高原缺氧复合梭曼中毒脑Ca^(2+)/CaMPKⅡ活性抑制机理

目的 探讨缺氧复合梭曼中毒脑组织Ca2 + /CaMPKⅡ活性抑制机理。方法 本实验采用放射免疫技术 ,观察模拟 4 0 0 0m高原缺氧复合梭曼中毒后 12 ,2 4 ,4 8h脑组织CaM含量以及钙 /钙调蛋白激酶Ⅱ (Ca2 + /CaM -PKⅡ )活性的变化影响。结果 高原缺氧复合梭曼中毒后脑组织CaM含量在中毒后 2 4h明显高于单纯中毒组、缺氧对照组和正常对照组 ;缺氧中毒组脑组织Ca2 + /CaM -PKⅡ活性在中毒后 4 8h明显低于单纯中毒组、缺氧对照组和正常对照组 ;而钙通道拮抗剂尼莫地平 (Nimodipine)可对抗这种改变。结论 CaM、Ca2 + /CaM -PKⅡ在高原缺氧复合梭曼中毒大鼠脑组织损伤机理中起了重要的作用。

可溶性和颗粒性Ca^（2＋）／CaM PKⅡ对脑缺血与再灌注敏感程度差异性的研究

研究了蒙古沙土鼠脑缺血和再灌注时１０００００×ｇ离心的大脑皮质可溶性和颗粒性Ｃａ（２＋）／ＣａＭＰＫⅡ活性变化的规律性及差异性。实验结果为：（１）随着脑缺血时间的增加，两部分酶活性均逐渐降低，但可溶性酶活性比颗粒性酶活性下降得更快。（２）随着脑缺血后再灌注时间的延长，两部分酶活性均逐渐升高，但可溶性酶活性比颗粒性酶活性上升得更快。结果表明，可溶性酶比颗粒性酶对脑缺血与再灌注更敏感，该酶活性的变化反映了脑缺血的状态，是脑缺血的重要生物化学指标，可用以研究缺血性脑损伤机制和治疗。

db-cAMP对转化细胞增殖抑制及其对CaM水平和PKⅡ活性的影响

目的 探讨双丁酰 环核苷酸 (db cAMP)对转化细胞增殖及细胞表型作用的机理。 方法 以流式细胞光度术 (flowcytometry ,FCM)、软琼脂集落形成、放射免疫、Northern印迹和激酶活性分析等方法观察db cAMP对转化的C3H1 0 T1 2 小鼠成纤维细胞增殖、细胞表型、钙调素 (calmodulin ,CaM)表达及蛋白激酶Ⅱ (proteinkinaseⅡ ,PKⅡ )活性的影响。 结果 db cAMP(1mmol L)使C3H1 0 T1 2 转化细胞增殖及软琼脂集落形成能力受到显著抑制 ,转化细胞中CaM的表达及PKⅡ活性明显高于正常细胞 ,经db cAMP处理后也受到明显抑制。

红花对脑缺血Ca^（2＋）／CaM－PKⅡ活性抑制作用的影响

研究了红花对蒙古沙土鼠脑缺血和再灌注时４００００ｒ／ｍｉｎ离心大脑皮质可溶住Ｃａ２＋／ＣａＭ－ＰＫⅡ活性的影响。实验结果如下：（１）脑缺血１０ｍｉｎ组酶活性为假手组的１３．６％；而缺血前给药组（６．７ｇ红花／ｋｇ体重）酶活性为假手组的７９．４％。（２）红花拮抗脑缺血诱导该酶活性的抑制具有剂量依赖性。（３）脑缺血１０ｍｉｎ后给生理盐水再灌注２ｈ，酶活性恢复至假手术组的９２％，而缺血后给药再灌注不能加速酶活性的恢复。

