顺铂通过Notch4信号通路增强口腔鳞癌干细胞的自我更新能力

目的:研究Notch4信号通路对口腔鳞癌PJ15和PJ41细胞的肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)自我更新能力的影响及其作用机制。方法:利用TCGA数据库分析Notch4基因在头颈部肿瘤中的表达。2μmol/L顺铂处理口腔鳞癌PJ15和PJ41细胞48 h,再加入Notch通路抑制剂DAPT作用24 h,采用流式细胞术检测CSC比例,Western blotting法和qPCR法检测CSC标志物(Sox2、Bmi-1、Oct4、Nanog)和Notch4信号通路中的下游基因(JAG1、HEY1、HEY2、HES1、HES2、DLL4等)的表达。采用siRNA技术敲降Notch4,Western blotting法和q PCR法检测si-Notch4和顺铂对CSC标志物表达水平的影响,干细胞成球实验检测CSC的自我更新能力。结果:头颈部肿瘤组织中Notch4基因呈高表达(P=0.046)。顺铂处理后,PJ15和PJ41细胞中NICD4和CSC标志物(Sox2、Bmi-1、Oct4、Nanog)和Notch4信号通路的下游基因(JAG1、HEY1、HEY2、HES1、HES2、DLL4)的表达水平较对照组均显著增加(均P<0.05),ALDH1阳性细胞群体比例显著增加(P<0.05);再加入Notch通路抑制剂DAPT作用24 h后上述基因表达量均显著下降(P<0.05或P<0.01)。敲降Notch4后,与对照组相比,si-Notch4组PJ15细胞[(1.33±0.47)vs(8.00±0.82)个,P<0.01]和PJ41细胞[(1.00±0.82)vs(7.67±1.25)个,P<0.01]球体的数量和大小均显著减少;再加入2μmol/L DDP作用24 h,si-Notch4组Nanog和Bmi-1基因表达量与对照组无显著差异。结论:激活Notch4信号通路可增加口腔鳞癌PJ15和PJ41细胞的干细胞自我更新能力。