毒组细胞集落形成率,侵袭细胞数,划痕愈合率,细胞中Ki67、VEGF、N-cadherin、Snail蛋白表达水平,移植瘤重量、体积,移植瘤组织中VEGF阳性表达率显著降低/减少,细胞中E-cadherin蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。JC-1探针检测结果显示,PIWIL2-shRNA慢病毒感染后细胞中红色荧光减少,绿色荧光增多。结论沉默PIWIL2可明显抑制口腔鳞癌细胞CAL27增殖、侵袭、迁移及裸鼠移植瘤的生长。

piwil2与口腔鳞状细胞癌手术治疗预后的相关性

目的探讨piwil2在口腔鳞状细胞癌患者中的表达及与手术治疗预后的相关性。方法选择2010年1月—2017年1月口腔鳞状细胞癌患者56例作为对象,所有患者均拟行手术治疗,术中留取病灶组织及癌旁组织(≥3 cm)。采用免疫组织化学法测定两种组织中piwil2蛋白阳性率。参考WHO实体瘤标准对患者手术预后进行评估,并完成3年随访,采用SPSS Pearson相关性分析软件对口腔鳞状癌患者piwil2蛋白阳性率与手术治疗预后生存期进行相关性分析。结果病灶组织中piwil2阳性率高于癌旁组织(P<0.05);组织免疫组化染色显示:病灶组织免疫组化下的呈棕黄色,而癌旁组织中表达水平较低或不表达;56例患者均完成手术治疗,患者中完全缓解(complete relief,CR)+部分缓解(Partial remission,PR)患者32例,占57.14%;术后对患者进3年随访,38例存活,3年生存率为67.86%。SPSS Pearson相关性分析结果表明:piwil2蛋白阳性率与患者预后呈负相关性(r=0.735,P=0.000)。结论piwil2在口腔鳞状细胞癌患者中呈高表达,给予手术治疗能获得较高近期疗效,能延长患者寿命,且与piwil2存在相关性,可指导临床治疗。

Piwil2蛋白和CyclinD1蛋白在乳腺恶性叶状肿瘤组织中表达及其相关性研究

目的探讨Piwil2蛋白和细胞周期蛋白D1(CyclinD1蛋白)在乳腺恶性叶状肿瘤组织中的表达及其相关性。方法收集1990年1月至2015年2月陆军第八十一集团军医院病理科和解放军总医院第七医学中心病理科存档的60例女性乳腺恶性叶状肿瘤患者的资料进行回顾性分析,同时选取60例正常乳腺组织作为对照组。采用免疫组织化学(EnVision TM)法分别检测乳腺恶性叶状肿瘤组织和正常乳腺组织中Piwil2蛋白和CyclinD1蛋白的阳性表达情况,分析其表达与乳腺恶性叶状肿瘤相关临床病理因素之间的关系以及Piwil2蛋白和CyclinD1蛋白的相关性。结果Piwil2蛋白和CyclinD1蛋白在乳腺恶性叶状肿瘤组织中的阳性表达率分别为88.33%(53/60)、76.67%(46/60),但在正常乳腺组织均未表达。肿瘤直径≥9 cm、Ki-67≥25%、瘤细胞异型显著以及核分裂象≥15个/10个高倍镜视野的患者Piwil2蛋白表达水平高于肿瘤直径<9 cm、Ki-67<25%、瘤细胞异型不显著以及核分裂象<15个/10个高倍镜视野者(P<0.05)。Ki-67≥25%、瘤细胞异型性显著及核分裂象≥15个/10个高倍镜视野者CyclinD1蛋白的表达水平高于Ki-67<25%、瘤细胞异型不显著以及核分裂象<15个/10个高倍镜视野者(P<0.05)。乳腺恶性叶状肿瘤组织中Piwil2蛋白的表达与CyclinD1蛋白的表达呈正相关(r=0.413,P<0.01)。结论Piwil2蛋白和CyclinD1蛋白的过表达参与了乳腺恶性叶状肿瘤的形成,其表达水平可作为评判瘤细胞分裂、增殖的参考指标。

Piwil2、Bcl-2在乳腺恶性叶状肿瘤组织中的表达及相关性

目的通过检测干细胞蛋白Piwil样蛋白2(Piwil2)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)在乳腺恶性叶状肿瘤患者肿瘤组织中的表达,对二者在乳腺恶性叶状肿瘤组织中的表达情况与相关性进行分析。方法选取2010年9月至2015年10月中国人民解放军陆军第81集团军医院确诊的乳腺恶性叶状肿瘤患者30例作为乳腺恶性叶状肿瘤组,另选取同期32例乳腺纤维腺瘤患者作为对照组。免疫组化法检测乳腺恶性叶状肿瘤组和对照组肿瘤组织中Piwil2、Bcl-2的表达情况,分析Piwil2、Bcl-2表达的相关性及两者与乳腺恶性叶状肿瘤临床病理参数之间的关系;分析Piwil2、Bcl-2表达与患者术后复发的关系;使用COX回归分析影响乳腺恶性叶状肿瘤术后复发的因素。结果Piwil2、Bcl-2在恶性叶状肿瘤组中的阳性率均明显高于对照组(P<0.05)。乳腺恶性叶状肿瘤组织中Piwil2、Bcl-2的表达具有一定关系(P<0.05)。有淋巴结转移的乳腺恶性叶状肿瘤组织中Piwil2、Bcl-2阳性率分别高于无淋巴结转移的乳腺恶性叶状肿瘤组织(P<0.05)。Piwil2、Bcl-2阳性表达患者术后复发率明显高于对应的阴性表达患者(P<0.05)。COX多因素分析发现,淋巴结转移、Piwil2阳性表达和Bcl-2阳性表达均是影响患者术后复发的独立危险因素(P<0.05)。结论乳腺恶性叶状肿瘤患者肿瘤组织中Piwil2、Bcl-2阳性率明显升高,二者表达与患者临床特征及术后复发有关。