红花黄色素对脑缺血Ca^(2+)/CaMPKⅡ活性抑制作用的影响

目的 研究红花黄色素、红色素对蒙古沙土鼠脑缺血和再灌注时 10 5×g离心大脑皮质可溶性Ca2 + /Ca2 + /CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ (Ca2 + /CaMPKⅡ )活性的影响。方法 蒙古沙土鼠双侧颈总动脉结扎造成脑缺血模型 ;以3 2 P掺入法测定Ca2 + /CaMPKⅡ活性。结果 ①缺血前 2 0min给等体积生理盐水再脑缺血 10min组酶活性为假手术组的 11.4% ;而缺血前给药组 (黄色素 0 .32g/kg)酶活性为假手术组的 83.3% ;②脑缺血 10min后给生理盐水再灌注 7d ,酶活性恢复至假手术组的 72 .6 % ,而缺血后给药再灌注不能加速酶活性的恢复 ;③缺血前给药组 (红色素 1.5 2g/kg)酶活性为假手术组的 14.6 %。结论 红花红色素对拮抗脑缺血诱导该酶活性的抑制没有作用。红花黄色素对缺血性脑损伤有保护作用。

两类钙通道拮抗剂对缺氧大鼠海马脑片Ca^(2+)/CaM PKⅡ活性的影响

用离体孵育的大鼠海马脑片模型，研究了两类钙通道拮抗剂对缺氧海马脑片Ca2+/CaM PKⅡ活性的影响。结果如下：(1)缺氧30min导致大鼠海马脑片Ca2+/CaM PKⅡ活性降至对照组的16.4%；(2)100μmol/L氯胺酮可部分拮抗缺氧导致的酶活性下降，使之恢复至对照组的40.6%；(3)10μmol/L苄丙咯可使缺氧导致的酶活性下降恢复至对照组的35.8%；(4)15μmol/L苄丙咯和50μmol/L氯胺酮联合用药可产生协同作用，使缺氧导致的酶活性下降恢复至对照组的63.8%。由此得出结论：缺氧对海马脑片Ca2+/CaM PKⅡ活性的抑制作用与NMDA受体门控的钙通道和Na+/Ca2+交换通道异常开放有关。

两类Ca^(2+)通道拮抗剂对脑缺血时Ca^(2+)/CaM PK Ⅱ活性抑制的保护作用

本文以蒙古沙土鼠双颈总动脉结扎（ＢＣＡＯ）前脑缺血模型Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性变化为指标，研究了以氯胺酮（ＫＴ）、右美沙芬（ＤＭ）、苄丙咯（ＢＰ）及硝苯吡啶（ＮＤ）为代表的配体门控Ｃａ２＋通道（ＬＧＣＣ）及电压门控Ｃａ２＋通道（ＶＧＣＣ）两类Ｃａ２＋通道拮抗剂对缺血性脑损伤的保护作用。结果如下：（１）脑缺血后，胞浆型及颗粒型Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性均明显下降；（２）缺血前单独用药，ＫＴ、ＤＭ、ＢＰ及ＮＤ对酶活性均具有剂量依赖性的保护作用；（３）与单独用药相比，联用异类药，ＫＴ＋ＢＰ、ＫＴ＋ＮＤ及ＤＭ＋ＢＰ的保护作用显著增高，而联用同类药，ＢＰ＋ＮＤ及ＫＴ＋ＤＭ的保护作用无明显增高。结果提示：脑缺血中，ＬＧＣＣ及ＶＧＣＣ两类Ｃａ２＋通道均参与了缺血性脑损伤过程；两类Ｃａ２＋通道的单一拮抗对缺血性脑损伤均有保护作用，而联合拮抗效果更佳。

低温再灌注对海马Ca^(2+)/CaM PK Ⅱ活性及迟发性神经元死亡的影响

目的研究低温再灌注对海马Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性恢复及迟发性神经元死亡（ＤＮＤ）的影响。方法全脑缺血１０ｍｉｎ后予以不同时间低温再灌注，测定海马Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性，并于７ｄ后观察海马ＤＮＤ情况。结果（１）低温再灌注４ｈ、８ｈ、１６ｈ时，Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性分别为常温再灌注相同时间组的１０３．７％（Ｐ＞０．０５）、１１８．８（Ｐ＜０．０５）和１２４．８％（Ｐ＜０．０５），ＣＡ１区神经元密度分别为常温再灌注组的１０６．７％（Ｐ＞０．０５）、３２６．７％（Ｐ＜０．０５）、８０７．１％（Ｐ＜０．０５）。结论（１）低温再灌注４ｈ对海马Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性恢复和ＤＮＤ无显著影响，但８ｈ和１６ｈ则对两者均有显著的保护作用；

脑缺血和再灌注时Ca^（2＋）／CaMPKII活性的变化及苄丙咯的影响

本文以蒙古沙土鼠双侧颈总动脉结扎造成脑缺血模型，研究了脑缺血和再灌注时大脑Ｃａ￣２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性变化及苄丙咯对其活性的影响，实验结果：（１）Ｃａ￣２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性随脑缺血时间的延长而逐渐降低，脑缺血１０分钟，酶活性显著低于正常组（Ｐ＜０．０１）；（２）脑缺血１０分钟再灌注２０分钟，酶活性部分恢复，与缺血１０分钟组相比，酶活性有明显上升（Ｐ＜０．０１），但缺血２０分钟再灌注，其活性不再恢复；（３）缺血前２０分钟腹腔注射苄丙咯，在缺血１０分钟时酶活性明显高于对照组（Ｐ＜０．０ｌ）。结果提示Ｃａ￣２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性对缺血非常敏感；苄丙咯对该酶活性有一定保护作用。

螺旋链霉菌U-1941中PKSII型基因在淡青链霉菌tcmK变异株中的克隆(I)

利用螺旋霉素产生菌螺旋链霉菌(S trep tomy ces sp iramy ceticus U-1941)中发现的PK S II型基因,经测序和同源性比较证明在4174bp片段中含有PK S II型K S(K Sα)基因,该基因(pCG 4-K,aspA)由1229bp组成编码432个氨基酸,与产二素链霉菌A lpA和淡青链霉菌T cmK同源性分别为74.4%和69.7%。将含aspA基因的重组质粒pCG 4在四并菌素(tetracenom yc in C)产生菌(S.g laucescens GLA 4-26)tcmK基因缺陷型变异株中进行克隆,TLC分析表明转化子的发酵产物比对照株多一个明显的黄色斑点,该物质经分离、提纯后分析确定为一个含苯式结构的小分子化合物A S-5。

利血平化沙土鼠脑缺血钙调素蛋白激酶Ⅱ活性的研究

目的观察耗竭单胺类神经递质对缺血性纹状体、海马和皮质神经元ＣａＭＰＫⅡ活性的影响。方法采用利血平化沙土鼠双侧颈总动脉结扎造成全脑缺血模型，用放射性３２Ｐ－ＡＴＰ掺入法测定ＣａＭＰＫⅡ活性。结果利血平化对沙土鼠脑缺血３个脑区ＣａＭＰＫⅡ活性均有保护作用。在纹状体、海马和皮质，利血平化沙土鼠缺血１０ｍｉｎ，酶活性比对照组酶活性分别升高５５％、５８％和１９％；缺血２０ｍｉｎ，酶活性分别升高５８％、１２４％和５５％。

罗布泊盐湖可培养放线菌多样性及PKS Ⅱ功能基因筛选

目的:挖掘新疆罗布泊盐湖可培养放线菌的资源和探索该环境放线菌产生Ⅱ型聚酮合成酶(PKS)基因的潜能。方法:从新疆罗布泊盐湖采集到10份样品,采用不同盐浓度的9种选择性培养基分离放线菌,并通过PCR技术扩增其16S r DNA序列、聚酮合成酶(PKS)基因分子筛选,测序后进行系统发育分析和BLAST比较研究。结果:试验结果共得42株放线菌,包括6个属,链霉菌属(Streptomyces)和拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)的类群最多,糖霉菌属(Glycomyces)、放线多孢菌属(Actinopolyspora)、微球菌(Micrococcus)和栖白蚁菌属(Isoptericola)的菌株相对较少。研究获得新的放线菌分类单元,其16S r DNA基因序列与已知菌株的序列相似性低于97%。42株放线菌中共有29株产生PKSⅡ基因,主要是链霉菌属和拟诺卡氏菌属。结论:研究结果表明罗布泊盐湖放线菌具有丰富的资源多样性和较强合成抗生素的潜在能力。

谷氨酸在低氧性脑损伤中的作用

目的探讨谷氨酸(Glu)在低氧性脑损伤的作用机制。方法实验采用氨基酸分析和放免技术,研究缺氧后12,24,48h脑组织Glu和钙调蛋白(CaM)含量的变化以及钙/钙调蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/CaM-PKⅡ)活性的影响及其机制。结果缺氧组脑组织Glu、CaM含量在缺氧后48h明显高于12,24h和对照组;缺氧组脑组织Ca2+/CaM-PKⅡ活性在缺氧后48h明显低于12,24h和对照组;而N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂地佐环平(MK-801)和钙通道拮抗剂尼莫地平(nimodipine)可对抗这种改变。结论缺氧后Glu的兴奋毒引起脑损伤和Ca2+/CaM-PKⅡ的活性下降,主要由NMDA受体介导和胞外Ca2+内流增加有关。

基因克隆产生杂合蒽环类抗生素研究进展

随着人们对芳香聚酮体的生物合成机理的深入了解 ,将有越来越多的 型 PKS基因和 DOS基因被克隆。人们有可能应用基因克隆或组合生物合成方法对现有抗生素进行改造或创造出结构新颖的杂合化合物。主要介绍了应用基因克隆的方法产生的杂合蒽环类抗生素的研究进展 ,同时还介绍了蒽环类抗生素的生物合成 ,链霉菌基因克隆策略与组合生物合成 。

两种Ca^（2＋）依赖性蛋白激酶对脑缺血的敏感性研究

以蒙古沙土鼠（ｍｏｎｇｏｌｉａｎｇｅｒｂｉｌ）双侧颈动脉结扎为缺血模型，研究了缺血１０ｍｉｎ及复流６ｈ后的大脑皮质可溶性及颗粒性ＰＫⅡ和ＰＫＣ这两种蛋白激酶的活性变化。发现缺血１０ｍｉｎ后可溶性和颗粒性ＰＫⅡ的活性分别下降为对照组的５９．１％和６２．５％，而复流６ｈ后又恢复至对照组的８６．３％和８４．２％；可溶性和颗粒性ＰＫＣ的活性分别下降为对照组的８４．４％和８４．５％，复流６ｈ后恢复至对照组的９０．４％和８９．４％。结果提示，ＰＫⅡ比ＰＫＣ对脑缺血更敏感。

磷酸化和脱磷酸化对牛脑63kD环核苷酸磷酸二酯酶同工酶活性的调节

本文报道了CaM依赖性磷酸化和脱磷酸化对牛脑63kD PDE同工酶活性的调节作用。实验结果如下:(1)在存在Ca^(2+)和CaM时,提纯的牛脑Ca^(2+)/CaM-PK Ⅱ能催化牛脑63kD PDE同工酶磷酸化。最大磷酸参入量是1mol/mo1亚基;(2)在Ni^(2+)和CaM存在时,提纯的牛脑钙调神经磷酸酶能催化磷酸化型63kDPDE同工酶脱磷酸化;(3)CaH^(2+)对磷酸化型63kD PDE同工酶的半激活浓度(AC_(50))高于非磷酸化型。